酮体的生成实验报告.docx

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酮体的生成实验报告

酮体的生成实验报告

篇一：

11实验十一酮体的生成和利用

　　实验十一酮体的生成和利用

　　【实验目的】

　　了解酮体的生成部位及把握测定酮体生成与利用的方式。

　　【实验原理】

　　在肝脏线粒体中，脂肪酸经β-氧化生成的过量乙酰辅酶A缩合成酮体。

酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮三种化合物。

肝脏不能利用酮体，只有在肝外组织，尤其是心脏和骨骼肌中，酮体能够转变成乙酰辅酶A而被氧化利用。

　　本实验以丁酸为基质，与肝匀浆一路保温，然后测定肝匀浆液中酮体的生成量。

另外，在肝脏和肌肉组织共存的情形下，再测定酮体的生成量。

在这两种不同条件下，由酮体含量的不同咱们能够明白得以上的理论。

本实验要紧测定的是丙酮的含量。

　　酮体测定的原理：

在碱性溶液中碘可将丙酮氧化成为碘仿。

以硫代硫酸钠滴定剩余的碘，能够计算所消耗的碘，由此也就可以够够计算出酮体（以丙酮为代表）的含量。

反映式如下：

　　CH3COCH3十3I2十4NaOHCHI3十CH3COONa十3NaI十3H2O

　　I2十2Na2S2O3Na2S4O6十2NaI

　　【实验材料】

　　1.实验器材

　　试管；移液管；锥形瓶；滴定管及架。

2.实验试剂

（1）0.1%淀粉液。

（2）0.9%NaCl溶液。

（3）15%三氯乙酸。

（4）10％NaOH溶液。

（5）10％HCl溶液。

　　（6）0.5mol/L丁酸溶液：

取5ml丁酸溶于100ml0.5mol/LNaOH中。

　　（7）0.1mol/L碘液：

I212.5g和KI25g加水溶解，稀释至刻度1L，用0.1mol/LNa2S2O3

　　标定。

　　（8）0.02mol/LNa2S2O3:

24.82gNa2S2O3·5H2O和400mg无水Na2CO3溶于1L刚煮沸的

　　水中，配成0.1mol/L溶液，用0.1mol/LKIO3标定。

临历时将标定Na2S2O3溶液稀释成0.02mol/L。

　　【实验操作】

　　1.标本的制备：

　　将兔致死，掏出肝脏，用0.9%NaCl洗去污血，放滤纸上，吸去表面的水分，称取肝组织5g置研钵中，加少量0.9%NaCl至整体积为10ml，制成肝组织匀浆。

另外再取后腿肌肉5g，按上述方式和比例，制成肌组织匀浆。

　　2.保温和沉淀蛋白质：

　　取试管3只，编号，按下表操作：

　　摇匀后，用滤纸过滤，将滤液别离搜集在3支试管中,为无蛋白滤液。

　　3.酮体的测定

　　摇匀，静置10分钟，向各管中加入10%HCl3ml,加1%淀粉液1滴呈兰色，别离用0.02mol/LNa2S2O3滴定至溶液呈亮绿色为止。

　　【实验结果与计算】

　　肝脏生成的酮体量（mmol/g）=（C－A）×Na2S2O3的摩尔数×1/6肌肉利用的酮体量（mmol/g）=（C－B）×Na2S2O3的摩尔数×1/6

　　A:

滴定样品1消耗的Na2S2O3ml数。

B:

滴定样品2消耗的Na2S2O3ml数。

C:

滴定样品3消耗的Na2S2O3ml数。

　　【试探题】

　　什么缘故只有在肝外组织，酮体才能够被氧化利用？

　　Experiment11ProductionandDegradationofKetoneBodies

　　【Purpose】

　　Understandtheproductionorgansandmasterthemethodusedforproductionanddegradationofketonebodiesmeasurement.

　　【Principle】

　　Withinthemitochondriaofliver,theexcessacetyl-CoAproducedduringfattyacidβ-oxidationisconvertedtoacetoacetate,β-hydroxybutyrate,andacetone,thisgroupofmoleculesiscalledtheketonebodies.Livercannotuseketonebodiesasanenergysource.Onlyinseveraltissuesoutofliver,mostnotablycardiacandskeletalmuscle,ketonebodiesareconvertedtoacetyl-CoA,theacetyl-CoAisthenoxidatedtogenerateenergy.

