超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究.pdf

1、1 3 6 0 中草药C h i n e s e T r a d i t i o n a l a n d He r b a l D r u g s 第 3 5卷第 1 2期 2 0 0 4年 1 2月 柱即可重复使用。2 5 结果及得率：银杏叶提取物 5 2 5 g，银杏萜内酯 6 1 5 V o(白果内酯 3 4 4，银杏内酯 C 2 0 9 ，银杏 内酯 A 0 5 ，银杏内酯 B 0 1 2 )，采用乙醇水梯 度洗脱，大孔吸附树脂柱连续分离银杏叶提取物中 萜 内酯组份，真空浓缩后结晶，粗晶用乙醇水溶液重 结晶，其 4 种萜内酯单体纯度和得率见表 1。表 1 产 品纯度 和得 率 Ta b

2、 l e I P u r i t y a n d y i e l d o f p r o d u c t s 采用本工艺将总萜内酯质量分数 6 1 5 的 5 2 5 g原料经纯化可得纯度为 9 5 的白果内酯 1 2 6 5 g，银杏内酯 C 8 1 8 g，银杏内酯 A 1 6 3 g，银杏内酯 B 0 4 3 g，总萜内酯为 2 2 8 9 g。总得率为 4 2 6 ，平均 提取率为 6 9 2 7 。晶体及原料采用 HP L C法测定，与对照品的HP L C图谱相同，没有干扰峰。3 讨论 本法只采用一次柱分离 结晶纯化 即可连续制 得纯度达 9 5 以上的 白果 内酯，银杏内酯 A、B

3、、C 单体。本工艺操作中只采用无毒试剂水和乙醇，对产 品药用提供了安全保障。由于采用的是可重复使用 的大孔树脂，使生产成本降低至约 5 万元 k g。本工 艺简便，采用有机试剂少。因此适用于中试及工业生 产，为大规模开发银杏萜内酯药品奠定了良好基础。Re f e r e n c e s：1 L i Z L E x p l o i t a t i o n a n d E x e r t i o n o f G i n k g o L e a v e s(银杏开 发与利用)M S h a n g s h i：S h a n g h a i S c i e n t i f i c a n d T e

4、 c h n i c a l Pub l i s h e r s，1 9 9 6 2 Z h a n g D Q，He Z F R e s e a r c h i n t h e C h e m a l I n g r e d i e n t s i n Lea v e s o fG i n k g o b i l o b a(银杏叶资源化学研究)M B e i j i n g：Chi n a Li gh t I n du s t r y Pr e s s1 9 99 超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究 张虹。，柳正良 ，王洪泉。，杨 莺。(1 同济大学附属同济医院，上海2 0 0

5、 0 6 5；2 第二军医大学药学院，上海2 0 0 4 3 3；3 利群医院，上海2 0 0 3 3 3)丹参 为唇 形科 植 物丹参 S a l v i a mi l t i o r r h i z a B g e 的干燥根及根茎，味苦，性微寒，祛瘀止痛、活 血通经、清心除烦。丹参主要含有结晶性菲醌类化合 物，如丹 参酮 I(t a n s h i n o n e I)、丹 参 酮 A、B (t a n s h i n o n e A、B)、隐 丹 参 酮(c r y p t o t a n s h i n o n e)、二氢丹参酮(d i h y d r o t a n s h i n

6、o n e)；水溶 性有效成分为丹参素(d a n s h e n s u)及酚酸类成分原 儿 茶 醛(p r o t o c a t e c h u a l d e h y d e)、咖 啡 酸(c a f f e i c a c i d)、迷迭酸 甲酯(m e t h y l r o s ma r i n a t e)等，以及棕 罗汉松酚(I e r r u g i n o 1)等其他成分。脂溶性有效成分 丹参酮 经研究表明具有抑制血栓形成等药理作 用；水溶性有效成分丹参素能抗心肌缺血并对冠状 动脉有较好作用，原儿茶醛能显著增加冠状动脉流 量，对抗 AD P诱导的血小板积聚，并有广谱抗菌作

