常用培养基配方.docx

1、常用培养基配方常用培育基配方（微生物学与微生物查验学部分）渤海大学生物与食品科学学院2006年 3月1糖发酵管02 ONPG培育基3西蒙氏柠檬酸盐培育基04 缓冲葡萄糖蛋白胨水 (MR 和 VP 试验用 )5克氏柠檬酸盐培育基6丙二酸钠培育基7葡葡糖铵培育基8HughLeifson 培育基 (O/F 试验用 )9马尿酸钠培育基10营养明胶11苯丙氨酸培育基12氨基酸脱羧酶试验培育基13蛋白胨水 ( 靛基质试验用 )14硫酸亚铁琼脂 ( 硫化氢试验用 )15尿素琼脂16氰化钾 (KCN)培育基17氧化酶试验18硝酸盐培育基19细胞色素氧化酶试验20过氧化氢酶试验21过氧化物酶试验22磷酸盐缓冲液

2、23明胶磷酸盐缓冲液24乳酸苯酚溶液25肉浸液肉汤26肉浸液琼脂27牛肉 ( 或牛心 ) 消化汤28血消化汤29豆粉琼脂30血琼脂31营养琼脂32营养肉汤33乳糖胆盐发酵管34乳糖发酵管35EC 肉汤36缓冲蛋白胨水 (BP)37氯化镁孔雀绿增菌液 (MM)38四硫磺酸钠煌绿增菌液 (TTB)39四硫磺酸钠煌绿增菌液 ( 换用方法 )40亚硒酸盐胱氨酸增菌液 (SC)41GN 增菌液42肠道菌增菌肉汤43亚硫酸铋琼脂 (BS)44 DHL 琼脂45 HE 琼脂46 SS 琼脂47WS琼脂48麦康凯琼脂49伊红美蓝琼脂 (EMB)50三糖铁琼脂 (TSI)51三糖铁琼脂 ( 换用方法 )52克氏

3、双糖铁琼脂 (KI)53克氏双糖铁琼脂 ( 换用方法 )54葡萄糖半固体发酵管555% 乳糖发酵管56CAYE 培育基57Honda 氏产毒肉汤58Elek 氏培育基 ( 毒素测定用 )59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培育基60胰蛋白胨水61Rustigian 氏尿素培育液62氯化钠结晶紫增菌液63氯化钠蔗糖琼脂64嗜盐菌选择性琼脂65% 氯化钠三糖铁琼脂66氯化钠血琼脂67% 氯化钠生化试验培育基68改进磷酸盐缓冲液 ( 小肠结肠炎耶尔森氏菌专用 )69CIN 1 培育基70嗜盐性试验培育基71改进 Y培育基72改进克氏双糖73快速硫化氢 (H2S) 试验琼脂74DNA 酶甲基绿琼脂 (DTA)7

4、5Cary Blair 氏运送培育基76Skirrow 氏培育基77TTC 琼脂78甘氨酸培育基79改进磷酸盐缓冲液80氯化镁孔雀绿肉汤81胰酪胨大豆肉汤82Baird Parker 氏培育基83%氯化钠肉汤84匹克氏肉汤85甘露醇卵黄多粘菌素琼脂86%柠檬酸钠溶液87酪蛋白琼脂88木糖明胶培育基89庖肉培育基90卵黄琼脂培育基91亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂 (SPS) 92 液体硫乙醇酸盐培育基 (FT)93含铁牛奶培育基94动力 - 硝酸盐培育基（ A 法）95动力硝酸盐培育基 (B 法 )96血清肉汤97马丁氏肉汤98明胶培育基99察氏培育基100高盐察氏培育基101马铃薯葡萄糖琼脂

5、(PDA)102马铃薯琼脂103孟加拉红培育基104玉米粉琼脂105大米粉培育基106亚硒酸盐煌绿增菌液107煌绿肉汤增菌液108肠毒素产毒培育基109%蛋白胨水稀释剂110半固体琼脂01 糖发酵管成分：牛肉膏5g蛋白胨10g氯化钠3g磷酸氢二钠 (Na2HPO412H2O)2g%滇麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mL制法：1 葡萄糖发酵管按上述成分派好后，按%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121高压灭菌 15min。2 其余各样糖发酵管可按上述成分派好后，分装每瓶100mL，121高压灭菌 15min。另将各种糖类分别配好 10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于 1

