HPLC法测定果蔬中维生素C精.docx

1、HPLC法测定果蔬中维生素C精农业基础科学 现代农业科技 2011年第 3期表 1精密度试验结果样品 变异系数%123456平均刀豆角 31.6031.2030.8030.930.3031.2031.000.441.42西瓜皮9.809.409.509.49.309.309.450.192.01维生素 C 含量 mg/100g标准差mg/100g 注 :表中检出量均为 5次平行测定平均值 。表 2回收率样品 样品含量mg/100g 加入标样量mg 检出量mg 回收率%苹果 11.9220.019.4497.2菜瓜 14.2020.018.4492.2辣椒 155.9050.054.90109.

2、8西红柿 16.0820.019.4497.2杏15.3620.019.9499.7维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一 , 它能增 强人体抵抗力 , 预防坏 血病 , 因 此又称抗坏血酸 。 维生素 C 分布很广 , 主要存在于植物性食物的果实 、 浆果和蔬菜中 。 因此 , 测定 水 果 及蔬 菜 中 的 维 生 素 C 含 量 , 对 评 定 其 营 养 价值有重要意义 。维生素 C 的测定方法有多种 , 包括容量法 、 比色法以及 荧光光度法 、 电位法 1和紫外分光光度法 2-3等 , 各种方法均 有特长和不足 。 高效液相色谱是近年来发展起来的一种快 速 、 高效的分离技术

3、。 运用这一现代色谱工具进行维生素 C 的检测 , 国内外曾有报道 4-6。 在此基础上 , 开展了液相色谱 测定果蔬中维生素 C 的工作 , 效果较好 。 现将试验情况总结 如下 。1材料与方法 1.1仪器与试剂仪 器 :高 效 液 相 色 谱 仪 , 美 国 Waters201型 , 包 括 510泵 、 U6K 进样器 、 481紫外检测器 、 740数据处理机 ; MILLI-Q 型超纯水装置 ; GL-20型高速冷冻离心机 。 试剂 :磷酸二氢 铵 , 偏磷酸 , 浓磷酸 , 抗坏血酸 ; 均为分析纯 。1.2样品前处理用超纯水配制 0.5%的磷酸二氢铵 , 用 0.45m 膜过滤

4、,将浓磷酸调至 pH 值为 2.3作为流动相 。标样配制 :准确称取维生素 C 标样 50mg , 用 3%偏磷酸定容至 500mL 容量瓶摇匀 , 再吸取 1mL 定容至 100mL 。样品制备 :大量样品 , 迅速称取切碎样品 100g 加等量3%偏磷酸 , 倒入组织捣碎机捣碎 , 称取匀浆 20.0g , 用 3%偏磷酸定容至 100mL 容量瓶 。 少量样品 , 称取样品 15g 倒入 研钵内 , 加入少量 3%偏磷酸充分研磨成糊状 , 全部转移定 容至 100mL 容 量 瓶 。 将定容好的容量瓶超声提取 10min , 取 上 清 液 5mL , 0 、 2700r/min离 心

5、10min , 用 0.45m 膜过滤后进样 。1.3试验方法色谱条件 :色谱柱 NOVA PAKC 18; 流动相 0.5%NH4H 2PO 4,流 速 1mL/min; 纸 速 1cm/min; 洗 脱 时 间 2.5min ; 检 测 器481紫 外 检 测 器 ; 波 长 243.5nm ; 灵 敏 度 0.1AuFS ; 进 样 量 10L 。根据经典的保留值法和样品中维生素 C 与加入标样后 色谱峰迭加来定性 。 将标准液注入色谱柱中 , 经 740数据处 理机采用单点外标法进行定量 , 直接打印出分析结果 。2结果与分析 2.1精密度配 制 0.0050mg/mL的 标 准 维

6、生 素 C 溶 液 , 进 样 量 从2.5L 开始 , 以响应值与进样量绘制标准曲线均成线性 。 试验结果见表 1。 回归方程为 :y =1.030x -2.43110-5(r=0.9997HPLC 法测定果蔬中维生素 C郝学宁郝嫱嫱刘雪莲(青海省农林科学院分析测试中心 , 青海西宁 810016摘要 通过高效液相色谱法和国标法 2种方法测定了果蔬中的维生素 C , 通过精密度 、 准确度 、 回收率等方法对比结果表明 :液相色 谱法是一种高效 、 快速 、 准确 、 高灵敏度的分离分析方法 。关键词 HPLC 法 ; 果蔬 ; 维生素 C ; 测定 中图分类号 O652.63文献标识码 A

