人体解剖生理学实验指导汇总.docx

人体解剖生理学实验指导汇总.docx

《人体解剖生理学实验指导汇总.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《人体解剖生理学实验指导汇总.docx（77页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

人体解剖生理学实验指导汇总

人体解剖生理学

实验指导生物医学工程学院基础教研室

2011年5月

目录

第一章显微镜的使用和基本组织的观察..........................................................1第二章神经与肌肉实验.................................................................................13第三章蛙心实验............................................................................................25第四章血型鉴定、血压测量和心音听诊........................................................32第五章急性动物实验操作技术（示教........................................................37第六章呼吸运动的调节.................................................................................51第七章动脉血压和尿量的调节......................................................................57第八章自主设计实验.....................................................................................61第九章人体实体观察.....................................................................................63

第一章显微镜的使用和基本组织的观察一、显微镜的使用方法

图1.1显微镜的结构

1.对照图片,结合实物,熟悉显微镜的构件,掌握显微镜光学部分和机械部分的正确使用方法。

2.将显微镜轻轻地移至观察者的前方,使镜座的前缘距实验台边缘大约5~10公分。

3.旋开显微镜电源开关（显微镜座左后侧转轮,光线亮度适当。

4.旋转物镜‘转换器’,将10倍物镜旋至镜筒下方,对准‘载物台’中央的孔。

5.打开‘聚光镜孔径光栏’,可见光线经‘集光镜’→‘聚光镜孔径光栏’→‘聚光镜’→‘载物台’中央的孔→10倍物镜→目镜。

6.注意身体坐姿,睁开双眼,把观察注意力集中于显微镜的视场内,可见两个不完全重合的视场光斑,双手推移两目镜,使两光斑合二为一。

7.按照实习指导和切片标本目录,从标本盒内取出要观察的标本,进行肉眼观察,初步了解该标本的大小、形状和染色等。

8.将载玻片放在载物台上,盖玻片朝上,标签位右侧,用弹夹夹好。

旋转‘弹夹移动旋钮’,将载玻片上的组织标本移至物镜下方。

调节镜座左侧的转轮（即电源开关,将视野亮度调至适中。

在右手旋转‘弹夹移动旋钮’,移动切片的同时,左手慢慢地旋转镜臂下部的大、小‘手轮’聚焦（先旋大手轮后旋小手轮。

做到左、右手配合,双目观察标本。

9.显微观察标本常规是从低倍放大开始,这样视场大,有利于对标本进行全面观察。

使

用低倍物镜（X10时,观察者左手转动大手轮,使载物台缓慢上升或下降,同时,观察者用双眼从目镜中观察视场,当见到组织标本像轮廓时,转动小手轮直至组织标本像清晰。

10.当要进一步放大观察时,则直接旋转物镜‘转换器’,将40倍物镜旋至镜筒下方。

此时,只需转动小手轮调焦（必要时升降聚光器或调节聚光镜光栏的孔径,便可获得更清晰的进一步放大的标本像。

在不同切片和不同放大倍数下观察时,应注意随时调节亮度,使之最适宜。

11.移动切片观察时,要注意片中组织标本与镜像方位完全相反。

二维标本像与其多维的关系,详见切片物像的理解及图示。

12.观察完一张切片后,应回忆总结一下在该片中辨认了几种细胞、组织、结构或该器官的特征性结构,每片如此积累,可以大大提高阅片能力和学习效率。

二、组织切片制作的一般过程

目的要求

★了解石蜡切片HE染色法的基本过程。

★通过了解切片制作,加深对局部与整体,平面与立体关系的理解。

常用的教学标本是石蜡切片,苏木精（hematoxylin,以H代表和伊红（eosin,以E代表染色,即HE染色。

现将其制作方法简述于下:

1.取材与固定取材愈新鲜愈好,材料大小以0.5cm3为宜,放入固定剂内,固定6~

24小时。

固定的目的是使细胞内的蛋白质凝固,以便保持组织原来的结构和成分。

但是,经固定后组织的结构与生活状态下的结构仍有很大差异,可能造成“人工假象”。

常用的固定剂有多种,兹例举两种如下。

（110%福尔马林（formalin取37~40%甲醛水溶液10毫升,加入水90毫升,即配成10%福尔马林。

多用于大块组织的固定,如外科手术取的材料。

组织块大小与固定剂体积之比,一般为1∶20。

（2Bouin液是一种混合固定剂,取饱和苦味酸水溶液75毫升、37~40%甲醛水溶液25毫升和冰乙酸5毫升,三者混合均匀并过滤。

临用前配成。

以含苦味酸的固定剂固定的组织标本,需经70%酒精充分洗涤,尽量除去苦味酸对组织的黄染。

2.脱水组织标本需包埋在硬的石蜡内才能切成薄片,但是,经固定后的组织内含有水,石蜡不能透入,故需脱水。

常用的脱水剂是酒精。

为避免组织突然进入无水酒精内产生强烈收缩,需采用升梯度酒精（70%→80%→90%→95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ,在不同浓度酒精内的时间长短,则视组织块大小而定。

3.透明组织标本经酒精脱水后,其内含有酒精,酒精与石蜡仍互不相溶,故组织标本还需进行透明处理。

透明是用既能与酒精又能与石蜡溶合的透明剂（常用二甲苯渗入组织内,完全渗透后,组织呈透明状,即可将组织浸泡在预温、溶化的石蜡内,即浸蜡。

4.包埋组织标本依次在（60℃的温箱内软蜡和硬蜡中各浸泡1~2小时。

待石蜡充分渗入组织后,将浸有组织的蜡碟从温箱中拿出,等蜡冷却凝固后,即可修块,准备切片。

5.切片用切片机将包埋有组织的蜡块切成薄片,一般切片厚度为4~7µm。

6.贴片用适当温度的温水,先将组织片展平,再将它捞在预先涂有粘片剂的载玻片上,放在烤箱内（37℃~45℃烤干（24h。

7.染色在进入染色液之前,组织切片需先用二甲苯脱蜡两次,然后,用纯酒精清除去二甲苯。

由于染色液是水溶液,需经下降梯度酒精（100%→95%→85%→80%→70%,再进入蒸馏水中稍洗方可入染色液中染色。

苏木精碱性染料将细胞核内的染色质和胞质内的核

蛋白体等物质染成紫兰色,这种染色特性,称嗜碱性（basophil。

入苏木精液染数分钟后,用自来水流洗;0.5~1%盐酸酒精分色数秒至几十秒钟,经自来水洗后入伊红染液中染色。

伊红是酸性染料,能将细胞内的普通蛋白质和细胞外的一些结构染成红色,这种染色特性,称嗜酸性（acidophil。

8.脱水、透明和封片用升梯度酒精（70%→80%→90%→95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ脱水;二甲苯透明;中性树脂封片,晾干保存。

三、如何观察和理解切片物像

观察切片的步骤应养成由肉眼到低倍,再到高倍,系统观察标本的习惯。

先要了解标本的取材部位、制片方法、切片方位和染色方法,再从宏观到微观,由浅入深逐步观察组织、细胞的微细结构。

在掌握组织、细胞光镜结构的基础上,可结合观察某些细胞或结构的电镜照片,并联系机能融会贯通深入理解。

正确理解切片的立体形象人体结构极为复杂,就同一个器官或细胞来说,所切的部位不同或者所切的方向不同,则切片所显示的物像就不相同。

我们将一个煮熟的鸡蛋示意为一个细胞,通过不同方向和部位所作的各种切面,则可得到不同的物像,如图1所示。

若对呈辐射状排列的细胞群体作各种切面,其各种物像如图2所示。

若对呈管状的器官作各种切面,其形状如图3、4所示;若对呈束状的器官作各种切面,其形状如图5所示。

切片中的人为现象在切片中出现的一些人为假象,并非组织结构,应予鉴别。

①刀痕因切片刀锋有缺口造成组织标本纵行刀痕。

②裂纹组织透明、浸蜡的时间过长,组织脆硬,切片时可引起组织裂开,呈不规则裂纹。

在制片过程中,由于组织或细胞各部分结构的收缩不一致,或贴片时水温过高,也可导致某些人为裂隙。

③皱褶贴片时组织未充分展平。

④气泡封片时将少许空气封入切片树胶中。

⑤异留物如染色时残留的染料沉渣等。

图1.2鸡蛋的各种断面

图1.3辐射状排列的细胞群的各种断面

图1.4弓形管状结构的各种断面

图1.5管状器官的各种断面

图1.6束形器官的各种断面四、上皮组织（EpithelialTissue目的要求:

1.掌握上皮组织的一般特点和分类。

2.掌握各种被覆上皮的结构特点。

3.了解腺的分类,两种外分泌腺细胞的结构特点。

4.熟悉微绒毛和纤毛的超微结构特点和功能。

5.掌握各种细胞连接的超微结构特点和功能。

6.熟悉基膜的位置、光镜结构、超微结构和功能。

单层扁平上皮（simplesquamousepithelium6号

大网膜（铺片镀银法

取动物大网膜经硝酸银溶液浸染,剪成小块平铺于载玻片上而制成。

用其观察单层扁平上皮（simplesquamousepithelium的表面形态结构。

〔4倍物镜〕选择大网膜铺成单层而背景较清楚的部分观察。

〔10倍物镜〕上皮细胞呈不规则形或多边形,相邻细胞之间有棕黑色的硝酸银颗粒沉积,并绘出细胞的轮廓。

细胞核被苏木素染液染成蓝色。

〔40倍物镜〕细胞之间的硝酸银颗粒较大且多,故着色深;胞质内的硝酸银颗粒细小而分散。

细胞核呈椭圆形,着蓝色。

细胞内椭圆形空白区,是该细胞核已脱落所遗留的间隙。

单层扁平上皮（simplesquamousepithelium46号

空肠HE

〔4倍物镜〕这是空肠的纵切面组织标本,平坦的一边是空肠的外表面,被覆单层扁平上皮。

有大小突起的一边是空肠的腔面,小突起表面被覆单层柱状上皮。

择标本平坦的一侧,换成10倍物镜观察单层扁平上皮。

〔10倍物镜〕在标本平坦边上,有一些虚线样的紫蓝色的点状结构,此即单层扁平上皮细胞核。

有的部位细胞核排列成曲线,有的部位细胞核排列成直线,换40倍物镜进一步观察。

〔40倍物镜〕单层扁平上皮细胞核的侧面观,呈扁椭圆形或卵圆形,胞核的长轴与上皮的表面平行。

上皮细胞呈薄片状,可见胞核周围少量的嗜酸性胞质。

单层立方上皮（thyroidgland74号

甲状腺HE

〔10倍物镜〕可见组织标本中有许多大小不等的甲状腺滤泡（thyroidfollicle,呈圆形或多边形,由单层滤泡上皮细胞（follicularepithelialcell围成。

滤泡腔内有染成红色的胶质,滤泡上皮附近处的胶质常呈许多未着色的小空泡,是滤泡上皮细胞吞饮胶质滴所致。

胶质中出现波浪状裂纹,由于制片所致。

在甲状腺滤泡之间有滤泡旁细胞和少量结缔组织。

〔40倍物镜〕滤泡上皮细胞多为立方形、胞质弱嗜碱性,胞核呈圆形、着色浅。

滤泡旁细胞（parafollicularcell见于滤泡上皮内或滤泡之间,细胞呈圆形或卵圆形,细胞体积较滤泡上皮细胞的大,胞质着色浅,胞核大而圆。

位于滤泡上皮细胞之间的滤泡旁细胞,其细胞顶部常被邻近的滤泡上皮细胞掩盖,不与胶质接触。

位于滤泡之间的滤泡旁细胞团应与‘壁切’滤泡上皮细胞的相区别。

在甲状腺滤泡之间的结缔组织内可见毛细血管网的断面。

单层柱状上皮（simplecolumnarepithelium46号

空肠HE

〔4倍物镜〕找到空肠有大小突起的一边,小突起表面被覆单层柱状上皮。

〔10倍物镜〕指状突起表面所被覆的组织是单层柱状上皮（simplecolumnarepithelium,细胞核呈长椭圆形或杆状,众多的细胞核紧密排列成一层。

有些部位的上皮细胞核聚集成堆或排成多层,因该处众多的上皮细胞被斜切所致。

少数细胞核上部的胞质呈圆形空泡状,该细胞是杯状细胞（gobletcell。

选择细胞核排列成单层的部位,换40倍物镜观察。

〔40倍物镜〕小肠单层柱状上皮的游离面有条红色的带状结构,称纹状缘（striatedborder（它与微绒毛有何关系?