　　Weusebutyricacidasinitialstuffinthisexperiment,thebutyricacidisheatedwiththeliverplasm,andthenmeasurethecontentofketonebodiesinliverplasm.Moreover,measurethecontentofketonebodiesundertheconditionofcoexistenceofliverplasmandskeletalmuscleinreactionsystem.Wecancomprehendtheabovetheoriesfromthedifferenceoftheketonebodiescontentunderthetwodifferentconditions.Wedeterminethecontentofacetoneinthisexperiment.

　　Theketonebodiesmeasurementprincipleisshownbelow:

Inalkalineaquatheiodinecanoxidizeacetonetobecomeiodoform,titratetheremainderiodineinthereactionsystemwithhyposulphite,wecancalculatetheconsumptionofiodineaccordingtotheresultofhyposulphitetitration,wecanalsocalculatethecontentofketonebodies（takeacetoneastorepresent）accordingtothetitrationresult.TheequationofReactionisasfollows:

　　CH3COCH3十3I2十CHI3十CH3COONa十3NaI十3H2O

　　I2十2Na2S2O3Na2S4O6十2NaI

　　【Materials】

　　1.Apparatus:

　　Tubes,Pipets,FlasksBurettesandburettesupport.2.Reagents:

（1）0.1%aquaofstarch.

（2）0.9%aquaofNaCl.

　　（3）15%trichlorineaceticacid.（4）10%aquaofNaOH.（5）10%aquaofHCl.

　　（6）0.5mol/Lbutyricacid:

Dissolve5mlbutyricacidin100ml0.5mol/LNaOH.

　　⑺0.1mol/Laquaofiodine:

DissolveI212.5gandKI25gindistilledwater,dilutethesolutionto1L,demarcatethesolutionwith0.1mol/LNa2S2O3.

　　⑻0.02mol/LNa2S2O3:

Dissolve24.82gNa2S2O3·5H2Oand400mganhydrousNa2CO3in1Lfreshboiledwatertoget0.1mol/Lsolution,demarcatethesolutionwith0.1mol/LKIO3.Dilutethesolutionto0.02mol/Ljustbeforeusing.

　　【Procedures】

　　1.Preparationofthespecimen:

　　Executetherabbit,takeouttheliver,scouroffthebloodwith0.9%NaCl,puttheliveron

　　filterpapertosuckawaythesurfacehumidity,weigh5goftheliverorganize,placeitintothemortar,addafew0.9%NaCltototalvolume10ml.Thentake5gmuscleofrearleg,makeitintotheliverorganizationplasmaccordingtoabove-mentionedmethodandcomparisons.

　　2.Heatpreservationandprecipitationoftheprotein:

　　Takethreetubes,numberthetubesandoperateasthetablefollowed：

　　Filterwiththefilterpaper

　　aftershakingevenly,collectthefiltraterespectivelyin3tubes,thenwegetthefiltratewithoutprotein.

　　3.Dete

rminationoftheketonebodies

　　PlaceStaticallyfor10minutesaftershakingevenly,add10%HCl3mltoeachtube,andaddonedropof1%starchliquidtoeachtube,thenwecanseethesolutionpresentsthecoloroforchid,titratewith0.02mol/LNa2S2O3untilthesolutionpresentsthecolorofbrightgreenrespectively.【Resultandcalculation】

　　Ketonebodiesproducedinliver（mmol/g）=（C－A）×MoorecontentoftheNa2S2O3×1/6Ketonebodiesconsumedinmuscle（mmol/g）=（C－B）×MoorecontentoftheNa2S2O3×1/6

　　A:

volumeoftheNa2S2O3（ml）consumedduringtitrationofsample1B:

volumeoftheNa2S2O3（ml）consumedduringtitrationofsample2C:

volumeoftheNa2S2O3（ml）consumedduringtitrationofsample３

　　【Advisementafterexperiment】

　　Ketonebodiesareoxidatedtogenerateenergyonlyinseveraltissuesoutofliver.Why?

