GB 4789《食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数》.docx

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GB4789《食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数》

GB4789《食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数》

1范围

本标准规定了食品中大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）计数的方法。

本标准适用于食品中大肠埃希氏菌的计数，其中大肠埃希氏菌平板计数法（第二法）不适用于贝类产

品。

2术语和定义

2.1大肠埃希氏菌Escherichiacoli

大肠杆菌

广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气，IMViC（靛基质、甲基红、VP

试验、柠檬酸盐）生化试验为＋＋－－或－＋－－的革兰氏阴性杆菌。

以此作为粪便污染指标来评价食品

的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。

2.2最可能数

基于泊松分布的一种间接计数方法，简称为MPN。

3设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a）恒温培养箱：

36℃±1℃；

b）冰箱：

2℃～5℃；

c）恒温水浴箱：

44.5℃±0.2℃；

d）天平：

感量为0.1g；

c）均质器；

d）振荡器；

e）无菌吸管：

1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；

f）无菌锥形瓶：

容量500mL；

g）无菌培养皿：

直径90mm；

h）pH计或pH比色管或精密pH试纸；

i）菌落计数器；

j）紫外灯：

波长360nm～366nm，功率≤6W。

4培养基和试剂

4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤：

见附录A中A.1。

4.2EC肉汤（E.colibroth）：

见附录A中A.2。

4.3蛋白胨水：

见附录A中A.3。

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4.4缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红（MR）和V-P试验用]：

见附录A中A.4。

4.5西蒙氏柠檬酸盐培养基：

见附录A中A.5。

4.6磷酸盐缓冲液：

见附录A中A.6。

4.7伊红美蓝（EMB）琼脂：

见附录A中A.7。

4.8营养琼脂斜面：

见附录A中A.8。

4.9结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：

见附录A中A.9。

4.10结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂（VRBA-MUG）：

见附录A中A.10。

4.11革兰氏染色液：

见附录A中A.11。

4.12Kovacs靛基质试剂：

见附录A中A.12。

4.13无菌1mol/LNaOH：

见附录A中A.13。

4.14无菌1mol/LHCl：

见附录A中A.14。

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5大肠埃希氏菌MPN计数（第一法）

5.1检验程序

大肠埃希氏菌MPN计数的检验程序见图1。

图1大肠埃希氏菌MPN计数法检验程序

不产气

36℃±1℃18h～24h

36℃±1℃18h～24h

36℃±1℃48h±2h

44.5℃±0.2℃48h±2h

检样

25g（mL）样品+225ml稀释液，均质

10倍系列稀释

选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种LST肉汤管

产气

EC肉汤

不产气产气

EMB平板划线

可疑菌落移种营养琼脂斜面或平板

IMViC生化试验，革兰氏染色

阴性管阳性管

查MPN表

报告

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5.2操作步骤

5.2.1样品的稀释

5.2.1.1固体和半固体样品：

称取25g样品，放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8000

r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:

10样品匀液，或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质

袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1:

10的样品匀液。

5.2.1.2液体样品：

以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适

当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:

10的样品匀液。

5.2.1.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。