6、00mL培育基内，以无菌操作分装小试管。注： 蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采纳过滤法除菌。试验方法： 从琼脂斜面上挑取小量培育物接种，于 36 1培育，一般察看 2 3d。缓慢反响需察看 14 30d。02 ONPG培育基成分：邻硝基酚 D-半乳糖昔 (ONPG)(O Nitrophenyl D galactopyranoside)60mgL 磷酸钠缓冲液 10mL1%蛋白胨水 30mL制法： 将 ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于 10mm75mm试管，每管，用橡皮塞塞紧。试验方法： 自琼脂斜面上挑取培育物 1 满环接种，于 361培育 13h 和 24h 察看结果

7、。假如半乳糖苷酶产生，则于 13h 变黄色，如无此酶则 24h 不变色。03 西蒙氏柠檬酸盐培育基成分：氯化钠5g硫酸镁 (MgSO47H2O)0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g柠檬酸钠5g琼脂20g蒸馏水1000mL%溴麝香草酚蓝溶液40mL制法： 先将盐类溶解于水内，校订 pH，再加琼脂，加热熔解。而后加入指示剂，混淆平均后分装试管， 121高压灭菌 15min 。放成斜面。试验方法： 挑取少量琼脂培育物接种，于 361培育 4d，每天察看结果。阳性者斜面上有菌落生长，培育基从绿色转为蓝色。04 缓冲葡萄糖蛋白胨水 (MR和 VP试验用 )成分：磷酸氢二钾5g多胨7g葡萄糖5g蒸馏水10

8、00mL制法： 熔解后校订 pH，分装试管，每管 1mL， 121高压灭菌 15min。甲基红 (MR)试验： 自琼脂斜面挑取少量培育物接种本培育基中，于 361培育 25d，哈夫尼亚菌则应在 22 25培育。滴加甲基红试剂一滴，马上察看结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法： 10mg甲基红溶于 30mL95%乙醇中，而后加入 20mL蒸馏水。V P 试验： 用琼脂培育物接种本培育基中，于 361培育 2 4d。哈夫尼亚菌则应在 22 25培育。加入 6%萘酚乙醇溶液和 40%氢氧化钾溶液，充足振摇试管，察看结果。阳性反响立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在 361下培育 4h

9、 再进行察看。05 克氏柠檬酸盐培育基成分：柠檬酸钠3g葡萄糖0.2g酵母浸膏0.5g单盐酸半胱氨酸0.1g磷酸二氢钾1g氯化钠5g%酚红溶液6mL琼脂 15g蒸馏水 1000mL制法： 加热溶解，分装试管， 121高压灭菌 15min。放成斜面。试验方法： 用琼脂培育物接种整个斜面，在 361培育 7d，每天察看结果。阳性者培育基变成红色。06 丙二酸钠培育基成分：酵母浸膏1g硫酸铵2g磷酸氢二钾0.6g磷酸二氢钾0.4g氯化钠2g丙二酸钠3g%溴麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mL制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校订 pH 后再加入指示剂， 分装试管， 121高压灭菌 15min。试

10、验方法： 用新鲜的琼脂培育物接种，于361培育48h，察看结果。阳性者由绿色变成蓝色。07 葡葡糖铵培育基成分：氯化钠5g硫酸镁 (MgSO47H2O)0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g葡萄糖2g琼脂20g蒸馏水1000mL%溴麝香草酚蓝溶液 40mL制法： 先将盐类和糖溶解于水内，校订 pH，再加琼脂，加热熔解，而后加入指示剂，混淆平均后分装试管， 121高压灭菌 15min，放成斜面。试验方法： 用接种针轻轻涉及培育物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼察看不见浑浊，以每一接种环内含菌数在 20100 之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种一般斜面一支作为比较。于 36