篇二：

生物化学实验报告

　　生物化学实验报告

　　供查验护理

　　专业利用

　　班级

　　姓名

　　郑州大学护理学

　　院

　　实验一血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳

　　[目的][原理]

　　[仪器组成]

　　[操作与结果]

　　[结果粘贴]

　　实验二酶的特异性

　　[目的][原理]

　　[操作与结果]

　　将以上一、二、3号试管置于37℃水浴箱保温10分钟。

然后向各管中加班氏试剂20滴，滚水中煮沸10分钟，掏出勿振摇试管，观看结果并记录。

　　[分析]三管结果及缘故。

　　实验三温度、pH、激活剂、抑制剂

　　对酶反映的阻碍

　　[目的][原理]

　　[操作与结果]

（一）温度对酶反映的阻碍

　　[分析各管的颜色转变缘故]

（二）pH对酶反映的阻碍

　　[分析各管的颜色转变缘故]

篇三：

酮体生成和利用的生理意义

　　1酮体生成和利用的生理意义。

（1）酮体是脂酸在肝内正常的中间代谢产物，是甘输出能源的一种形式；

（2）酮体是肌肉尤其是脑的重要能源。

酮体分子小，易溶于水，容易透过血脑屏障。

体内糖供给不足（血糖降低）时，大脑不能氧化脂肪酸，这时酮体是脑的要紧能源物质。

　　2试述乙酰CoA在脂质代谢中的作用.

　　在机体脂质代谢中，乙酰CoA要紧来自脂肪酸的β氧化,也可来自甘油的氧化分解；乙酰CoA在肝中可被转化为酮体向肝外输送，也可作为脂肪酸生物合成及细胞胆固醇合成的大体原料。

　　3试述人体胆固醇的来源与去路?

　　来源:

⑴从食物中摄取⑵机体细胞自身合成去路:

⑴在肝脏可转换成胆汁酸⑵在性腺,肾上腺皮质能够转化为类固醇激素⑶在欺负能够转化为维生素D3⑷用于组成细胞膜⑸酯化成胆固醇酯，贮存在细胞液中⑹经胆汁直接排除肠腔，随粪便排除体外。

　　4什么是血浆脂蛋白?

试述血浆脂蛋白的分类,来源及生理功能?

　　血浆脂蛋白是脂质与载脂蛋白结合形成球形复合体,是血浆脂蛋白的运输和代谢形式。

.血浆脂蛋白的分类方式有两种：

1电泳法：

可敬脂蛋白分为乳糜微粒（CM）β-脂蛋白,前-β脂蛋白和α脂蛋白四类2超速离心法：

可将脂蛋白分为乳糜微粒（CM），极低密度脂蛋白（VLDL），低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）四类，别离相当于电泳分离的CM、前β-脂蛋白、β-脂蛋白和α-脂蛋白四类。

各类血浆脂蛋白的来源要紧生理功能如下：

①CM由小肠黏膜细胞合成,功能是转运外源性甘油三酯和胆固醇；②VLDL由肝细胞合成、分泌，功能是转运内源性甘油三酯和胆固醇;③LDL由VLDL在血浆中转化而来,功能是转运内源性胆固醇,即将胆固醇由肝转运至肝外组织;④HDL要紧由肝细胞合成、分泌，功能是逆向转运胆固醇,即将胆固醇由肝外组织转运到肝。

　　一、酶的催化作用有何特点？

　　①具有极高的催化效率,如酶的催化效率可比一样的催化剂高108~1020倍；②具有高度特异性：

即酶对其所催化的底物具有严格的选择性，包括：

绝对特异性、相对特异性、立体异构特异性；③酶促反映的可调剂性：

酶促反映受多种因素的调控，以适应机体不断转变的内外环境和生命活动的需要。

　　二、距离说明酶的三种特异性（概念、分类、举例）。

　　一种酶仅作用于一种或一种化合物,或必然化学键,催化必然的化学反映,产生必然的产物,这种现象称为酶作用的特异性或专一性。

依照其选择底物严格程度不同,分为三类:

①绝对特异性:

一种酶只能作用于一种专一的化学反映,生成一种特定结构的产物,称为绝对特异性.如：

脲酶仅能催化尿素水解产生CO2和NH3,对其它底物不起作用;②相对特异性:

一种酶作用于一类化合物或一种化学键,催化一类化学反映,对底物不太严格的选择性,称为相对特异性。

如各类水解酶类属于相对特异性;举例:

磷酸酶对一样的磷酸酯键都有水解作用,既可水解甘油与磷酸形成的酯键,也可水解酚与磷酸形成的酯键;③立体异构特异性:

对底物的立体

　　构型有要求,是一种严格的特异性。

作用于不对称碳原子产生的立体异构体;或只作用于某种旋光异构体（D-型或L-型其中一种）,如乳酸脱氢酶仅催化L-型乳酸脱氢，不作用于D-乳酸等。

　　4、简述Km与Vm的意义。

　　⑴Km等于当V=Vm/2时的[S]。

⑵Km的意义：

①Km值是酶的特点性常数——代表酶对底物的催化效率。

当[S]相同时,Km小——V大；②Km值可近似表示酶与底物的亲和力：

1/Km大，亲和力大；1/Km小，亲和力小；③可用以判定酶的天然底物：

Km最小者为该酶的天然底物。

⑶Vm的意义:

Vm是酶完全被底物饱和时的反映速度，与酶浓度成正比。

　　五、温度对酶促反映有何阻碍。

（1）温度升高对V的双重阻碍：

①与一样化学反映一样，温度升高可增加反映分子的碰撞机缘，使V增大；②温度升高可加速酶变性失活，使酶促反映V变小

（2）温度对V阻碍的表现:

①温度较低时，V随温度升高而增大（低温时由于活化分子数量减少，反映速度降低，但温度升高时，酶活性又可恢复）②达到某一温度时，V最大。

使酶促反映V达到最大时的反映温度称为酶的最适反映温度（酶的最适温度不是酶的特点性常数）③反映温度达到或超过最适温度后，随着反映温度的升高，酶蛋白变性，V下降。

　　六、竞争性抑制作用的特点是什么？

（1）竞争性抑制剂与酶的底物结构相似

（2）抑制剂与底物彼此竞争与酶的活性中心结合（3）抑制剂浓度越大,那么抑制作用越大，但增加底物浓度可使抑制程度减小乃至排除（4）动力学参数:

Km值增大，Vm值不变。

　　7、说明酶原与酶原激活的意义。

（1）有些酶（绝大多数蛋白酶）在细胞内合成或初分泌时没有活性，这些无活性的酶的前身物称为酶原。

酶原激活是指酶原在必然条件下转化为有活性的酶的进程。

酶原激活的机制：

酶原分子内肽链一处或多处断裂，弃去多余的肽段，构象转变，活性中心形成，从而使酶原激活。

（2）酶原激活的意义：

①消化道内蛋白酶以酶原形式分泌，珍惜消化器官自身不受酶的水解（如胰蛋白酶），保证酶在特定部位或环境发挥催化作用；②酶原能够视为酶的贮存形式（如凝血酶和纤维蛋白溶解酶），一旦需要转化为有活性的酶，发挥其对机体的珍惜作用。

