HPLC法测定果蔬中维生素C精.docx

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HPLC法测定果蔬中维生素C精

农业基础科学现代农业科技2011年第3期

表1

精密度试验结果

样品变异系数

%123456平均

刀豆角31.6031.2030.8030.930.3031.2031.000.441.42西瓜皮

9.809.409.509.4

9.30

9.30

9.45

0.192.01

维生素C含量∥mg/100g

标准差

mg/100g注:

表中检出量均为5次平行测定平均值。

表2

回收率

样品样品含量

mg/100g加入标样量

mg检出量

mg回收率

%苹果11.9220.019.4497.2菜瓜14.2020.018.4492.2辣椒155.9050.054.90109.8西红柿16.0820.019.4497.2杏

15.3620.019.9499.7

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一,它能增强人体抵抗力,预防坏血病,因此又称抗坏血酸。

维生素C分布很广,主要存在于植物性食物的果实、浆果和蔬菜中。

因此,测定水果及蔬菜中的维生素C含量,对评定其营养价值有重要意义。

维生素C的测定方法有多种,包括容量法、比色法以及荧光光度法、电位法[1]和紫外分光光度法[2-3]等,各种方法均有特长和不足。

高效液相色谱是近年来发展起来的一种快速、高效的分离技术。

运用这一现代色谱工具进行维生素C的检测,国内外曾有报道[4-6]。

在此基础上,开展了液相色谱测定果蔬中维生素C的工作,效果较好。

现将试验情况总结如下。

1材料与方法1.1

仪器与试剂

仪器:

高效液相色谱仪,美国Waters201型,包括510

泵、U6K进样器、481紫外检测器、740数据处理机;MILLI-Q型超纯水装置;GL-20型高速冷冻离心机。

试剂:

磷酸二氢铵,偏磷酸,浓磷酸,抗坏血酸;均为分析纯。

1.2样品前处理

用超纯水配制0.5%的磷酸二氢铵,用0.45μm膜过滤,

将浓磷酸调至pH值为2.3作为流动相。

标样配制:

准确称取维生素C标样50mg,用3%偏磷酸

定容至500mL容量瓶摇匀,再吸取1mL定容至100mL。

样品制备:

大量样品,迅速称取切碎样品100g加等量

3%偏磷酸,倒入组织捣碎机捣碎,称取匀浆20.0g,用3%偏

磷酸定容至100mL容量瓶。

少量样品,称取样品1~5g倒入研钵内,加入少量3%偏磷酸充分研磨成糊状,全部转移定容至100mL容量瓶。

将定容好的容量瓶超声提取10min,取上清液5mL,0℃、2700r/min离心10min,用0.45μm膜过滤后进样。

1.3试验方法

色谱条件:

色谱柱NOVA—PAKC18;流动相0.5%NH4H2PO4,

流速1mL/min;纸速1cm/min;洗脱时间2.5min;检测器

481紫外检测器;波长243.5nm;灵敏度0.1AuFS;进样量10μL。

根据经典的保留值法和样品中维生素C与加入标样后色谱峰迭加来定性。

将标准液注入色谱柱中,经740数据处理机采用单点外标法进行定量,直接打印出分析结果。

2结果与分析2.1

精密度

配制0.0050mg/mL的标准维生素C溶液,进样量从

2.5μL开始,以响应值与进样量绘制标准曲线均成线性。

试

验结果见表1。

回归方程为:

y=1.030x-2.431×10-5

（r=0.9997

HPLC法测定果蔬中维生素C

郝学宁

郝嫱嫱

刘雪莲

（青海省农林科学院分析测试中心,青海西宁810016

摘要通过高效液相色谱法和国标法2种方法测定了果蔬中的维生素C,通过精密度、准确度、回收率等方法对比结果表明:

液相色谱法是一种高效、快速、准确、高灵敏度的分离分析方法。

关键词HPLC法;果蔬;维生素C;测定中图分类号O652.63文献标识码A文章编号1007-5739（201103-0030-02

DeterminationofVitaminCinVegetablesandFruitswithHPLCMethod

HAOXue-ningHAOQiang-qiangLIUXue-lian

（AnalysisandTestingCenterofQinghaiAgricultureandForestrySciences,XiningQinghai810016

AbstractInthispaper,highperformanceliquidchromatographyandnationalstandardmethodwereusedtodetermineVCinfruitsandvegetables.Throughtheprecision,accuracy,recoverymethods,etc.,suchascomparativeresultsshowedthatliquidchromatographywasanefficient,fast,accurateandhighsensitivityseparationanalysismethod.