11、1培育 24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在比较培育基上生长优秀。如在葡萄糖铵斜面生长极细小的菌落可视为阴性结果。注： 容器使用前应用洁净液浸泡。再用清水、蒸馏水冲刷干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。假如操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。08 HughLeifson 培育基 (O/F 试验用 )成分：蛋白胨2g氯化钠5g磷酸氢二钾0.3g琼脂4g葡萄糖10g%溴麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mL制法： 将蛋白胨和盐类加水溶解后，校订 pH 至。加入葡萄糖、琼脂煮沸，熔解琼脂，而后加入指示剂。混匀后，分装试管， 121高压灭菌 15mi

12、n，直立凝结备用。试验方法： 从斜面上挑取小量培育物作穿刺接种，同时接种两支培育基，此中一支于接种后滴加熔解的 1%琼脂液于表面，高度约 1cm，于 361培育。9马尿酸钠培育基成分：马尿酸钠 1g肉浸液 100mL制法： 将马尿酸钠溶解于肉浸液内， 分装于小试管内， 并于管壁画一横线。 以标记管内液面高度，高压灭菌 121 20min。试剂： 三氯化铁 (FeCl3 6H2O)12g，溶于 2%盐酸溶液 100mL中即成。试验方法： 用纯培育物接种， 于 42培育 48h，察看培育液能否抵达试管壁上记号处， 如不足时，用蒸馏水补足至原量。 经离心积淀， 汲取上清液，加入三氯化铁试剂， 马上混

13、淆平均， 经 10 15min，察看结果。结果： 出现长久之积淀物为阳性。10 营养明胶成分：蛋白胨5g牛肉膏3g明胶120g蒸馏水1000mL制法： 加热溶解、校订至，分装小管， 121高压灭菌 10min，拿出后快速冷却，使其凝结。复查最后 pH应为。试验方法： 用琼脂培育物穿刺接种，放在 22 25培育，每天察看结果，记录液化时间。或放在36 士 1培育，每天拿出，放冰箱内 30min 后再察看结果。11苯丙氨酸培育基成分：酵母浸膏3gDI 苯丙氨酸 ( 或 L苯丙氨酸 1g)2g磷酸氢二钠1g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000mL制法： 加热溶解后分装试管，121高压灭菌 15min，

14、使成斜面。试验方法： 自琼脂斜面上挑取大批培育物，移种于苯丙氨酸琼脂，在 361培育4h 或 18 24h。滴加 10%三氯化铁溶液 2 3 滴，自斜面培育物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。12 氨基酸脱羧酶试验培育基成分：蛋白胨5g酵母浸膏3g葡萄糖1g蒸馏水1000mL%滇甲酚紫乙醇溶液1mLL氨基酸或 DL氨基酸或1g/100mL制法： 除氨基酸之外的成分加热溶解后，分装每瓶酸和鸟氨酸。 L氨基酸按 %加入， DL氨基酸按100mL，分别加入各样氨基酸：赖氨酸、精氨1%加入。再行校订 pH 至。比较培育基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管，上边滴加一层液体白腊， 115高压灭菌

15、 10min。试验方法： 从琼脂斜面上挑取培育物接种，于 361培育 18 24h，察看结果。氨基酸脱羧酶阳性者因为产碱，培育基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培育基变成黄色。比较管应为黄色。13 蛋白胨水 ( 靛基质试验用 )成分：蛋白胨 ( 或胰蛋白胨 ) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mL制法： 按上述成分派制，分装小试管， 121高压灭菌 15min。靛基质试剂柯凡克试剂 ：将 5g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL戊醇中。而后缓慢加入浓盐酸 25mL。欧波试剂 ：将 1g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 95mL95%乙醇内。而后缓慢加入浓盐酸 20mL。试验方法 ：挑取小

16、量培育物接种，在 361培育 1 2d，必需时可培育 45d。加入柯凡克试剂约，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧波试剂约，沿管壁流下，覆盖于培育液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注： 蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种判定后方可使用。14 硫酸亚铁琼脂 ( 硫化氢试验用 )成分：牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000mL制法： 加热溶解，校订 pH，分装试管， 115高压灭菌 15min，拿出直立候其凝结。试验方法： 挑取琼脂培育物，沿管壁穿刺，于 361培育 1 2d，察看结果。产硫化氢者

