常用培养基配方.docx
《常用培养基配方.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常用培养基配方.docx（80页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
常用培养基配方
常用培育基配方
（微生物学与微生物查验学部分）
渤海大学生物与食品科学学院
2006年3月
1糖发酵管
02ONPG培育基
3西蒙氏柠檬酸盐培育基
04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）
5克氏柠檬酸盐培育基
6丙二酸钠培育基
7葡葡糖铵培育基
8Hugh－Leifson培育基（O/F试验用）
9马尿酸钠培育基
10营养明胶
11苯丙氨酸培育基
12氨基酸脱羧酶试验培育基
13蛋白胨水（靛基质试验用）
14硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）
15尿素琼脂
16氰化钾（KCN）培育基
17氧化酶试验
18硝酸盐培育基
19细胞色素氧化酶试验
20过氧化氢酶试验
21过氧化物酶试验
22磷酸盐缓冲液
23明胶磷酸盐缓冲液
24乳酸－苯酚溶液
25肉浸液肉汤
26肉浸液琼脂
27牛肉（或牛心）消化汤
28血消化汤
29豆粉琼脂
30血琼脂
31营养琼脂
32营养肉汤
33乳糖胆盐发酵管
34乳糖发酵管
35EC肉汤
36缓冲蛋白胨水（BP）
37氯化镁孔雀绿增菌液（MM）
38四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）
39四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法）
40亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）
41GN增菌液
42肠道菌增菌肉汤
43亚硫酸铋琼脂（BS）
44DHL琼脂
45HE琼脂
46SS琼脂
47WS琼脂
48麦康凯琼脂
49伊红美蓝琼脂（EMB）
50三糖铁琼脂（TSI）
51三糖铁琼脂（换用方法）
52克氏双糖铁琼脂（KI）
53克氏双糖铁琼脂（换用方法）
54葡萄糖半固体发酵管
555%乳糖发酵管
56CAYE培育基
57Honda氏产毒肉汤
58Elek氏培育基（毒素测定用）
59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培育基
60胰蛋白胨水
61Rustigian氏尿素培育液
62氯化钠结晶紫增菌液
63氯化钠蔗糖琼脂
64嗜盐菌选择性琼脂
65%氯化钠三糖铁琼脂
66氯化钠血琼脂
67%氯化钠生化试验培育基
68改进磷酸盐缓冲液（小肠结肠炎耶尔森氏菌专用）
69CIN－1培育基
70嗜盐性试验培育基
71改进Y培育基
72改进克氏双糖
73快速硫化氢（H2S）试验琼脂
74DNA酶甲基绿琼脂（DTA）
75Cary－Blair氏运送培育基
76Skirrow氏培育基
77TTC琼脂
78甘氨酸培育基
79改进磷酸盐缓冲液
80氯化镁孔雀绿肉汤
81胰酪胨大豆肉汤
82Baird－Parker氏培育基
83%氯化钠肉汤
84匹克氏肉汤
85甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
86%柠檬酸钠溶液
87酪蛋白琼脂
88木糖－明胶培育基
89庖肉培育基
90卵黄琼脂培育基
91亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶琼脂（SPS）92液体硫乙醇酸盐培育基（FT）
93含铁牛奶培育基
94动力-硝酸盐培育基（A法）
95动力－硝酸盐培育基（B法）
96血清肉汤
97马丁氏肉汤
98明胶培育基
99察氏培育基
100高盐察氏培育基
101马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）
102马铃薯琼脂
103孟加拉红培育基
104玉米粉琼脂
105大米粉培育基
106亚硒酸盐煌绿增菌液
107煌绿肉汤增菌液
108肠毒素产毒培育基
109%蛋白胨水稀释剂
110半固体琼脂
01糖发酵管
成分：
牛肉膏
5g
蛋白胨
10g
氯化钠
3g
磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）2g
%滇麝香草酚蓝溶液
12mL
蒸馏水
1000mL
制法：
1葡萄糖发酵管按上述成分派好后，按
%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，
121℃高压灭菌15min。
2其余各样糖发酵管可按上述成分派好后，分装每瓶
100mL，121℃高压灭菌15min。
另将各
种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。
将
5mL糖溶液加入于100mL培育基内，以无菌操作分
装小试管。
注：
蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采纳过滤法除菌。
试验方法：
从琼脂斜面上挑取小量培育物接种，于36℃±1℃培育，一般察看2～3d。
