MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法.docx
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MMFSCNJ出口食品沙门氏菌属包括亚利桑那菌检验方法
MM_FS_CNJ_0335出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验
MM_FS_CNJ_0335
出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法
1.适用范围
本方法适用于冻猪肉、冻鸡肉、鸡蛋黄粉和冰鸡蛋白中沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验。
其他食品可参照使用。
2.样品制备及增菌培养
2.1.肉类
2.1.1.如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或在2~5℃不超过18h解冻。
若不能及时检验,应置于-15℃左右保存。
非冷冻而易腐的食品,置于4℃冰箱保存。
2.1.2.以无菌操作,称取剪碎后的瘦肉样品25g,置于灭菌均质杯内,加入25mL缓冲胨水增菌液,以8000~10000r/min均质1min,移入盛有200mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液,调pH至6.8±0.2,于37℃水浴培养4h(以增菌液达到37℃时算起),进行前增菌;其后,移取10mL转种于盛有100mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的250mL玻璃瓶内,摇匀,于42±1℃培养20±2h,进行选择性增菌。
必要时,同时另称取25g剪碎的瘦肉样品,加入25mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液,同样进行均质。
其后,移入盛有200ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液的500mL广口瓶内,混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养24±2h,进行直接选择性增菌。
2.2.蛋品
2.2.1.冰蛋品(冰鸡全蛋、冰鸡蛋白、冰鸡蛋黄)
2.2.1.1.按2.1.1解冻和保存样品。
2.2.1.2.以无菌操作称取样品25g,置于盛有225mL四硫磺酸盐煌绿增菌液的500mL广口瓶内混合均匀,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养24±2h,进行直接选择性增菌。
2.2.2.干蛋品(鸡全蛋粉、鸡蛋白片、鸡蛋白粉、鸡蛋黄粉)
以无菌操作将样品碾碎后,称取25g加入盛有225mL缓冲胨水增菌液的500mL广口瓶内(瓶内事先盛有直径3~4mm的玻璃珠约50粒),振荡10min,如pH低于6.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.2,于37℃培养20~24h,进行前增菌;其后,移取10mL转种于盛有100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液的250mL玻璃瓶内,混匀,于42±1℃培养20±2h,进行选择性增菌。
3.分离培养
3.1.将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm的接种环分别挑取1环,分别划线于表面无凝结水的亚硫酸铋和胆硫乳琼脂平板各一个(必要时亚利桑那菌琼脂平板可参照使用),于37℃培养24±2h。
3.2.观察各琼脂平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落,如无典型或可疑菌落,应再继续培养24±2h。
沙门氏菌属的菌落特征见表1。
表1.沙门氏菌属菌落特征
琼脂平板
菌落特征
沙门氏菌
亚利桑那菌
亚硫酸铋琼脂
棕褐色或灰色至黑色,有时有金属光泽,周围培养基呈棕色或黑色,有些菌株呈灰绿色,周围培养基不变或微变暗
黑色,周围培养基一般不变黑或微变黑,有些菌株呈灰绿色,带黑心或不带黑心
胆硫乳琼脂
无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色,有些菌株无色半透明
乳糖阴性菌株,相似于沙门氏菌菌落,乳糖阳性菌株为粉红色有暗色中心
亚利桑那菌琼脂
黄色有暗蓝色中心,周围培养基中有黄色沉淀物
粉红色有黑色中心,有时为全黑色,周围培养基呈红色,被发酵卫矛醇或蔗糖的细菌包围时,菌落边缘可为浅黄色
4.鉴定
4.1.筛选试验
4.1.1.每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落,分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼脂一管,接种后无须灭菌接种针,直接再接种三糖铁琼脂一管于37℃培养24±2h。