什么叫同工酶？

有何临床意义？

（1）同工酶是指催化的化学反映相同，而酶蛋白的分子结构、理化性质及免疫学性质不同的一组酶下称为同工酶。

（2）其临床意义：

①属同工酶的几种酶由于催化活性有不同及体内散布不同，有利于体内代谢的和谐。

②同工酶的检测有助于对某些疾病的诊断及辨别诊断.当某组织病变时,可能有特殊的同工酶释放出来,使该同工酶活性升高。

如：

冠心病等引发的心肌受损患者血清中LDH1和LDH2增高，LDH1大于LDH2；肝细胞受损患者血清中LDH5含量增高。

　　一、简述糖酵解的生理意义

（1）在无氧和缺氧条件下，作为糖分解功能的补充途径

（2）在有氧条件下，作为某些组织细胞要紧的供能途径：

①成熟红细胞（没有线粒体，不能进行有氧氧化②神经、白细胞、骨髓、视网膜、皮肤等在氧供给充沛时仍要紧靠糖酵解供能。

二、简述糖异生的生理意义

（1）在饥饿情形下维持血糖浓度的相对恒定。

（2）补充和恢复肝糖原。

（3）维持酸碱平稳：

肾的糖异生有利于酸性物质的排泄。

（4）回收乳酸分子中的能量（乳酸循环）。

　　3、简述血糖的来源和去路血糖的来源：

（1）食物糖类物质的消化吸收；

（2）肝糖原的分解；（3）非糖物质异生而成。

血糖的去路：

（1）氧化分解功能；

（2）合成糖原；（3）合成其它糖类物质；（4）合成脂肪或氨基酸等。

　　4、糖酵解与有氧氧化的比较糖酵解：

反映条件：

供氧不足或不需氧；进行部位：

胞液；关键酶：

己糖激酶（或葡萄糖激酶）、磷酸果糖-一、丙酮酸激酶；产物：

乳酸、ATP；能量：

1mol葡萄糖净得2molATP；生理意义：

迅速供能，某些组织依托糖酵解供能。

有氧氧化：

反映条件：

有氧情形；进行部位：

胞液和线粒体；关键酶：

己糖激酶等三个酶及丙酮酸脱氢酶系、异柠檬酸脱氢酶、柠檬酸合酶、α-酮戊二酸脱氢酶系；产物：

H2O、CO二、ATP;能量：

1mol葡萄糖净得36mol或38molATP；生理意义：

是机体获取能量要紧方式

　　五、在糖代谢进程中生成的丙酮酸可进入哪些代谢途径

（1）在供氧不足时，丙酮酸在LDH催化下，同意NADH+H的氢还原生成乳酸。

（2）在供氧充沛时,丙酮酸进入线粒体，在丙酮酸脱氢酶系的催化下，氧化脱羧生成乙酰CoA，再经三羧酸循环和氧化磷酸化，完全氧化生成CO二、H2O和ATP。

（3）丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者经磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化生成磷酸烯醇式丙酮酸，再异生成糖。

（4）丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者与乙酰CoA缩合生成柠檬酸，可增进乙酰CoA进入三羧酸循环完全氧化。

（5）丙酮酸进入线粒体在丙酮酸羧化酶催化下生成草酰乙酸，后者与乙酰CoA缩合生成柠檬酸，柠檬酸出线粒体在细胞液中经柠檬酸裂解催化生成乙酰CoA，后者可作为脂肪酸、胆固醇等的合成原料。

（6）丙酮酸可经还原性氨基化生成丙氨酸等非必需氨基酸。

决定丙酮酸代谢的方向是各条代谢途径中关键酶的活性，这些酶受到别构效应剂与激素的调剂。

简述三羧酸循环的要点及生理意义

　　要点：

（1）TAC中有4次脱氢，2次脱羧，1次底物水平磷酸化

（2）TAC中有3个不可逆反映，3个关键酶；（3）TAC的中间产物包括草酰乙酸在内起着催化剂作用，草酰乙酸的回补反映释丙酮酸的直接羧化或经苹果酸生成；（4）三羧酸循环一周共产生12ATP。

生理意义：

（1）TAC是三大营养素完全氧化的最终代谢通路；

（2）是三大营养素代谢联系的枢纽；（3）可为其他合成代谢提供小分子前体（4）可为氧化磷酸化提供还原能量。

　　蛋白质

　　2一、重组DNA技术常包括以下几个步骤：

分离制备目的基因－“分”，切割目的基因和载体－“切”，目的基因与载体的连接－“接”，将重组DNA导入宿主细胞－“转”，挑选并鉴定含重组DNA分子的受体细胞克隆－“筛”，克隆基因在受体细胞内进行复制或表达－“表”。

　　一、蛋白质的元素组成特点是什么？

如何计算生物样品中蛋白质的含量？

　　蛋白质的元素组成特点是含N,平均含量为16％，可用于推算未知样品中蛋白质的含量：

100克样品中的蛋白质含量=每克样品含氮克数×6.25×100.二、何谓蛋白质的二级结构？

二级结构要紧有哪些形式？

各有何特点？

蛋白质的二级结构是指蛋白质分子中某一段肽键的局部结构，也确实是该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并非涉及氨基酸残基侧链的构象。

二级结构的要紧形式有：

α-螺旋，β-折叠、β-转角、无规那么卷曲。

特点：

（1）α-螺旋：

①主链骨架围绕中心轴盘绕形成右手螺旋；②螺旋每上升一圈是3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm；③相邻螺旋圈之间形成许多氢键；④侧链基团位于螺旋的外侧。

（2）β-折叠：

①假设干条肽链或肽段平行或反平行排列成片；②所有肽键的C=O和N-H形成链间氢键；③侧链基团别离交替位于片层的上、下方。

（3）β-转角：

多肽链180o回折部份，通常由四个氨基酸残基组成，借一、4残基之间形成氢键维系。

（4）无规那么卷曲：

主链骨架无规律盘绕的部份。

　　3、何谓蛋白质的变性作用?

引发蛋白质变性的因素有哪些?

蛋白质变性的