缓慢反响
需察看14～30d。
02ONPG培育基
成分：
邻硝基酚β－D-半乳糖昔（ONPG）
（O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside）
60mg
L磷酸钠缓冲液10mL
1%蛋白胨水30mL
制法：
将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管，每管，
用橡皮塞塞紧。
试验方法：
自琼脂斜面上挑取培育物1满环接种，于36±1℃培育1～3h和24h察看结果。
假如
β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。
03西蒙氏柠檬酸盐培育基
成分：
氯化钠
5g
硫酸镁（MgSO4·7H2O）
0.2g
磷酸二氢铵
1g
磷酸氢二钾
1g
柠檬酸钠
5g
琼脂
20g
蒸馏水
1000mL
%溴麝香草酚蓝溶液
40mL
制法：
先将盐类溶解于水内，校订pH，再加琼脂，加热熔解。
而后加入指示剂，混淆平均后分装试管，121℃高压灭菌15min。
放成斜面。
试验方法：
挑取少量琼脂培育物接种，于36±1℃培育4d，每天察看结果。
阳性者斜面上有菌落生长，培育基从绿色转为蓝色。
04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）
成分：
磷酸氢二钾
5g
多胨
7g
葡萄糖
5g
蒸馏水
1000mL
制法：
熔解后校订pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。
甲基红（MR）试验：
自琼脂斜面挑取少量培育物接种本培育基中，于36±1℃培育2～5d，哈夫尼
亚菌则应在22～25℃培育。
滴加甲基红试剂一滴，马上察看结果。
鲜红色为阳性，黄色为阴性。
甲基红试剂配法：
10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，而后加入20mL蒸馏水。
V－P试验：
用琼脂培育物接种本培育基中，于36±1℃培育2～4d。
哈夫尼亚菌则应在22～25℃
培育。
加入6%α－萘酚－乙醇溶液和40%氢氧化钾溶液，充足振摇试管，察看结果。
阳性反响立
刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培育4h再进行察看。
05克氏柠檬酸盐培育基
成分：
柠檬酸钠
3g
葡萄糖
0.2g
酵母浸膏
0.5g
单盐酸半胱氨酸
0.1g
磷酸二氢钾
1g
氯化钠
5g
%酚红溶液
6mL
琼脂15g
蒸馏水1000mL
制法：
加热溶解，分装试管，121℃高压灭菌15min。
放成斜面。
试验方法：
用琼脂培育物接种整个斜面，在36±1℃培育7d，每天察看结果。
阳性者培育基变成红色。
06丙二酸钠培育基
成分：
酵母浸膏
1g
硫酸铵
2g
磷酸氢二钾
0.6g
磷酸二氢钾
0.4g
氯化钠
2g
丙二酸钠
3g
%溴麝香草酚蓝溶液
12mL
蒸馏水
1000mL
制法：
先将酵母浸膏和盐类溶解于水，
校订pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。
试验方法：
用新鲜的琼脂培育物接种，于36±1℃培育
48h，察看结果。
阳性者由绿色变成蓝色。
07葡葡糖铵培育基
成分：
氯化钠
5g
硫酸镁（MgSO4·7H2O）
0.2g
磷酸二氢铵
1g
磷酸氢二钾
1g
葡萄糖
2g
琼脂
20g
蒸馏水
1000mL
%溴麝香草酚蓝溶液40mL
制法：
先将盐类和糖溶解于水内，校订pH，再加琼脂，加热熔解，而后加入指示剂，混淆平均后
分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。
试验方法：
用接种针轻轻涉及培育物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼察看不见浑浊，
以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。
将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种
一般斜面一支作为比较。
于36±1℃培育24h。
阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在比较培育基上生长优秀。
如在葡萄糖铵斜面生长极细小的菌落可视为阴性结果。
注：
容器使用前应用洁净液浸泡。
再用清水、蒸馏水冲刷干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。
假如操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。
08Hugh－Leifson培育基（O/F试验用）
成分：
蛋白胨
2g
氯化钠
5g
磷酸氢二钾
0.3g
琼脂
4g
葡萄糖
10g
%溴麝香草酚蓝溶液
12mL
蒸馏水
1000mL
制法：
将蛋白胨和盐类加水溶解后，校订pH至。
加入葡萄糖、琼脂煮沸，熔解琼脂，而后加入指示剂。
混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min，直立凝结备用。