4.1.2.挑取菌落后的琼脂平板,应置于4~8℃至少保留24h,以备必要时复查。
4.1.3.按表2或表3结果进行判断。
表2.三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选
三糖铁琼脂
赖氨酸脱
羧酶培养基
初步判断
斜面
底层
产气
硫化氢
K
A
+(-)
+(-)
+
可疑沙门氏菌属
可疑沙门氏菌属
可疑亚利桑那菌
非沙门氏菌属
非沙门氏菌属
K
A
+(-)
+(-)
-
A
A
+(-)
+(-)
+
A
A
+(-)
+(-)
-
K
K
+/-
+/-
+/-
注:
K-产碱;+-阳性反应;(-)-少见反应;A-产酸,——阴性反应;+/——阳性或阴性反应。
表3.三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选
三糖铁琼脂
尿素酶琼脂
初步判断
斜面
底层
产气
硫化氢
K
A
+(-)
+(-)
-
可疑沙门氏菌属
A
A
+(-)
+(-)
-
可疑亚利桑那菌
K
A
+(-)
+(-)
+
非沙门氏菌属
A
A
+(-)
+(-)
+
非沙门氏菌属
K
K
+/-
+/-
+/-
非沙门氏菌属
注:
K-产碱;+-阳性反应;(-)-少见反应;A-产酸;-阴性反应;+/--阳性或阴性反应。
4.2.生化试验
4.2.1.将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物,按表4进行生化试验(表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见4.1结果,不再另做)。
表4.沙门氏菌属生化反应
序号
生化项目
反应
沙门氏菌
亚利桑那菌
1
尿素酶试验
-
-
2
V-P试验
-
-
3
氰化钾试验
-
-
4
赖氨酸脱羧酶试验
+
+
5
吲哚试验
-
-
6
丙二酸钠试验
-
+
7
卫矛醇试验
d
-
注:
+-阳性反应;--阴性反应;d-反应不定。
4.2.2.所有生化试验管均于37℃培养24±2h。
4.2.3.生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按4.3进行。
4.3.血清学试验
4.3.1.检查培养物有无自凝性
在洁净的玻片上加一滴生理盐水,将待试培养物混合于生理盐水滴内,使成为均一性的混蚀悬液,将玻片轻轻摇动30~60s,在黑色背景下观察反应(最好用放大镜观察)。
如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物,即认为有自凝性。
反之无自凝性。
4.3.2.检查“O”抗原
对无自凝性的培养物,按照4.3.1的程度进行试验,但以多价“O”血清代替生理盐水,在2min内判断结果。
如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验。
如为阴性结果,必要时,可结合4.2结果按4.3.3进行试验,再以多价和单价“O”血清进行试验。
4.3.3.检查“Vi”抗原
按照4.3.1的程序进行,但以“Vi”血清代替生理盐水。
4.4.根据4.2和4.3试验结果,按照表5进行判定。
表5.沙门氏菌属生化试验与血清学试验结果判定
类别
生化试验
血清学试验
其他试验
判定
1
符合表4中沙门氏菌生化特性
“O”因子血清分群阳性
沙门氏菌
2
符合表4中沙门氏菌生化特性
“O”因子血清分群阴性
菌落典型,镜检革蓝氏阴性无芽胞杆菌
沙门氏菌
3
尿素酶试验阳性
非沙门氏菌
4
尿素酶试验阴性,表4生化反应3~5项中任一项不符合沙门氏菌特性
“O”因子血清分群阳性
沙门氏菌
5
尿素酶试验阴性,表4生化反应2~5项中任一项不符合沙门氏菌特性
“O”因子血清分群阴性
非沙门氏菌
6
尿素酶试验阴性,表4生化反应2~5项中任二项或二项以上不符合沙门氏菌特性
非沙门氏菌
7
符合表4中亚利桑那菌生化特性
“O”因子血清分群阳性
亚利桑那菌
8
符合表4中亚利桑那菌生化特性
“O”因子血清分群阴性
菌落典型,镜检革蓝氏阴性无芽胞杆菌
亚利桑那菌
9
尿素酶试验阳性
非亚利桑那菌
10
尿素酶试验阴性,表4.生化反应3~5项中任一项不符合亚利桑那菌特性
“O”因子血清分群阳性
亚利桑那菌
11
尿素酶试验阴性,表4.生化反应2~5项中任一项不符合亚利桑那菌特性
“O”因子血清分群阴性
非亚利桑那菌
12
尿素酶试验阴性,表4生化反应2~5项中任两项或两项以上不符合亚利桑那菌特性
非亚利桑那菌
注:
1丙二酸钠试验阴性,卫矛醇试验反应不定的菌株,按上述1~6类别结果进行判断。
2丙二酸钠试验阳性,卫矛醇试验阴性的菌株,按上述7~12类别结果进行判断。
3如以上生化项目仍不能判定时,可按P·R·爱德华,W·H·爱文:
《肠杆菌科的鉴定》(1978中译本),扩大必要的生化试验。
结合血清学作综合判定。
5.报告结果
5.1.报告阳性结果:
“发现沙门氏菌”或“发现亚利桑那菌”或“发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
5.2.报告阴性结果:
