GB 4789《食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数》.docx

1、GB 4789食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数GB 4789食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数1 范围本标准规定了食品中大肠埃希氏菌（Escherichia coli）计数的方法。本标准适用于食品中大肠埃希氏菌的计数，其中大肠埃希氏菌平板计数法（第二法）不适用于贝类产品。2 术语和定义2.1 大肠埃希氏菌Escherichia coli大肠杆菌广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5发酵乳糖产酸产气，IMViC（靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐）生化试验为或的革兰氏阴性杆菌。以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。2.2 最可能数基于泊松分布的一种间接

2、计数方法，简称为MPN。3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a） 恒温培养箱：36 1 ；b） 冰箱：2 5 ；c） 恒温水浴箱：44.5 0.2 ；d） 天平：感量为0.1 g；c） 均质器；d） 振荡器；e） 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头；f） 无菌锥形瓶：容量500 mL；g） 无菌培养皿：直径90 mm；h） pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸；i） 菌落计数器；j） 紫外灯：波长360 nm366 nm，功率6 W。4 培养基和试剂4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤：见

3、附录A 中A.1。4.2 EC 肉汤（E.coli broth）：见附录A 中A.2。4.3 蛋白胨水：见附录A 中A.3。GB 4789.38-201224.4 缓冲葡萄糖蛋白胨水甲基红(MR)和V-P 试验用：见附录A 中A.4。4.5 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A 中A.5。4.6 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.6。4.7 伊红美蓝（EMB）琼脂：见附录A 中A.7。4.8 营养琼脂斜面：见附录A 中A.8。4.9 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：见附录A 中A.9。4.10 结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-D-葡萄糖苷琼脂（VRBA-MUG）：见附录A 中A.10。4.11 革兰

4、氏染色液：见附录A 中A.11。4.12 Kovacs 靛基质试剂：见附录A 中A.12。4.13 无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.13。4.14 无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.14。GB 4789.38-201235 大肠埃希氏菌MPN 计数（第一法）5.1 检验程序大肠埃希氏菌MPN计数的检验程序见图1。图1 大肠埃希氏菌MPN计数法检验程序不产气361 18h24h361 18h24h361 48h2h44.50.2 48 h2 h检样25g（mL）样品+ 225ml 稀释液，均质10 倍系列稀释选择适宜3 个连续稀释度的样品匀液，接种LST 肉汤管产气EC

5、肉汤不产气产气EMB 平板划线可疑菌落移种营养琼脂斜面或平板IMViC 生化试验，革兰氏染色阴性管阳性管查MPN 表报告GB 4789.38-201245.2 操作步骤5.2.1 样品的稀释5.2.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品，放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8 000r/min10 000 r/min 均质1 min2 min，制成1:10 样品匀液，或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min 制成1:10 的样品匀液。5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。5.2.1.3 样品匀液的pH 值应在6.57.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。