。

柱状的上皮细胞紧密排列成一层,细胞间的界限不清楚。

但是,可根据细胞核呈长椭圆形或长杆状,并排列为一排,即可推断该上皮是由单层的柱状细胞组成（一般而论,细胞核的形态是与该细胞的形状相适应的。

细胞核的长轴与细胞的长轴一致,偏居细胞的基底部。

在柱状的上皮细胞间可见杯状细胞,其外形似高脚酒杯,细胞核上部的胞质内有个圆形或椭圆形的空泡区（此处胞质内的粘原颗粒在制片过程中不易保存,致使分泌颗粒所在区着色很浅;细胞游离面的纹状缘中断;细胞核常呈三角形或杆状,着色深蓝色,位于细胞基底部。

假复层纤毛柱状上皮（pseudostratifiedciliatedcolumnarepithelium54号气管HE

〔4倍物镜〕气管横切面的组织标本,呈环形,凹面（即气管腔面被覆假复层纤毛柱状上皮。

标本中间着蓝色的宽环带为透明软骨。

〔10倍物镜〕观察气管腔面被覆的假复层纤毛柱状上皮（pseudostratifiedciliatedcolumnarepithelium,细胞核紧密排列成数层,染成蓝色。

选择层次结构较清晰的部位,换成40倍物镜观察。

〔40倍物镜〕上皮游离面有呈簇状或成排的红色细丝,即纤毛（cilia。

纤毛所在的细胞,是纤毛细胞（ciliatedcell。

细胞上半部呈柱状,下半部纤细。

纤毛细胞核呈椭圆形,位于多层上皮细胞核的浅层。

柱状的纤毛细胞间夹有杯状细胞。

深层的细胞核多呈圆形,着色较浅,胞质很少且不清楚,此即锥体形细胞。

其他的细胞多数是梭形细胞,细胞核圆形,位于多层胞核的中间层。

侵入上皮内的小淋巴细胞,胞核小而圆,着色很深。

上皮的基膜,着淡红色,很薄,呈细线状。

未角化复层扁平上皮（nonkeratinizedstratifiedsquamousepithelium（复层鳞状上皮43号食管HE

〔4倍物镜〕这是食管横切面组织标本,管腔不规则,近腔面紫红色的弯曲环带即为未角化复层扁平上皮。

〔10倍物镜〕食管腔面的未角化复层扁平上皮（nonkeratinizedstratifiedsquamousepithelium,细胞层次多,各处厚薄不一。

基底层的细胞质呈强嗜碱性,趋向上皮浅表层,细胞质呈嗜酸性。

上皮的基部起伏不平,在其深部,染浅红色的结缔组织呈指状或乳头状凸向上皮。

（这种构型有什么重要作用?

〔40倍物镜〕浅层的上皮细胞呈扁平状或鳞片状,胞质着淡红色,胞核小,呈扁卵圆形,与上皮表面平行。

中间层的上皮细胞呈多边形,细胞界限较清楚。

丰富的胞质呈嗜酸性,胞核呈圆形或卵圆形。

基底层细胞呈矮柱状,胞核呈椭圆形,细胞质少,强嗜碱性。

上皮的基部,有薄层的嗜酸性基膜。

角化的复层扁平上皮（keratinizedstratifiedsquamousepithelia56号手指皮HE

〔4倍物镜〕该标本为人末节手指掌侧面的皮肤及皮下组织的横切面,弧形面被覆角化的复层扁平上皮。

〔10倍物镜〕角化的复层扁平上皮（keratinizedstratifiedsquamousepithelium,由深至表分为五层:

基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。

角化的复层扁平上皮与未角化复层扁平上皮之间的最主要不同点,是前种上皮的浅表层细胞界限模糊,细胞核消失,胞质嗜酸性,即已角化。

其次不同点,颗粒层内含嗜硷性颗粒。

变移上皮（transitionalepithelium60号

（空虚状态膀腔HE

〔4倍物镜〕染色深的一边是膀胱的腔面,即与尿液接触面,被覆变移上皮。

〔10倍物镜〕变移上皮（transitionalepithelium较厚,上皮细胞层次多,表层的细胞体积大。

上皮与结缔组织交界面较平坦。

〔40倍物镜〕自上皮的表层向基底层方向顺次观察。

表层的细胞体积大,呈立方形或长方形,细胞核呈圆形或椭圆形,有的细胞含两个细胞核。

细胞质丰富,嗜酸性,染色较红。

中间层的细胞呈倒置的梨形,细胞核呈圆形。

基底层的细胞核呈卵圆形或圆形。

变移上皮与结缔组织之间隔有基膜。

当膀胱充盈时,变移上皮的厚度和构型将会发生什么的变化?

见膀胱59号HE。

五、结缔组织

目的要求:

1.了解结缔组织的特点和分类。

2.掌握疏松结缔组织各种成分的结构和功能。

3.了解致密结缔组织、脂肪组织和网状组织的基本结构特点。

疏松结缔组织（looseconnectivetissue12号

活体染色铺片

给动物注射消毒过的苔盼蓝染料,让其存活数天。

在麻醉状态下,取其皮下的疏松结缔组织铺于载玻片上,经固定和醛复红-伊红染色等制片程序而制成本片。

〔10倍物镜〕选择细胞和纤维均较疏散且清楚的部位观察。

细胞质内含较多蓝色颗粒的细胞,是巨噬细胞（macrophage。

染色深的细丝,是弹性纤维（elasticfiber。

染成

粉红色的条带,是胶原纤维（collagenfibers。

胶原纤维有分支。

胶原纤维和弹性纤维互相交织成疏网状。

〔40倍镜〕巨噬细胞胞质内有较多的蓝色染料颗粒（为什么?

。

细胞形态不规则,细胞核呈圆形或卵圆形,染成深红色（并非细胞核呈嗜酸性。

弹性纤维细而直,与同头发丝,着紫红色。

有的弹性纤维末端呈卷曲状。

胶原纤维较粗,染成粉红色,有的呈分支状。

适当地调暗光亮度,胶原纤维的可见度会有所增加。

疏松结缔组织（looseconnectivetissue43号

食管HE

〔4倍物镜〕食管壁由内向外分四大层,即粘膜、粘膜下层、肌层和外膜。

粘膜肌层和肌层均被染成深红色,在两层之间的较宽环形区域,其结构疏松,着浅红色的的组织,即疏松结缔组织,或称蜂窝组织（areolartissue。

其中含血管和少量脂肪组织等。

〔10倍物镜〕疏松结缔组织排列疏松,着浅粉红色。

纤维粗细不等,其长短不一,排列方向不定,互相交织成疏网状。

形状不同的蓝色小点,是疏松结缔组织中的细胞核。

纤维和细胞间的空白处,即为基质所在部位。

在疏松结缔组织内有大小不等的管状结构,主要是血管。

偶见食管腺的导管和腺泡（属什么组织?

腺泡是什么性质的?

。

〔40倍镜〕在切片中所见的纤维主要是胶原纤维（为什么?