“未发现沙门氏菌”或“未发现亚利桑那菌”或“未发现沙门氏菌和亚利桑那菌”。
6.培养基
6.1.营养肉汤(NB)
蛋白胨
10.0g
酵母膏
3.0g
氯化钠
5.0g
葡萄糖
1.0g
蒸馏水
1000.0mL
将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.5±0.1,分装试管(12mm×100mm),每管约3mL高压灭菌121℃,15min。
6.2.营养琼脂(NA)
蛋白胨
10.0g
酵母膏
3.0g
氯化钠
5.0g
葡萄糖
1.0g
琼.脂
12.0g
蒸馏水
1000.0mL
将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.5±0.1,分装试管(12mm×100mm),每管约3mL,高压灭菌121℃,15min。
6.3.缓冲胨水增菌液(BP)
蛋白胨
10.0g
氯化钠
5.0g
磷酸氢二钠(含12个结晶水)
9.0g
磷酸二氢钾
1.5g
蒸馏水
1000.0mL
将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.2±0.1高压灭菌121℃,15min,临用时,以无菌操作分装灭菌玻璃瓶,每瓶200mL或225mL。
6.4.亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
蛋白胨
5.0g
乳糖
4.0g
磷酸氢二钠(含12个结晶水)
10.0g
亚硒酸氢钠
4.0g
L-胱氨酸
0.01g
蒸馏水
1000.0mL
除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,加热煮沸5min至完全溶解,冷至55℃以下,以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1g/1L-胱氨酸溶液……胱氨酸溶液10mL(称取0.1gL-胱氨酸,加1mol/L氢氧化钠溶液15mL,使溶解,再加灭菌蒸馏水至100mL即成,如为DL-胱氨酸,用量应加倍)。
摇匀,调至pH7.0±0.1,以无菌操作分装灭菌玻璃瓶内,每瓶100mL或200mL。
6.5.四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB)
6.5.1.基础液
蛋白胨
10.0g
牛肉膏
5.0g
氯化钠
3.0g
碳酸钙
45.0g
蒸馏水
1000.0mL
除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,再加入碳酸钙,调至pH7.0±0.1高压灭菌121℃,20min。
6.5.2.硫代硫酸钠溶液
硫代硫酸钠(含5个结晶水)
50.0g
蒸馏水
加至100.0mL
高压灭菌121℃,20min。
6.5.3.碘溶液
碘片
20.0g
碘化钾
25.0g
蒸馏水
加至100.0mL
将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中,再投入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解为止,然后加蒸馏水至规定的总量,贮存于褐色瓶内,塞紧瓶盖备用。
6.5.4.煌绿水溶液
煌.绿
0.5g
蒸馏水
100.0mL
溶解后,存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌。
6.5.5.牛胆盐溶液
牛胆盐
10.0g
蒸馏水
100.0mL
加热煮沸至完全溶解,高压灭菌121℃,20min。
6.5.6.制备
基础液
900.0mL
硫代硫酸钠溶液
100.0mL
碘溶液
20.0mL
煌绿水溶液
2.0mL
牛胆盐溶液
50.0mL
临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分。
最后分装于灭菌玻璃瓶内,每瓶100mL或225mL。
6.6.亚硫酸铋琼脂(BS)
蛋白胨
10.0g
牛肉膏
5.0g
葡萄糖
5.0g
硫酸亚铁
0.3g
磷酸氢二钠
4.0
煌绿
0.025g或5g/L水溶液5mL
柠檬酸铋铵
2.0g
亚硫酸钠
6.0g
琼脂
18.0g
蒸馏水
1000.0mL
将前三种成分加入300mL蒸馏水(制作基础液),硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20mL和30mL蒸馏水中,柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20mL和30mL蒸馏水中,琼脂加入600mL蒸馏水中。
然后分别搅拌均匀,静置约30min,加热煮沸至完全溶解。
冷至80℃左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液中,混匀。
将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混匀。