试验方法：
从斜面上挑取小量培育物作穿刺接种，同时接种两支培育基，此中一支于接种后滴加熔解的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于36±1℃培育。
9马尿酸钠培育基
成分：
马尿酸钠1g
肉浸液100mL
制法：
将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。
以标记管内液面高度，
高压灭菌121℃20min。
试剂：
三氯化铁（FeCl3·6H2O）12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。
试验方法：
用纯培育物接种，于42℃培育48h，察看培育液能否抵达试管壁上记号处，如不足时，
用蒸馏水补足至原量。
经离心积淀，汲取上清液，加入三氯化铁试剂，马上混淆平均，经10～15min，察看结果。
结果：
出现长久之积淀物为阳性。
10营养明胶
成分：
蛋白胨
5g
牛肉膏
3g
明胶
120g
蒸馏水
1000mL
～
制法：
加热溶解、校订至～，分装小管，121℃高压灭菌10min，拿出后快速冷却，使其凝结。
复
查最后pH应为～。
试验方法：
用琼脂培育物穿刺接种，放在22～25℃培育，每天察看结果，记录液化时间。
或放在
36士1℃培育，每天拿出，放冰箱内30min后再察看结果。
11苯丙氨酸培育基
成分：
酵母浸膏
3g
DI－苯丙氨酸（或L－苯丙氨酸1g）
2g
磷酸氢二钠
1g
氯化钠
5g
琼脂
12g
蒸馏水
1000mL
制法：
加热溶解后分装试管，
121℃高压灭菌15min，使成斜面。
试验方法：
自琼脂斜面上挑取大批培育物，
移种于苯丙氨酸琼脂，
在36±1℃培育
4h或18～24h。
滴加10%三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培育物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
12氨基酸脱羧酶试验培育基
成分：
蛋白胨
5g
酵母浸膏
3g
葡萄糖
1g
蒸馏水
1000mL
%滇甲酚紫－乙醇溶液
1mL
L－氨基酸或DL－氨基酸
或
1g/100mL
制法：
除氨基酸之外的成分加热溶解后，分装每瓶酸和鸟氨酸。
L－氨基酸按%加入，DL－氨基酸按
100mL，分别加入各样氨基酸：
赖氨酸、精氨
1%加入。
再行校订pH至。
比较培育基不加氨基
酸。
分装于灭菌的小试管内，每管，上边滴加一层液体白腊，115℃高压灭菌10min。
试验方法：
从琼脂斜面上挑取培育物接种，于36±1℃培育18～24h，察看结果。
氨基酸脱羧酶
阳性者因为产碱，培育基应呈紫色。
阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培育基变成黄色。
比较管应为黄色。
13蛋白胨水（靛基质试验用）
成分：
蛋白胨（或胰蛋白胨）20g
氯化钠5g
蒸馏水1000mL
制法：
按上述成分派制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。
靛基质试剂
柯凡克试剂：
将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。
而后缓慢加入浓盐酸25mL。
欧－波试剂：
将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。
而后缓慢加入浓盐酸20mL。
试验方法：
挑取小量培育物接种，在36±1℃培育1～2d，必需时可培育4～5d。
加入柯凡克试剂
约，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧－波试剂约，沿管壁流下，覆盖于培育液表
面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注：
蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。
每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种判定后方可使用。
14硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）
成分：
牛肉膏
3g
酵母浸膏
3g
蛋白胨
10g
硫酸亚铁
0.2g
硫代硫酸钠
0.3g
氯化钠
5g
琼脂
12g
蒸馏水
1000mL
制法：
加热溶解，校订pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，拿出直立候其凝结。
试验方法：
挑取琼脂培育物，沿管壁穿刺，于36±1℃培育1～2d，察看结果。
产硫化氢者使培
养基变成黑色。
注：
肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采纳三糖铁琼脂或本培育基。
15尿素琼脂
成分：
蛋白胨
1g
氯化钠
5g
葡萄糖
1g
磷酸二氢钾
2g
%酚红溶液
3mL
琼脂
20g
蒸馏水1000mL
20%尿素溶液100mL
±
制法：