7、 用。本实验对脂溶性有效成分以丹参酮 为指标，水溶性有效成分 以丹参素、原儿茶醛为指标对丹参 进行提取研究，并作为制剂的一组质控指标。1 仪器与材料 高效 液 相 色 谱 仪：日本 岛津 L C 一9 A，配 有 S P D 6 A紫外可变波长检测器；C R 一4 A数据处理 器；超临界萃取设备：S F X。一1 0型超临界流体萃取 器(美 国 I s c o公 司)；B r a n s o n 1 2 0 0型 超 声 波 清 洗器。丹参酮 A(批号：0 7 6 6 2 0 0 0 1 1)、原儿茶醛(批 号：0 8 1 0 9 4 0 2)购 自中国药品生物制品检定所；丹参 素(纯度大于

8、9 9 )购 自复旦大学药学院天然药物 化学教研室。丹参药材购于上海市药材公司，经第二 军医大学宓鹤鸣教授鉴定。本品经 自然晾干后，6 0 C 干燥 1 2 h，粉碎，过三号筛。甲醇为 H P L C或 AR 纯，蒸馏水为双蒸水(自制)。2 有效成分的测定 2 1 脂溶性成分丹参酮 的测定 2 1 1 色谱条件：色谱柱：D i a mo n s i l T M C l 8 柱(2 5 0 m m4 6 m m，5 m)(迪马公司)；流动相：甲醇一 水 收稿日期：2 0 0 4 0 3 1 2 作者简介：张虹(1 9 6 7 一)，女，浙江海宁人，副主任药师，1 9 9 0 年毕业于上海医科大学

9、药学系，获理学学士学位，2 0 0 1年毕业于第二军 医大学药物分析专业，获医学硕士学位，主要从事药物分析及临床药学研究，发表论文 1 O 余篇。Te l：(0 2 1)5 6 0 5 1 0 8 0 3 2 0 3 E ma i l：z k z h u y a h o o c o m c n 维普资讯 http:/ 中草药C h i n e s e Tr a d i t i o n a l a n d He r b a l D r u g s 第 3 5卷第 1 2期 2 0 0 4年 1 2月 1 3 6 1 (8 5：1 5)；体积 流 量：1 0 mL mi n；灵 敏度：0 0 8

10、AUFS；检 测 波长：2 7 0 a m；柱 温：3 5；进 样 量：1 O t t L。丹参酮 1I 保留时间约为 1 2 5 mi n，其他成分不 影响。2 1 2 线性关系考察：精密称取丹参酮 1I 对照品 1 0 mg，置 5 0 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。用流 动相 稀释 成 1 2 4 8 g mL 的系列 溶液，进 样 1 O L，以峰面积与质量浓度进行线性 回归，得标准 曲线方程：y 一4 3 3 6 5 7 X+0 6 9 0，r 一0 9 9 9 9 8。丹 参酮 1I 在 1 2 4 8 g mL时峰面积与其质量浓度 具有良好的线性关系。2 1 3 供试品溶液

11、的制备：精密称取经真空干燥后 的萃取物 0 1 g，加适量甲醇，超声使溶解，用甲醇配 制成适 当质量浓度，取少量溶液用微孔滤膜(0 4 5 m)滤过，弃去初滤液，取续滤液 0 1 mL于 5 0 m L 量瓶中，加 甲醇至刻度，摇匀，即得。2 2 水溶性成分丹参素、原儿茶醛的含量测定 2 2 1 色谱 条 件：色 谱 柱：D ia m o n s i l T M C 18(2 5 0 mm 4 6 mm，5 m)(迪 马公 司)；流 动 相：甲 醇一 0 5 醋 酸水 溶液(2 5：7 5)；体 积流量：1 0 mE rai n；灵敏度：0 0 8 A UF S；检测波长：2 8 0 a m；

12、柱温：3 5；进样量：1 O L。丹参素和原儿茶醛的保留时 间分别约为 6 5、1 0 2 m i n。2 2 2 线性关系的考察：精密称取丹参素、原儿茶 醛对照品各 5 mg，分别置 5 0 mL棕色量瓶中，加 甲 醇至刻度，摇匀，用流动相稀释成一定质量浓度的系 列溶液，进样 1 O L，以峰面积与质量浓度进行线性 回归，得 标准 曲线 方程及线性 范 围，丹参素：Y一 8 6 7 4 6 X一3 3，r 一0 9 9 9 9，线性范 围：5 O 2 5 0 g mL；原 儿 茶 醛：Y一 6 2 3 4 0 0 X+9 2 5 9，r 一 0 9 9 9 9，线性范围：2 5 2 0 0