调至pH7.5±0.1,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50~55℃。
加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿,每皿约20mL。
本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,新配制的培养基呈玉白色不透明,贮于室温暗处,超过48h会降低其选择性,本培养基宜于当天制备,第二天使用。
6.7.胆硫乳琼脂(胆盐.硫化氢.乳糖琼脂.DHL)
蛋白胨
20.0g
牛肉膏
3.0g
乳糖
10.0g
蔗糖
10.0g
牛胆盐
2.0g
硫代硫酸钠
2.2g
柠檬酸钠
1.0g
柠檬酸铁铵
1.0g
中性红
0.03g或5g/L水溶液6mL
琼.脂
16.0g
蒸馏水
1000.0mL
除中性红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.3±0.1。
另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解。
将两种溶液混合后,再加入5g/L中性红水溶液6mL,搅拌均匀,冷至50~55℃,倾注平皿,每皿约20mL。
本培养基不需高压灭菌,也不再进行任何加热。
制成的平板为橙黄色。
6.8.亚利桑那菌琼脂(SA)
蛋白胨
12.g
酵母膏
3.0g
牛胆盐
9.0g
蔗糖
12.0g
丙二酸钠
6.0g
卫矛醇
20.0g
葡萄糖
1.0g
氯化钠
5.0g
硫代硫酸钠
5.0g
柠檬酸铁铵
1.5g
酚红
0.04g或5g/L溶液8mL
琼脂
14.0g
蒸馏水
1000.0mL
除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.1±0.1。
将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,冷至约90℃,将上述溶液加入琼脂中,摇匀,再加入酚红指示剂,混匀,冷至50~55℃,倾注平皿,每皿约20mL。
本培养基不需高压灭菌,制成的平板为透明桔红色。
6.9.三糖铁琼脂(TSI)
蛋白胨
20.0g
牛肉膏
3.0g
乳糖
10.0g
蔗糖
10.0g
葡萄糖
1.0g
硫酸亚铁铵(含6个结晶水)
0.5g
酚红
0.025g或5g/L溶液5mL
氯化钠
5.0g
硫代硫酸钠
0.5g
琼脂
12.0g
蒸馏水
1000.0mL
除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。
另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解。
将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2~4mL,高压灭菌121℃10min或115℃15min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。
6.10.赖氨酸脱羧酶培养基(LD)
酵母膏
3.0g
葡萄糖
1.0g
L-赖氨酸
5.0g
溴甲酚紫
0.016g或8g/L溶液2mL
蒸馏水
1000.0mL
除溴甲酚紫外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH6.7±0.1,加入溴甲酚紫,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管1~1.5mL,高压灭菌121℃,15min。
试验与判断:
接种待试菌,于37℃培养24±2h。
阳性反应为紫色,阴性为黄色。
6.11.尿素酶琼脂(U)
蛋白胨
1.0g
葡萄糖
1.0g
尿素
20.0g
氯化钠
5.0g
磷酸二氢钾
2.0g
酚红
0.012g或5g/L溶液2.5mL
琼脂
15.0g
蒸馏水
1000.0mL
除酚红和尿素外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7±0.1,高压灭菌121℃,15min,冷至50~55.,以无菌操作加入尿素20g(400g/L已经除菌过滤的尿素溶液50mL)和5g/L酚红溶液2.5mL,混匀,分装灭菌试管(12mm×100mm),每管2~3mL,置成斜面。
试验与判断:
大量接种待试菌于37℃培养24±2h,强阳性反应为深红色,弱阳性为粉红色,阴性为黄色或不变色。
6.12.V-P半固体琼脂(VP)
6.12.1.制备
蛋白胨
12.0g
酵母膏
1.0g
葡萄糖
10.0g
氯化钠
5.0g
琼.脂
3.0g
蒸馏水
100.0mL
将各成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.3±0.1,分装试管(12mm×100mm),每管1~1.5mL,高压灭菌121℃,10min,灭菌后立即取出冷却备用。
6.12.2.试验判断
6.12.2.1.配制试剂
甲液:
α-萘酚
6.0g
无水乙醇溶液
100.0mL
乙液:
氢氧化钾
40.0g
肌酸
0.3g
蒸馏水
100.0mL
