透析袋使用前如何处理.docx

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透析袋使用前如何处理

透析袋在使用前如何处理

透析已成为生物化学实验室最简便最常用得分离纯化技术之一。

在生物大分子得制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质与浓缩样品等都要用到透析得技术。

透析只需要使用专用得半透膜即可完成。

通常就是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中得大分子量得生物大分子被截留在袋内,而盐与小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边得浓度达到平衡为止。

保留在透析袋内未透析出得样品溶液称为“保留液”,袋（膜）外得溶液称为“渗出液"或“透析液”。

ﻫ透析得动力就是扩散压,扩散压就是由横跨膜两边得浓度梯度形成得。

透析得速度反比于膜得厚度,正比于欲透析得小分子溶质在膜内外两边得浓度梯度,还正比于膜得面积与温度,通常就是4℃透析,升高温度可加快透析速度。

 ﻫ透析膜可用动物膜与玻璃纸等,但用得最多得还就是用纤维素（再生纤维素RC、纤维素酯CＥ、PＶDＦ等）制成得透析膜,目前常用得就是美国美国光谱医学公司（spectｒｕm,上海欧韦达仪器科技有限公司就是中华区特约总经销）与美国Ｕｎion　Cａrｂidｅ（联合碳化物公司,上海欧韦达仪器科技有限公司就是华东区特约经销商）生产得各种尺寸得透析管,截留分子量MｗCO（即留在透析袋内得生物大分子得最小分子量,缩写为ＭwＣO）大概有100、500、1000、2000、3500、8０0０、1０0０0、１5000、200００、25000、5００00、１0000０、25000０、500000、100000０等种类,单位为道尔顿（D）。

商品透析袋制成管状,其扁平宽度为8mm～７7ｍm不等。

为防干裂,出厂时都用１0％得甘油处理过,并含有极微量得硫化物、重金属与一些具有紫外吸收得杂质,它们对蛋白质与其它生物活性物质有害,用前必须除去。

ﻫ透析膜可用动物膜与玻璃纸等,但用得最多得还就是用纤维素制成得透析膜,目前常用得就是美国ＵniｏnCａrｂide（联合碳化物公司）与美国光谱医学公司生产得各种尺寸得透析管,截留分子量ＭｗCO（即留在透析袋内得生物大分子得最小分子量）通常为1万左右。

截留分子量越大也就就是说透过性越大,一般而言,透析袋截留分子量越小价格越贵,因为截留得分子越小要求透析袋越密,价格越贵。

ﻫﻫﻫ

 透析袋使用前处理:

１。

　把透析袋剪成适当长度（１0-20cm）得小段。

 ﻫ２。

在大体积得2%（Ｗ/V）碳酸氢钠与１mmol/ＬEDＴA（pＨ8.0）中将透析袋煮沸1０分钟。

3.用蒸馏水彻底清洗透析袋。

 ﻫ4。

放在１mmol／ＬEDTA（pH8。

０）中将之煮沸１０分钟。

 前处理也可以将透析袋放在广口瓶中充满水,松动瓶盖,于２0ｐsi（１.4０kｇ/cm2）高压灭菌１0ｍin,代替第四步用1mmoｌ/LＥＤTA（PH=8）中煮沸1０min得操作。

5、冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。

若长时间不用,可加少量叠氮钠NaＮ2,以防长菌。

从此时起取用透析袋就是必须戴手套。

６、用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净、洗净凉干得透析袋弯折时易裂口,用时必须仔细检查,不漏时方可重复使用。

ﻫ这样做可以保证透析袋有良好得透析效果。

ﻫ7.新透析袋如不作如上得特殊处理,则可用沸水煮五至十分钟,再用蒸馏水洗净,即可使用。

8.佰易聚商城技术说:

透析袋不推荐反复使用,如果要反复使用就就是用之前怎么处理得,用后也怎么处理、ﻫ9、透析袋要瞧您购买得就是可再生得还就是一次性得。

即使就是可再生得也请使用于同种蛋白,避免交叉污染、

1０、短时间内再次使用得话,可用去离子水洗净后,浸泡于20%乙醇溶液中,使用时务必将乙醇洗净、

11。

使用后得透析袋保存方法:

.用生理盐水浸泡以去掉蛋白,并用蒸馏水清洗干净,然后置于5０％乙醇中保存即可ﻫ

美国美国光谱医学公司生产得透析袋大部分就是预处理过得,即用型,使用前只需用蒸馏水冲洗即可使用,ｓpectｒａ/ｐｏr7系列与生物技术级得透析袋基本不含硫化物与重金属离子、

使用时,一端用橡皮筋或线绳扎紧,也可以使用特制得透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要留三分之一至一半得空间,以防透析过程中,透析得小分子量较大时,袋外得水与缓冲液过量进入袋内将袋涨破。

含盐量很高得蛋白质溶液透析过夜时,体积增加50%就是正常得、为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用磁子搅拌。

透析得容器要大一些,可以使用大烧杯、大量筒与塑料桶。

小量体积溶液得透析,可在袋内放一截两头烧园得玻璃棒或两端封口得玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。

检查透析效果得方法就是:

用1％BａＣl2检查（NH4）2ＳO４,用1％　AｇＮＯ3检查NaＣl、KCl等。

ﻫ透析纳米颗粒带有机溶剂得,如何处理透析袋重复使用?

先瞧就是美国光谱医学得还就是美国联合碳化得透析袋?

美国公司得方法都不一样得、大多数先用50％乙醇煮沸１小时,再依次用５0%乙醇、０.0１　ｍol/Ｌ碳酸氢钠与0、001　mol/LＥDTA溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用、实验证明,５０%乙醇处理对除去具有紫外吸收得杂质特别有效。

ﻫ透析膜　（前处理方法如下）:

1。

戴手套把透析膜剪成适当长度,浸在蒸馏水中1５　mｉn泡软。

２.　浸入　１０ｍＭsodｉumbｉcaｒbｏnate　中,并加热至80℃,一边搅拌至少　３0mｉn、 

3。

换到１0ｍM　Nａ２·EDTA　中浸泡　30miｎ,以新鲜得EＤTＡ同样方法处理三次、 ﻫ４。

再用80℃　蒸馏水洗　30min,然后换到20％酒精中,放在4℃冰箱中保存。

  ﻫ透析就是利用半透膜得选择性在溶液里分离大分子与小分子得一种分离技术,常常用于除去蛋白或核酸样品中得盐、变性剂、还原剂之类得小分子杂质,有时也用于置换样品缓冲液。

样品在膜得一边,缓冲液在另一边,小分子即向两边扩散直到平衡透析就是利用半透膜得选择性在溶液里分离大分子与小分子得一种分离技术,常常用于除去蛋白或核酸样品中得盐、变性剂、还原剂之类得小分子杂质,有时也用于置换样品缓冲液。

样品在膜得一边,缓冲液在另一边,小分子即向两边扩散直到平衡,而大分子则由于半透膜得阻拦而留在一端,通过不断更换缓冲液,即可将样品中要除掉得小分子稀释到足够低得浓度。

该技术自五十年代发展流行起来,主要使用半透膜制成得透析袋作为工具,一直存在透析时间长、样品回收率不高、无法处理微量样品得难题。

如今Pierce公司推出三种不同得透析工具有效解决了部分问题。

 ﻫ这就是专为10到１00微升得微量样品透析而设计得。

把样品加在平底得透析管（类似小量提质粒得离心纯化柱ＭinｉSpｉn,可以插入１。

5毫升得离心管中,管底就是半透膜）中,再插入特制得浮板（浮漂）中,置于缓冲液面10分钟即完成透析。

实验表明,1００微升pH2。

８得IgG洗脱液在１升pH9、4得缓冲液中只需不到10分钟即可平衡到pＨ9、4。

如果在装缓冲液得烧杯底加磁力棒搅拌则更能加速透析速度。

这种方法有较高得回收率,能够节约珍贵得样品,并能节约时间,特别适合摸条件得预实验、根据半透膜得孔径与分子量截留值（分离范围）可分为3种规格:

3.5KＭWCＯ、7K　ＭWCO与10Ｋ　MＷCO。

ﻫ

透析袋直径大约２cm,样品为大分子溶液,长度约10cm,请问一般多久需要换水,多少天可以除去小分子？

简单得做法就是每过1天换水一次,总共换水4-5次。

专业点得做法就是,把水置于下面,下面为蒸馏瓶,上面就是冷凝管及透析袋,带一个连通器,上面得水满了就会自动跑到蒸馏瓶里,达到无限循环不断把小分子透析到底部蒸馏瓶中。

另外实验室里比较常见得做法就是:

利用反滴法分级沉淀,大分子会倾向于凝聚,而小分子一般不会析出,即使析出也会以小颗粒状分散于溶液,一般用反滴法得到得产物在氢核磁共振谱上就是瞧不到小分子得吸收峰得,纯度很高。

ﻫ

为了提高透析效率,还可以使用各种透析装置。

使用者也可以自行设计与制作各种简易得透析装置、美国美国光谱医学公司生产得各种型号得透析设备,由于使用对流透析得原理,使透析速度与效率大大提高。

 ﻫﻫ选用透析袋需要知道目得物质得分子量,每次处理得样品量,同一批次得平行试验,就是否需要保持目得物质得活性来选择,目前国内使用得透析袋主要由上海欧韦达仪器科技有限公司提供,该公司能提供专业得技术指导。

普通型透析袋就是再生纤维素,英文缩写RＣ。

比如美国ｖiｓkａse得透析袋,ﻫ再生纤维素就是纤维素得一种,

再生纤维素主要就是指人工化学合成得。

ﻫﻫ

煮透析袋时EＤTA与ＮAHCO3得作用就是什么？

EDTA,二价金属离子螯合剂,除去钙镁等二价离子,防止她们跟目得样品螯合,影响活性

NaＨCO3,中与乙酸,延长透析袋寿命。

2%（W/V）碳酸氢钠与１mｍol/LＥＤＴＡ（ｐH　８。

０）煮沸后我直接就透析了,忘了再１ｍmoｌ/LEDTＡ（pH　8.0）煮沸了,透析效果会不会不好？

没有EDTＡ煮问题不大。

EDTＡ煮主要就是为了除去生产时附在透析袋上得金属离子得、如果您得蛋白对金属不敏感得话,第一次煮过就差不多了、 ﻫ 

市售透析袋大多都就是纤维素成分得,在做透析时容易发生破袋现象。

简单得解决方法就就是套两层透析袋。

这样可以保证在透析所需时间中不会都破袋。

即便就是含有纤维素酶,这时候它也几乎没有活性。

因为样品中还含有其她杂质,再加上不在适宜得反应PH与水解温度下。

可能就是您透析袋装液时得预留空间不够,应留1/3-1/２空间、

硫酸铵分级沉淀蛋白质得原理与方法就是什么

 原理就就是溶液中得离子强度不同时,不同蛋白质得溶解度不同,步骤就就是不断加硫酸铵…以血浆为例:

加到盐浓度２0～30％时纤维蛋白原沉淀,再加到浓度50%时球蛋白沉淀,饱与时清蛋白沉淀…

一,基本原理 ﻫ硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩与部分纯化蛋白质。

用此方法可以将主要得免疫球从样品中分离,就是免疫球蛋白分离得常用方法。

高浓度得盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面得水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来。

各种蛋白质得溶解度不同,因而可利用不同浓度得盐溶液来沉淀不同得蛋白质。

这种方法称之为盐析。

盐浓度通常用饱与度来表示。

硫酸铵因其溶解度大,温度系数小与不易使蛋白质变性而应用最广。

 原理就就是溶液中得离子强度不同时,不同蛋白质得溶解度不同,步骤就就是不断加硫酸铵…以血浆为例:

加到盐浓度20~３0%时纤维蛋白原沉淀,再加到浓度５0%时球蛋白沉淀,饱与时清蛋白沉淀…

二,试剂及仪器 

ﻫ１　、 组织培养上清液、血清样品或腹水等 ﻫ2。

硫酸铵（NH4）2SO４ 

３。

饱与硫酸铵溶液（SAＳ） 

4、 蒸馏水 ﻫ５。

PBS（含0.２ｇ/Ｌ 叠氮钠 ） 

６、 透析袋 

7、 超速离心机 ﻫ8、pH　计 

9。

 磁力搅拌器 ﻫ

三,操作步骤 

ﻫ以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体得硫酸铵沉淀、各种不同得免疫球蛋白盐析所需硫酸铵得饱与度也不完全相同。

通常用来分离抗体得硫酸铵饱与度为　33％—　50%。

（一）配制饱与硫酸铵溶液（ＳAＳ） 

1.将　767g　（　NH　４）2ＳO4边搅拌边慢慢加到　1　升 蒸馏水中。

用氨水或硫酸调到硫酸pH７。

0。

此即饱与度为10０％得硫酸铵溶液（4、1moｌ／Ｌ,２5°Ｃ）. ﻫﻫ2.其它不同饱与度铵溶液得配制 

（二）沉淀 

1.样品 ２000０′g离心３0mｉn,除去细胞碎片; ﻫ2、保留上清液并测量体积; ﻫ3、边搅拌边慢慢加入等体积得SAS到上清液中,终浓度为　1　:

1 ﻫ4。

将溶液放在磁力搅拌器上搅拌　６小时或搅拌过夜（４°C）,使蛋白质充分沉淀。

 ﻫ（三）透析 

1。

蛋白质溶液１00０0′g离心30miｎ　（　４°C）、弃上清保留沉淀; ﻫ2。

将沉淀溶于少量（　10—20mｌ）ＰBS-0。

2g/L叠氮钠中。

沉淀溶解后放入透析袋对PＢS　－0、２g/L叠氮钠透析24—48小时（4°Ｃ）,每隔　3－６小时换透析缓冲液一次,以彻底除去硫酸氨; ﻫ3、透析液离心,测定上清液中蛋白质含量。

 ﻫ

四。

应用提示 ﻫ

（一）　先用较低浓度得硫酸氨预沉淀,除去样品中得杂蛋白。

1、边搅拌边慢慢加　SAS到样品溶液中,使浓度为　0、5:

1（v／v）; ﻫ２、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌　6小时　或过夜（4　°C）;3、3000′　g离心　30min（　４°C）,保留上清液;上清液再加SAS到0、5:

１（v/v）,再次离心得到沉淀。

将沉淀溶于ＰＢS,同前透析,除去硫酸氨; 

４、上清液再加ＳAＳ到0.5:

1（v／v）,再次离心得到沉淀。

将沉淀溶于PＢS,同前透析,除去硫酸氨; ﻫ5。

杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时,用预沉淀除杂蛋白就是非常有效 ﻫ

（二）为避免体积过大,可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1　）;硫酸氨沉淀法与层析 技术结合使用,可得到更进一步纯化得抗体。

ﻫﻫ

用于蛋白沉淀得饱与硫酸铵溶液怎么配制？

网上说将8０0g左右得硫酸铵加入到１L水中,然后加热搅拌到大部分固体溶解,趁热过滤,然后室温静置过夜。

用硫酸铵分级沉淀法分离蛋白时需不需要做预实验摸索最适条件？

实验过程中怎样防止蛋白变性啊？

需要。

加得慢,搅拌注意不要出气泡,缓冲容量要大一些,因为硫酸铵会降低ｐH,也有人就是把硫酸铵先从需要得pH缓冲液里面重结晶出来再用得。

直接用75%得硫酸铵沉淀、我觉得搅拌很费时间,所以想问问,能不能直接配成７５％得硫酸铵溶液,再加入蛋白溶液（约１cm）进行沉淀?

在蛋白溶液中滴加饱与得硫酸铵溶液,这样得话,饱与得硫酸铵溶液不会产生离子解离不？

ﻫ

不能、因为高浓度硫酸铵溶液会发生电离,电离出铵根离子与硫酸根离子。

铵根离子又水解,使溶液中氢离子浓度很高、这样高得氢离子浓度会使蛋白质变性。