7、 文章编号 1007-5739(2011 03-0030-02Determination of Vitamin C in Vegetables and Fruits with HPLC MethodHAO Xue-ning HAO Qiang-qiang LIU Xue-lian(Analysis and Testing Center of Qinghai Agriculture and Forestry Sciences , Xining Qinghai 810016Abstract In this paper , high performance liquid chromatography

8、 and national standard method were used to determine V C in fruits and vegetables. Through the precision , accuracy , recovery methods , etc. , such as comparative results showed that liquid chromatography was an efficient , fast , accurate and high sensitivity separation analysis method.Key words H

9、PLC method ; fruits and vegetables ; vitamin C ; determination作者简介 郝学宁 (1955-, 男 , 河北永清人 , 高级实验师 , 从事农化分 析工作 。收稿日期2010-12-18试验条件下维生素 C 的最小检测量为 2.510-9g 。2.2方法可靠性历经制样全过程 , 在不同基样中加入维生素 C , 回收考察其准确度 , 结 果见 表 2。 由表 2可知 , 样 品 平 均 回 收 率 为99.2%。 标准维生素 C 和典型样品的色谱图见图 1。部分样品的测定结果与 2, 6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定30法结果比较见表 3。

10、2.3柱效在有预柱的情况下 , 1根柱子经过 500余次的进样 , 柱效无明显变化 。 柱压一直保持在 1500Pa 左右 。 维生素 C 峰 的保留时间稳定在 1.8min 1s 。2.4维生素 C 溶液的可保存性在 (202 的室 温下 , 经连续测定维生素 C 的氧化程度 , 结果 见 表 4。 由 表 4可 知 , 标 样 在 试 验 浓 度 下 , 24h 内无变 化 , 48h 内稍有下降 ; 而样品中由于存在抗坏血酸酶 ,2h 内分别比原浓度下降 3.2%和 6.0%, 48h 内分别比 原浓度下降 14.5%和 11.2%。 因此 , 样品应迅速处理后立即上机 为好 。3结论试

11、 验 结 果 表 明 , 反 相 HPLC -UV 检 测 法 具 有 样 品 用 量少 、 预处理简单 、 流动相无毒 、 速度快 、 选择性好 、 灵敏度高 等特点 7-8, 具有较高的精密度和准确度 。 与普通应用的 2, 6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定法比较 , 定量结果基本一致 , 但对 常有色素物质存在 , 造成滴定法滴定终点观察困难的生物 组织液更能发挥其特长 。4参考文献1陈秋丽 , 甘振威 , 张娅婕 , 等 . 电位滴定法测定深色蔬菜和水果中的维生素 CJ.吉林大学学报 :医学版 , 2004(5:821-822.2李军 . 紫外分光光度法测定果蔬中的维生素 CJ.河北职业技术

12、师范学院学报 , 2000, 14(1:41-44.3耿立威 . 西红 柿中 维生素 C 的 分 光 光 度 法 测 定 J.吉 林 师 范 大 学 学报 :自然科学版 , 2003, 24(3:91-92.4王雪梅 , 高素莲 , 于金文 .HPLC 法测定新鲜草莓中水溶性维生素 J.食品科学 , 1999, 20(5:52-53.5冯德明 , 周晓霞 . 用高效液相色谱 (HPLC 法测定饮料中维生素 C 的含量 J.饮料工业 , 2003, 6(1:43-46.6李连朝 , 康靖全 , 杨德祥 , 等 . 用反相高效液相色谱法测定食物 、 药物和生理液中的维生素 CJ.色谱 , 1986

13、(6:335. 7陶宗晋 . 色谱法 M.北京 :科学出版社 , 1986:69.8中国土壤学会农业化学专业委员会 . 土壤农业化学常规分析方法 M.北京 :科学出版社 , 1983:338.(上接第 29页 K =936.3712, K =893.8137。由比较知 , 稻 -鱼区 的环境容纳量为 K =936.3712, 稻 -鸭 -鱼区的环境容纳量为 K =893.8137, 易知在这 2个区鱼鸭的活动对蜘蛛的数量影响不大 , 稻 -鸭 -鱼区的 K 值稍小 , 则 说 明 鸭 活 动 对 蜘 蛛 的 数 量 变 化 稍 有 影 响 , 而 在 常 规 用 药 区 , 由于化学农药的破坏