先将氢氧化钾溶于水中,再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4℃冰箱内,可使用2个月。
6.12.2.2.试验
接种幼嫩待试菌,于37℃培养24±2h,将甲液0.2mL(约6滴)加入试管中,摇混均匀,再加乙液0.1mL(约3滴),再摇混均匀。
6.12.2.3.判断
阳性反应立即或在15min内呈现红色,阴性为铜色。
阴性结果在1h后再做一次检查。
有些试管在数小时后红色会逐渐消失,此仍作阳性反应。
6.13.吲哚培养基
(1):
6.13.1.制备
蛋白胨
10.0g
氯化钠
5.0g
DL-色氨酸
1.0g
蒸馏水
1000mL
除DL-色氨酸外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min。
另将DL-色氨酸加入约4mL1mol/L氢氧化钠溶液中,待溶解后,再将两液进行混合并加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1,分装试管(12mm×100mm),每管1~1.5mL,高压灭菌121℃,15min。
6.13.2.试验与判断
6.13.2.1.配制试剂
柯凡克试剂:
对二甲氨基苯甲醛
10.0g
戊醇
150.0mL
浓盐酸
50.0mL
将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中,缓慢搅拌加入盐酸,加热至60℃,呈深黄色,静置6~7h,变成黄色即可使用。
试液宜小量配制,不用时保存于4℃冰箱内。
久存后试液变成褐色不可使用。
6.13.2.2.试验
接种待试菌,于37℃培养24±2h,滴加柯凡克试剂0.1mL。
6.13.2.3.判断
阳性反应出现红色环;阴性为黄棕色环。
6.14.氰化钾培养基(KCN)
6.14.1.制备
蛋白胨
10.0g
氯化钠
5.0g
磷酸二氢钾
0.225g
磷酸氢二钠
5.64g
硝酸钾(无亚硝酸盐)
1.0g
5g/L氰化钾溶液
10.0mL
蒸馏水
1000.0mL
将蛋白胨、氯化钠和硝酸钾加入900mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.6±0.1,高压灭菌121℃,15min,取出置于4℃冰箱内进行冷却。
将磷酸二氢钾、磷酸氢二钠溶于100mL蒸馏水,高压灭菌121℃,15min,取出进行冷却。
在冷却后的上述培养液900mL中,以无菌操作加入磷酸缓冲液100mL和5g/L氰化钾溶液(必须用冷却的灭菌蒸馏水配制)10mL,摇混均匀(氰化钾的最终浓度为0.05g/L)。
并立即分装灭菌试管(12mm×100mm),每管约1~1.5mL,同时加入约0.3mL灭菌石蜡油封盖。
在4℃冰箱中可保存7d。
6.14.2.试验与判断
6.14.2.1.配制试剂
甲液:
氨基苯磺酸
0.8g
5mol/L乙酸
100.0mL
乙液:
α-萘胺
0.5g
5mol/L乙酸
100.0mL
6.14.2.2.试验
在三糖铁琼脂斜面上挑取少量菌苔,先接种于吲哚培养基中,混匀(使其浓度近似于37℃,24h肉汤培养物)然后烧灼接种环,再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中,于37℃培养24±2h。
培养之后,先观察培养液有无混浊,然后在每支氰化钾培养物试管内滴加甲液1滴,然后再滴加乙液1滴,摇匀。
6.14.2.3.判断
强阳性反应为鲜红色,弱阳性为粉红色,在30~60min内,强阳性可转为暗褐色。
阴性无变化(加试剂前,培养液出现混浊,即有细菌生长,亦为阳性反应)。
6.15.丙二酸钠培养基(M)
酵母膏
1.0g
硫酸铵
2.0g
磷酸氢二钾
0.6g
磷酸二氢钾
0.4g
氯化钠
2.0g
丙二酸钠
3.0g
葡萄糖
0.25g
溴麝香草酚蓝
0.025g或5g/L溶液5mL
蒸馏水
1000.0mL
除溴麝香草酚蓝外,将其他成分加入蒸馏水中搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH6.9±0.1,加入溴麝香草酚蓝,再混匀,分装试管(12mm×100mm),每管1~1.5mL,高压灭菌115℃,10min。
试验与判断:
接种大量幼嫩待试菌,于37℃培养24±2h,阳性反应为普蓝色;阴性不变色。
6.16.卫矛醇半固体琼脂(D)
蛋白胨
2.0g
酵母膏
1.0g
卫矛醇
10.0g
氯化钠
5.0g
磷酸氢二钾
0.3g
溴麝香草酚蓝
0.08g或8g/L溶液10mL
琼.脂
2.5g
蒸馏水
1000.0mL
除溴麝香草酚蓝外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.1±0.1,加入溴麝香草酚蓝,呈绿色,分装试管(12mm×100mm),每管约1~1.5mL,高压灭菌121℃,15min,灭菌后立即取出,冷却备用。
试验与判断:
穿刺接种待试菌,于37℃培养24±2h,阳性反应为黄色阴性不变色。
注:
新制备的培养基均应用已知阳性及阴性菌进行测试,以保证培养基质量。
7.来源:
SN01