将除尿素和琼脂之外的成分派好，并校订pH，加入琼脂，加热熔解并分装烧瓶。
121℃高
压灭菌15min。
冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。
尿素的最后浓度为2%，最后pH应
为±。
分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
试验方法：
挑取琼脂培育物接种，在36±1℃培育24h，察看结果。
尿素酶阳性者因为产碱而使
培育基变成红色。
16氰化钾（KCN）培育基
成分：
蛋白胨
10g
氯化钠
5g
磷酸二氢钾
0.225g
磷酸氢二钠
5.64g
蒸馏水
1000mL
%氰化钾溶液
20mL
制法：
将除氰化钾之外的成分派好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
放在冰箱内使其充足冷却。
每100mL培育基加入%氰化钾溶液（最后浓度为1∶10000），分装于12mm×100mm灭菌试管，每管
约4mL，马上用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，起码可保存两个月。
同时，将不加氰化钾的培育基作为比较培育基，分装试管备用。
17氧化酶试验
试剂：
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：
少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。
1%α-萘酚－乙醇溶液。
试验方法：
取白色干净滤纸沾取菌落。
加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者体现粉红色，并渐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内体现鲜蓝色。
阴性于两分钟内不变色。
以毛细吸管汲取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反响与以上同样。
18硝酸盐培育基
成分：
硝酸钾
0.2g
蛋白
5g
蒸馏水
1000mL
制法：
溶解，校订pH，分装试管，每管约5mL，121℃高压灭菌15min。
硝酸盐复原试剂：
甲液：
将对氨基苯磺酸0.8g溶解于L乙酸溶液100mL中。
乙液：
将甲萘胺0.5g溶解于L乙酸溶液100mL中。
试验方法：
接种后在36±1℃培育1～4d，加入甲液和乙液各一滴，察看结果。
硝酸盐复原为亚硝酸盐时于马上或数分钟内显红色。
注：
本试验阴性的原由有三：
细菌不可以复原硝酸盐；亚硝酸盐持续分解，生成氨和氮；培育基不
适于细菌的生长。
如欲检查培育基中硝酸盐能否未被分解，可再加入锌粉少量，可使硝酸盐复原为亚硝酸盐而体现红色。
19细胞色素氧化酶试验
试剂：
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。
1%α-萘酚－乙醇溶液。
试验方法：
取37℃（或低于37℃）培育20h的斜面培育物一支，将两种试剂各2～3滴，从斜面上
端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混淆液流经斜面上的培育物。
如系平板培育物，则可用试剂混淆液滴在菌落上。
结果：
于2min内体现蓝色者为阳性。
阳性培育物大多半于半分钟内出现强阳性反响，2min此后出现轻微或可疑反响均作为阴性结果。
20过氧化氢酶试验
试剂：
3%过氧化氢溶液：
临用时配制。
试验方法：
挑取固体培育基上菌落一接种环，置于干净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，察看结果。
结果：
于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。
21过氧化物酶试验
试剂：
2%儿茶酚溶液。
3%过氧化氢溶液。
试验方法：
挑取固体培育基上菌落一接种环，置于干净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。
静置于室温（20℃）中30～60min，察看结果。
结果：
阳性反响，细菌变成黑褐色；阴性反响，细菌不变色。
注：
过氧化物酶的作用可受氰化钾的克制。
22磷酸盐缓冲液
储藏液
磷酸二氢钾
34g
1mol/L氢氧化钠溶液
175mL
蒸馏水
825mL
制法：
先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校订pH后，再用蒸馏水稀释
至1000mL。
稀释液：
取储藏液，用蒸馏水稀释至1000mL。
分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。
23明胶磷酸盐缓冲液
成分：
明胶
2g
磷酸氢二钠
4g
蒸馏水
1000mL
制法：
加热溶解，校订pH，121℃高压灭菌15min。
24乳酸－苯酚溶液
成分：
苯酚
10g
乳酸（比重
10g
甘油
20g
蒸馏水
10mL
制法：
将苯酚在水中加热溶解，而后加入乳酸及甘油。
用途：
查验真菌形态时用。
25肉浸液肉汤
成分：
绞碎牛肉
500g
氯化钠
5g
蛋白胨
10g
磷酸氢二钾
2g