17、使培养基变成黑色。注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采纳三糖铁琼脂或本培育基。15 尿素琼脂成分：蛋白胨1g氯化钠5g葡萄糖1g磷酸二氢钾2g%酚红溶液3mL琼脂20g蒸馏水 1000mL20%尿素溶液 100mL制法： 将除尿素和琼脂之外的成分派好，并校订 pH，加入琼脂，加热熔解并分装烧瓶。 121高压灭菌 15min。冷至 50 55，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最后浓度为 2%，最后 pH 应为。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。试验方法： 挑取琼脂培育物接种，在 361培育 24h，察看结果。尿素酶阳性者因为产碱而使培育基变成红色。16 氰化钾 (KCN)培育基成分：蛋白胨10g

18、氯化钠5g磷酸二氢钾0.225g磷酸氢二钠5.64g蒸馏水1000mL%氰化钾溶液20mL制法：将除氰化钾之外的成分派好后分装烧瓶， 121高压灭菌 15min。放在冰箱内使其充足冷却。每 100mL培育基加入 %氰化钾溶液 ( 最后浓度为 1 10000) ，分装于 12mm100mm灭菌试管，每管约 4mL，马上用灭菌橡皮塞塞紧，放在 4冰箱内，起码可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培育基作为比较培育基，分装试管备用。17氧化酶试验试剂：1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。1% - 萘酚乙醇溶液。试验方法： 取白色干净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性

19、者体现粉红色，并渐渐加深；再加 - 萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内体现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管汲取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反响与以上同样。18 硝酸盐培育基成分：硝酸钾0.2g蛋白5g蒸馏水1000mL制法： 溶解，校订 pH，分装试管，每管约 5mL， 121高压灭菌 15min。硝酸盐复原试剂：甲液：将对氨基苯磺酸 0.8g 溶解于 L 乙酸溶液 100mL 中。乙液：将甲萘胺 0.5g 溶解于 L 乙酸溶液 100mL中。试验方法： 接种后在 361培育 14d，加入甲液和乙液各一滴，察看结果。硝酸盐复原为亚硝酸盐时于马上或数分钟内显红色。注： 本试验阴性的原由有三

20、：细菌不可以复原硝酸盐；亚硝酸盐持续分解，生成氨和氮；培育基不适于细菌的生长。如欲检查培育基中硝酸盐能否未被分解，可再加入锌粉少量，可使硝酸盐复原为亚硝酸盐而体现红色。19细胞色素氧化酶试验试剂：1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。1% - 萘酚乙醇溶液。试验方法： 取 37 ( 或低于 37 ) 培育 20h 的斜面培育物一支，将两种试剂各 2 3 滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混淆液流经斜面上的培育物。如系平板培育物，则可用试剂混淆液滴在菌落上。结果： 于 2min 内体现蓝色者为阳性。阳性培育物大多半于半分钟内出现强阳性反响， 2min 此后出现轻微或可疑反响均作为阴性结果。20过

21、氧化氢酶试验试剂： 3%过氧化氢溶液：临用时配制。试验方法： 挑取固体培育基上菌落一接种环，置于干净试管内，滴加 3%过氧化氢溶液 2mL，察看结果。结果： 于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。21过氧化物酶试验试剂： 2%儿茶酚溶液。3%过氧化氢溶液。试验方法： 挑取固体培育基上菌落一接种环，置于干净试管内，滴加 2%儿茶酚溶液 1mL 及 3%过氧化氢溶液 1mL。静置于室温 (20 ) 中 30 60min，察看结果。结果： 阳性反响，细菌变成黑褐色；阴性反响，细菌不变色。注： 过氧化物酶的作用可受氰化钾的克制。22 磷酸盐缓冲液储藏液磷酸二氢钾34g1mol/L 氢氧化钠溶

22、液175mL蒸馏水825mL制法： 先将磷酸盐溶解于 500mL蒸馏水中，用 1mol/L 氢氧化钠溶液校订 pH后，再用蒸馏水稀释至 1000mL。稀释液：取储藏液， 用蒸馏水稀释至 1000mL。分装每瓶 100mL或每管 10mL，121高压灭菌 15min。23 明胶磷酸盐缓冲液成分：明胶2g磷酸氢二钠4g蒸馏水1000mL制法： 加热溶解，校订 pH， 121高压灭菌 15min。24 乳酸苯酚溶液成分：苯酚10g乳酸 (比重10g甘油20g蒸馏水10mL制法： 将苯酚在水中加热溶解，而后加入乳酸及甘油。用途： 查验真菌形态时用。25 肉浸液肉汤成分：绞碎牛肉500g氯化钠5g蛋白胨

