饮用天然矿泉水检验方法H文档格式.docx
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0331113317
0341313519
0351514011
040814113
041914215
0421114317
0431314419
0441514522
0451715013
050915115
0511115217
0521315319
0531515422
0541715524
055192005
10022017
表19
接种量,mLMPN/100mL接种量,mLMPN/100mL
202931527
2031232014
2041432117
2051632220
210732324
211932427
2121232531
2131433017
2141733121
2151933224
220933328
2211233432
2221433536
2231734021
2241934124
2252234228
2301234332
2311434436
2321734540
2332035025
2342235129
2352535232
2401535337
2411735441
2422035545
2432340013
2442540117
2452840221
2501740325
2512040430
2522340536
2532641017
2542941121
2553241226
300841331
3011141436
3021341542
3031642022
3042042126
3052342232
3101142338
3111442444
3121742550
3132043027
3142343133
续表19
43239514110
43345515130
4345252049
4345952170
4403452294
44140523120
44247524150
44354525180
4446253079
44569531110
45041532140
45148533180
45256534210
45364535250
45472540130
45581541170
50023542220
50131543280
50243544350
50358545430
50476550240
50595551350
51033552540
51146553920
512635541600
51384555>
1600
可饮用的矿泉水矿泉水出厂水或准备饮用的矿泉水,一般不应有污染,需要经常检验可按下法进行接种。
推测性检验
用10mL的灭菌吸管向5支盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液的试管中,每管接种10mL水样。
置36±
1℃培养箱中培养24h,观察每支管的产气情况,如有气体产生,则认为推测性检验阳性。
证实性检验
以下操作同矿泉水水源水检验。
MPN值的计算例如经过证实性检验后,大肠菌群有3管阳性,从表20查得MPN为/100mL。
表20用5管10mL水样时各种阳性和阴性结果组合的MPN值及其95%的可信限
阳性反应管数MPN/100mL95%可信限
下限上限
000
1
2
3
416
5>
16无限
滤膜法
测定范围本法适用于大肠菌群的测定。
方法提要滤膜是一种微孔薄膜,孔径为μm,能滤过大量水样,并将水中所含的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜贴在选择性鉴别培养基上,经37℃培养24h后,大肠菌群细菌在滤膜上长出具有特征性的菌落,直接计数典型菌落数,计算出每100mL水样中所含的大肠菌群数。
培养基和试剂
远藤琼脂（品红亚硫酸钠）培养基
成分蛋白胨10g酵母浸膏5g牛肉膏5g乳糖10g琼脂15～20g磷酸氢二钾无水亚硫酸钠5g5%碱性品红酒精溶液20mL蒸馏水1000mL
制法储备培养基的制备:
先将琼脂加到500mL蒸馏水中,煮沸溶解,于另一500mL蒸馏水中,加入磷酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏,加热溶解,倒入已溶解的琼脂,补足蒸馏水至1000mL,混匀后调PH为～,再加入乳糖,分装,115℃灭菌20min,储存于冷暗处备用。
平皿培养基的配制:
将上法配制的储备培养基加热融化,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红酒精溶液置于灭菌空试管中,再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌试管中,加灭菌水少许,使其溶解后,置沸水浴中煮沸10min以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红酒精溶液内至深红色褪成粉色为止。
将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储备培养基内,并充分混匀（防止产生气泡）,立即将此种培养基15mL倒入已灭菌的空平皿内。
待冷却凝固后置冰箱内备用。
此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。
如培养基已由淡粉色变成深红色,,则不能再用。
乳糖蛋白胨培养液
成分蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g氯化钠5g%溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mL
制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于蒸馏水中加热溶解,调pH为～,再加入%溴甲酚紫乙醇溶液,充分混匀,分装于装有倒管的试管中,以115℃20min高压灭菌,储备冷暗处备用。
革兰氏染色法
结晶紫染色液结晶紫1g95%酒精20mL1%草酸铵溶液80mL注:
结晶紫不可用龙胆紫代替,前者是纯品,后者不是单一成分,易出现假阳性。
结晶紫溶液放置过久会产生沉淀,不能再用。
革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加入其余的蒸馏水。
注:
当溶液由棕色变为淡黄色时即应弃去。
脱色剂:
95%乙醇。
沙黄复染液沙黄95%酒精10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于酒精中,待完全溶解后加入蒸馏水。
染色法
将培养18～24h的培养物涂片。
将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。
滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。
滴加脱色剂,摇动玻片,直至无紫色脱落为止,约30s,水洗。
滴加复染剂,复染1min,水洗,待干,镜检。
呈紫色者为革兰氏阳性菌;
呈红色者为革兰氏阴性菌。
仪器
滤器。
滤膜:
孔径为μm,直径根据滤器规格,目前常用的有和两种。
抽滤设备。
无齿镊子。
显微镜。
载玻片。
其他仪器同。
检验步骤
先将滤膜放入烧杯中,加入蒸馏水,置沸水浴中煮沸灭菌3次,每次15min。
前两次煮沸后需更换水,再蒸馏水洗涤2次,以除去残留溶剂。
用灭菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗面向上,贴放在已灭菌的滤床上,固定好滤器,加100mL水样,在负压大气压下抽滤。
水样滤完后,取下滤器,用灭菌镊子夹住滤膜边缘部分,移放到远藤培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡,然后将平皿倒置,放入37℃培养箱培养18～24h。
大肠菌群在远藤培养基上具有以下特征:
紫红色,具有金属光泽的菌落;
深红色,不带或略带金属光泽的菌落;
淡粉色,中心较深的菌落。
挑取可疑菌落涂片、染色、镜检。
凡系革兰氏阴性无芽胞杆菌,再接种乳糖蛋白胨培养液,经37℃培养24h后,如产酸产气则判定为大肠菌群阳性。
计算滤膜上的大肠菌群菌落数,以每100mL水样中的大肠菌群数报告之。
数出的总大肠菌群菌落数×
100
每100mL水中大肠菌群菌落数＝──────────────-………（97）
过滤的样品量（mL）
附录A饮用天然矿泉水参考指标检验方法（参考件）
A1铍
桑色素荧光分光光度法
测定范围本法适用范围为～μg/L,最低检测浓度为μg/L。
方法提要铍在碱性溶液中与桑色素反应生成黄绿色的荧光化合物,测定荧光强度定量。
低量的铍在pH5～8与乙酰丙酮形成可被四氯化碳萃取的化合物予以富集。
试剂
刚果红试纸。
盐酸溶液50g/L,1mol/L和6mol/L三种浓度。
氢氧化钠（40g/L）:
4g氢氧化钠溶于100mL纯水中。
乙二胺四乙酸二钠溶液（100g/L）:
称取10g乙二胺四乙酸二钠,置于50mL烧A
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