蒸馏水
1000mL
制法：
将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混淆后放冰箱留宿，除掉液面之浮油，
隔水煮沸半小时，使肉渣完整凝结成块，用绒布过滤，并挤压采集所有滤液，加水补足原量。
加
入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校订～煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。
26肉浸液琼脂
成分：
肉浸液肉汤
1000mL
琼脂
17～20g
制法：
加热熔解琼脂，分装烧瓶或试管，
121℃高压灭菌30min。
依据需要，倾注平板或放成斜面。
27牛肉（或牛心）消化汤
成分：
绞碎牛肉（或牛心）
1000g
15%氢氧化钠溶液
27mL
胰蛋白酶
40mL
三氯甲烷
1mL
氯化钠
10g
蒸馏水
2000mL
制法：
1称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，保持15min。
2加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。
3加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃搁置4～5h，每小时摇动一二次。
44h后，汲取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液、4%氢氧化钠溶液5mL，混淆之。
若呈红色，则不须再消化，可由温箱拿出。
5加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。
6煮沸15min，使胰蛋白酶损坏，冷后，放冰箱内一夜。
7第二天汲取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。
8校订～（加15%氢氧化钠溶液约10mL），加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
注：
①此培育基可作为琼脂培育基的基础，不需加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制：
称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL，混淆之，
装人玻塞瓶内。
每天摇匀三次。
3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至%，放冰箱内保存备用。
28血消化汤
成分：
绞碎猪胃
100g
绞碎猪血块
100g
蒸馏水
1000mL
浓盐酸
10mL
制法：
1清洗猪胃，除掉油脂，保存胃粘膜，用绞肉机绞碎。
2用绞肉机将猪血块绞碎。
3将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24h，经常加以摇动。
4从水浴内拿出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。
5汲取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校订～。
6用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
29豆粉琼脂
成分：
牛心消化汤～1000mL
琼脂20g
黄豆粉浸液50mL
制法：
将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤。
加入豌豆粉浸液，分装每瓶100mL，121℃高
压灭菌15min。
豌豆粉浸液制法：
取豌豆粉5g、氯化钠10g，加入蒸馏水100mL。
置100℃水浴内加热1h，放于
冰箱中留宿。
汲取上清液即为豌豆浸液。
30血琼脂
成分：
～豆粉琼脂100mL
脱纤维羊血（或兔血）5～10mL
制法：
加热熔解琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。
亦可分装灭菌
试管，置成斜面。
亦可用其余营养丰富的基础培育基配制血琼脂。
31营养琼脂
成分：
蛋白胨
10g
牛肉膏
3g
氯化钠
5g
琼脂
15～20g
蒸馏水1000mL
制法：
将除琼脂之外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校订
入琼脂，加热煮沸，使琼脂熔解。
分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
注：
此培育基可供一般细菌培育之用，可倾注平板或制成斜面。
如用于菌落计数，琼脂量为
如作成平板或斜面，则应为2%。
pH至～。
加%；
32营养肉汤
成分：
蛋白陈
10g
牛肉膏
3g
氯化钠
5g
蒸馏水
1000mL
制法：
按上述成分混淆，溶解后校订pH，分装烧瓶，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
33乳糖胆盐发酵管
成分：
蛋白胨
20g
猪胆盐（或牛、羊胆盐）
5g
乳糖
10g
%滇甲酚紫水溶
升级会员 