23、10g磷酸氢二钾2g蒸馏水1000mL制法： 将绞碎之去筋膜无油脂牛肉 500g 加蒸馏水 1000mL，混淆后放冰箱留宿，除掉液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完整凝结成块，用绒布过滤，并挤压采集所有滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校订煮沸并过滤，分装烧瓶， 121高压灭菌 30min。26 肉浸液琼脂成分：肉浸液肉汤1000mL琼脂17 20g制法： 加热熔解琼脂， 分装烧瓶或试管，121高压灭菌 30min。依据需要， 倾注平板或放成斜面。27 牛肉 ( 或牛心 ) 消化汤成分：绞碎牛肉 ( 或牛心 )1000g15%氢氧化钠溶液27mL胰蛋白酶40mL三氯甲烷1m

24、L氯化钠10g蒸馏水2000mL制法：1 称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到 80，保持 15min 。2加氢氧化钠溶液，对 pH 试纸呈弱碱性，冷至 40。3加胰蛋白酶、氯仿，在 361搁置 45h，每小时摇动一二次。4 4h 后，汲取上层液 5mL于试管中，加 5%硫酸铜溶液、 4%氢氧化钠溶液 5mL，混淆之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱拿出。5加入 15%乙酸溶液 45mL，对 pH 试纸呈酸性。6煮沸 15min，使胰蛋白酶损坏，冷后，放冰箱内一夜。7第二天汲取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。8校订 ( 加 15%氢氧化钠溶液约 10mL)，加热，用滤纸过滤，分装烧

25、瓶，121高压灭菌 20min。注： 此培育基可作为琼脂培育基的基础，不需加蛋白胨。胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇 500mL、蒸馏水 1500mL，混淆之，装人玻塞瓶内。每天摇匀三次。 3d 后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至%，放冰箱内保存备用。28血消化汤成分：绞碎猪胃100g绞碎猪血块100g蒸馏水1000mL浓盐酸10mL制法：1清洗猪胃，除掉油脂，保存胃粘膜，用绞肉机绞碎。2用绞肉机将猪血块绞碎。3 将蒸馏水加热至 55，加入猪胃、猪血块和盐酸，置 55水浴中 24h，经常加以摇动。4从水浴内拿出，加入 1moL/L 碳酸钠溶液 5mL，煮沸 10min ，置于

26、冰箱内一夜。5汲取上层清液，加磷酸氢二钾 1g，加热至 75，加入 1mol/L 碳酸钠溶液 45mL，煮沸，校订。6用滤纸过滤，分装烧瓶， 121高压灭菌 20min 。29豆粉琼脂成分：牛心消化汤 1000mL琼脂 20g黄豆粉浸液 50mL制法： 将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤。加入豌豆粉浸液，分装每瓶 100mL，121高压灭菌 15min。豌豆粉浸液制法： 取豌豆粉 5g、氯化钠 10g，加入蒸馏水 100mL。置 100水浴内加热 1h，放于冰箱中留宿。汲取上清液即为豌豆浸液。30 血琼脂成分：豆粉琼脂 100mL脱纤维羊血 ( 或兔血 ) 5 10mL制法： 加热熔解琼脂

27、，冷至 50，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其余营养丰富的基础培育基配制血琼脂。31营养琼脂成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15 20g蒸馏水 1000mL制法： 将除琼脂之外的各成分溶解于蒸馏水内，加入 15%氢氧化钠溶液约 2mL，校订入琼脂，加热煮沸，使琼脂熔解。分装烧瓶， 121高压灭菌 15min。注： 此培育基可供一般细菌培育之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为如作成平板或斜面，则应为 2%。pH 至。加%；32营养肉汤成分：蛋白陈10g牛肉膏3g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法： 按上述成分混淆，溶解后校订 pH，分装烧瓶，每瓶 225mL， 121高压灭菌 15min。33乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨20g猪胆盐 ( 或牛、羊胆盐 )5g乳糖10g%滇甲酚紫水溶