着粉红色。

疏松结缔组织的细胞种类虽多,但本片常见的细胞是纤维细胞（fibrocyte,细胞核较小,呈长椭圆形,着色较深,细胞质甚少。

若有胶原纤维与其紧邻,则纤维细胞和纤维之间无明显的界限。

有些细胞核较大,扁卵圆形,着色浅,可见核仁,胞质较多,此即成纤维细胞（fibroblast。

网状纤维（reticularfiber37-B

脾浸银法

〔10倍物镜〕标本内部可见着深棕色或黑色的不规则的疏网结构,其由短而细的丝构成,即网状纤维（reticularfiber,也称嗜银纤维（argyrophilfiber。

〔40倍物镜〕进一步观察网状纤维。

黄色脂肪组织（yellowadiposetissue14号

HE

〔4倍物镜〕染成浅红色的呈网格状的组织,即是黄色脂肪组织（yellowadiposetissue。

〔10倍物镜〕脂肪组织呈红色网格状,其中有许多大的空泡,每个空泡即一个大脂滴所在处,周围有染成粉红色的窄环,即脂肪细胞的胞质,内含着蓝色长椭圆形的胞核。

〔40倍物镜〕脂肪细胞因排列紧密,多数被挤压成多边形。

细胞内脂滴在制片过程中被脂溶剂所提取,故其所在处呈空泡状。

细胞质内其他成分和胞核被脂滴挤至细胞的一侧。

有的胞核未切着。

脂肪细胞间可见非常细小的血管—毛细血管。

六、肌肉组织

目的要求:

1.掌握三种肌组织的光镜结构及功能特点。

2.掌握骨骼肌与心肌的超微结构的异同点。

3.了解平滑肌超微结构特点。

平滑肌（smoothmuscle20号

HE

〔10倍物镜〕平滑肌（smoothmuscle由着红色的平滑肌纤维组成。

红色长方形小块,即平滑肌的纵切面部分;密集的红色小方块,即平滑肌的横切面部分。

〔40倍物镜〕在纵切面部分,平滑肌纤维呈长梭形,无横纹。

平滑肌的一般排列方式,是一个平滑肌纤维粗的部分与相邻的平滑肌纤维细的部分彼此对应排列。

平滑肌纤维的胞核呈椭圆形或杆状（当平滑肌纤维收缩时,胞核常扭曲呈螺旋状,位于细胞的中央,着色较浅。

在横切面部分,由于切到不同平滑肌纤维的不同部位,故它们的横径大小不等。

横径大的,呈圆形或不规则形,中央含有细胞核;横径小的,呈小圆形、不规则形或小红点状。

骨骼肌（skeletalmuscle21号

HE

〔10倍物镜〕在纵切面,骨骼肌细胞（skeletalmusclecell呈长短不等的红色带状,即每条带状结构就是一条骨骼肌纤维。

每条骨骼肌纤维有许多的胞核,均位于肌膜的下方（若恰好切至在骨骼肌纤维的表浅层,正面观时,胞核似乎位于肌纤维的深部。

在横切面,骨骼肌纤维呈圆形或不规则块状,其直径大小不一。

在一条骨骼肌纤维的横断面上,有多个细胞核（与平滑肌的相比,其核的数目和位置有什么不同?

〔40倍物镜〕在骨骼肌纤维的纵切面上,可见其横纹和肌原纤维。

与骨骼肌纤维长轴垂直的染色深浅相间的横线,即横纹。

深红色的横线,是暗带（亦称A带;浅色的横线,是明带（亦称I带,两带交替排列。

肌纤维内,与骨骼肌纤维平行排列的红色细线条,即肌原纤维（myofibril。

多个染色浅呈扁椭圆形的细胞核,紧贴肌膜（sarcolemma内侧,与肌纤维的长轴平行排列。

在骨骼肌纤维的横切面上,肌原纤维呈红点状。

胞核有多个,位于肌膜之下。

心肌（cardiacmuscle22号

羊或猴HE

观察心肌纤维的纵切面时,注意其与骨骼肌纤维相比较;观察心肌纤维的横切面时,注意其与平滑肌的区别。

〔4倍物镜〕心室的心肌（cardiacmuscle纤维着红色,有多种方向的排列,寻找纵切面和横切面的部分观察。

〔10倍物镜〕在纵切面上,心肌纤维呈短柱状,长短不等,相邻心肌纤维纵向连成柱状;心肌纤维有分支,侧向互相连成网状。

卵圆形或椭圆形的细胞核位于心肌纤维中央。

在横切面上,心肌纤维呈圆形,大小不等,但相差不太悬殊。

心肌纤维大的横切面含细胞核。

〔