14、性作用 , K 值最大仅为 444.2196, 这 也反映了化学农药的副作用 , 化学农药的不合理施用会对 生态环境造成极大的破坏 17。在 3个区的自然增长率 , 常规用药区 、 稻 -鱼区 、 稻 -鸭 -鱼区分别为 r =0.0631、 r =0.1532、 r =0.1373。 说明在稻 -鱼区 和稻 -鸭 -鱼区 , 蜘蛛的数量增长属于较高增长率 , 说明此复 合生态系统中 , 鸭和鱼对蜘蛛的数量增长繁殖影响不大 , 而 在常规用药区 , 化学农药在杀灭害虫的同时也杀死了天敌蜘 蛛 , 自然增长率 r 值仅 0.0631, 比稻 -鱼区的 r 值 0.1532和 稻 -鸭 -鱼区的

15、r 值 0.1373低 58.8%和 54.0%。 处于极低的 增长率 , 化学农药的危害由此可见一斑 。4致谢研究过程中得到桃江县农业局刘若书高级农艺师 、 林温华站长的帮助 , 特此致谢 !5参考文献1冉茂林 , 陈铮 . 我国 稻 田 养 鸭 的 发 展 及 研 究 现 状 J.中 国 畜 牧 杂 志 ,1993, 29(5:58-60.2王 缨 , 雷 慰 慈 . 稻 田 种 养 模 式 生 态 效 益 研 究 J.生 态 学 报 , 2000, 20(2:311-316.3郑永华 , 邓国彬 , 卢光敏 . 稻鱼鸭复合生态经济效益的初步研究 J.应用生态学报 , 1997, 8(4:

16、431-434.4郑永华 , 邓国彬 . 稻鱼鸭种养共生模式效益的研 究及 综合 评价 J.生态农业研究 , 1998, 6(1:48-51.5刘向东 , 张孝羲 , 郭慧芳 , 等 . 稻田蜘蛛群落对稻飞虱的控制功能作用研究 J.生态学报 , 2001, 21(1:100-105.6朱凤姑 , 丰庆生 , 诸葛梓 . 稻鸭生态结构对稻田有害生物群落的控制作用 J.浙江农业学报 , 2004, 16(1:37-41.7杨治平 , 刘小燕 , 黄璜 , 等 . 稻田养鸭对稻鸭复合系统中病 、 虫 、 草害及蜘蛛的影响研究 J.生态学报 , 2004, 24(12:2756-2760.8农业部农作

17、物病虫测报总站 . 农作物主要病虫测报办法 M.李祖荫 ,译 . 北京 :农业出版社 , 1981.9金岚 . 环境生态学 M.北京 :高等教育出版社 , 1992.10丁 岩 钦 . 昆 虫 种 群 数 学 生 态 学 原 理 与 应 用 M.北 京 :科 学 出 版 社 ,1980.11瓦利 , 格拉德韦尔 , 哈塞尔 . 昆虫 种群 生态 学分析 法 M.北 京 :科 学出版社 , 1981.12皮切尔 , 哈特 . 渔业生态学 M.上海 :华东师范大学出版社 , 1986. 13史密斯 . 生态学模型 M.郎所 , 译 . 北京 :科学出版社 , 1979.14孙儒泳 . 种群 科学

18、管理与 数学 模型 种群的 盛衰 兴亡 M.上海 :上海科学技术出版社 , 1983.15苏 金 明 , 阮 沈 勇 .Matlab 6.1实 用 指 南 M.北 京 :电 子 工 业 出 版 社 ,2002.16郭 晶 . MATLAB 6.5辅 助 优 化 计 算 与 设 计 M.北 京 :电 子 工 业 出 版社 , 2003.17傅克文 . 农业环境的化学污染 M.北京 :农业出版社 , 1985.表 3测定方法比较结果样品 维生素 C 含量 mg/100g 色谱法 滴定法苹果 18.007.34苹果 211.9212.42早酥梨 6.765.94茄子 7.306.47辣椒 120.10117.40白菜55.8058.30郝学宁等 :HPLC 法测定果蔬中维生素 C2.50.002.50.002.50.00维生素 C 标样样品 1样品 2图 1标准维生素 C 和典型样品色谱维生素 C维生素 C 维生素 C表 4维生素 C 氧化程度结果样品维生素 C 浓度 mg/mL起始 2h 4h 6h 8h 24h 48h标样 样品 10.05580.05400.05380.05370.05200.05070.0477样品 20.01340.01260.01260.01250.01190.01190.011931