KeywordsHPLCmethod;fruitsandvegetables;vitaminC;determination

作者简介郝学宁（1955-,男,河北永清人,高级实验师,从事农化分析工作。

收稿日期

2010-12-18

试验条件下维生素C的最小检测量为2.5×10-9g。

2.2方法可靠性

历经制样全过程,在不同基样中加入维生素C,回收考

察其准确度,结果见表2。

由表2可知,样品平均回收率为

99.2%。

标准维生素C和典型样品的色谱图见图1。

部分样品的测定结果与2,6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定

30

法结果比较见表3。

2.3柱效

在有预柱的情况下,1根柱子经过500余次的进样,柱

效无明显变化。

柱压一直保持在1500Pa左右。

维生素C峰的保留时间稳定在1.8min±1s。

2.4维生素C溶液的可保存性

在（20±2℃的室温下,经连续测定维生素C的氧化程

度,结果见表4。

由表4可知,标样在试验浓度下,24h内

无变化,48h内稍有下降;而样品中由于存在抗坏血酸酶,

2h内分别比原浓度下降3.2%和6.0%,48h内分别比原浓

度下降14.5%和11.2%。

因此,样品应迅速处理后立即上机为好。

3结论

试验结果表明,反相HPLC-UV检测法具有样品用量

少、预处理简单、流动相无毒、速度快、选择性好、灵敏度高等特点[7-8],具有较高的精密度和准确度。

与普通应用的2,6-二氯苯酚吲哚酚钠盐滴定法比较,定量结果基本一致,但对常有色素物质存在,造成滴定法滴定终点观察困难的生物组织液更能发挥其特长。

4参考文献

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医学版,2004（5:

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[2]李军.紫外分光光度法测定果蔬中的维生素C[J].河北职业技术师范

学院学报,2000,14（1:

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[3]耿立威.西红柿中维生素C的分光光度法测定[J].吉林师范大学学

报:

自然科学版,2003,24（3:

91-92.

[4]王雪梅,高素莲,于金文.HPLC法测定新鲜草莓中水溶性维生素[J].食品科学,1999,20（5:

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[6]李连朝,康靖全,杨德祥,等.用反相高效液相色谱法测定食物、药物

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科学出版社,1986:

69.

[8]中国土壤学会农业化学专业委员会.土壤农业化学常规分析方法[M].北京:

科学出版社,1983:

338.

（上接第29页

K=936.3712,K=893.8137。

由比较知,稻-鱼区的环境容纳量为K=936.3712,稻-鸭-鱼区的环境容纳量为K=893.8137,易知在这2个区鱼鸭

的活动对蜘蛛的数量影响不大,稻-鸭-鱼区的K值稍小,则说明鸭活动对蜘蛛的数量变化稍有影响,而在常规用药区,由于化学农药的破坏性作用,K值最大仅为444.2196,这也反映了化学农药的副作用,化学农药的不合理施用会对生态环境造成极大的破坏[17]。

在3个区的自然增长率,常规用药区、稻-鱼区、稻-鸭-鱼区分别为r=0.0631、r=0.1532、r=0.1373。

说明在稻-鱼区和稻-鸭-鱼区,蜘蛛的数量增长属于较高增长率,说明此复合生态系统中,鸭和鱼对蜘蛛的数量增长繁殖影响不大,而在常规用药区,化学农药在杀灭害虫的同时也杀死了天敌蜘蛛,自然增长率r值仅0.0631,比稻-鱼区的r值0.1532和稻-鸭-鱼区的r值0.1373低58.8%和54.0%。

处于极低的增长率,化学农药的危害由此可见一斑。

4致谢

研究过程中得到桃江县农业局刘若书高级农艺师、林温华站长的

帮助,特此致谢!

5参考文献

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电子工业出版

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表3

测定方法比较结果

样品维生素C含量∥mg/100g色谱法滴定法

苹果18.007.34苹果211.9212.42早酥梨6.765.94茄子7.306.47辣椒120.10117.40白菜

55.8058.30

郝学宁等:

HPLC法测定果蔬中维生素C

2.50.002.50.00

2.5

0.00维生素C标样

样品1

样品2

图1标准维生素C和典型样品色谱

维生素C

维生素C维生素C

表4

维生素C氧化程度结果

样品

维生素C浓度∥mg/mL

起始2h4h6h8h24h48h

标样样品10.05580.05400.05380.05370.05200.05070.0477样品20.01340.01260.01260.01250.01190.01190.0119

31