13、g mL。2 2 3 供试品溶液的制备：取丹参 S F E提取后的 残渣水煎液、S F E提取物水煎液或丹参药材的水煎 液，浓缩，甲醇定容 于 1 0 0 mL量瓶 中。精密吸取 2 0 mL样 品液，再 加 甲醇 2 0 mL，摇匀，超声 1 O m i n，冷却，用 0 4 5 m过滤膜滤过，取滤液，即得。3 提取工 艺的考察 3 1 脂溶性成分的提取：精密称取样品粉末(过 6 0 目筛)3 0 0 g，放入萃取罐 中，按表 1 设计因素水平，选 L。(3 )正交设计表对丹参 中脂溶性成分(以丹参 酮 I 为测定指标)进行超临界萃取，收集萃取液，滤过，浓缩，浓缩后所得物再经真空干燥，即得萃

14、取 物，测定结果见表 2。经统计学分析，结果表明：对丹参酮 I 影响为 表 1 因素水平表 Ta b l e 1 Fa c t o r s a n d l e v e l s 表 2 L，(3 )正交试 验 结果 Ta b l e 2 Re s u l t s o f L9(3 )o r t ho g o n a l t e s t 试验号 A B C D 丹参酮 I A (g 1 0 0 g )BCAD。提取丹参 酮 1I 的最 佳条 件是：A。B C D。，即：夹带剂为 1 0 0 g药材用 3 5 mL的乙 醇，于 5 5温度、3 0 MP a压力下萃取 2 5 h。3 2 水溶性成分的

15、提取：称取经上述超临界萃取后 的丹参残渣粉末 5 g，按表 3，选用 L。(3 )正交试验 表对丹参素 S F E残渣 中的水溶性成分(以丹参素、原儿茶醛为测定指标)进行水煎煮提取。提取液按上 述丹参素、原儿茶醛的测定方法进行测定，测定结果 见表 4。表 3因素水 平 表 Ta b l e 3 F a c t o r s a n d l e v e l s 由统计学分析结果表明，对丹参素、原儿茶醛的 影响均为因素 A C B。提取丹参素和原儿茶醛的 最佳条件是 A。B C。，即：以丹参残渣 8倍量的水煎 煮 3次，每次 1 5 h。3 3 最佳工艺的验证试验：本实验通过对丹参中有 效成分提取方

16、法的摸索，发现 S F E 1 特别适合脂溶 性有效成分，如丹参酮 II 的提取，丹参酮 的得 率高，杂质少；但 S F E不适合水溶性有效成分如丹 参素、原儿茶醛的提取，经检测，丹参经 S F E所得提 加 O “盯 u 3 鸲 u H 4 弘 聃 M 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 K K K R 维普资讯 http:/ 1 3 6 2 中草药C h i n e s e T r a d i t i o n a l a n d He r b a l D r u g s 第 3 5卷第 1 2期 2 0 0 4年 1 2月 取物中未检测出水溶性成分丹参素、原儿茶醛，两者 存在于丹参的

17、S F E残渣 中，结果见表 5。可见丹参 S F E残渣 中的丹参素、原儿茶醛较丹参药材中的浓 度高，其原因有待于进一步研究。表 4 L，(3 )正交试验结果 Ta b l e 4 Re s u l t s o f L9(3 )o h o g o n a l t e s t 表 5 丹参的有效成分的测定(，l 一3)Ta b l e 5 Ef f e c t i v e c o mp o n e n t s i n Smi l t o r r h i z a(，l 一 3)将丹参按上述试验条件进行超临界萃取，将其 S F E残渣再按上述试验条件进行水煎煮提取，之后 所得残渣于 5 0 6 0

18、烘干，称取烘干物适量，照前 述丹参酮 A、丹参素、原儿茶醛的测定方法测定各 有效成分的残留量，结果 S F E残渣水煎后残渣中残 留各 成 分 分 别 为丹 参 酮 0 0 0 3 1 ，丹 参 素 2 9 0 7 ，原儿茶醛 7 9 3 6 。可见经上述提取工艺 后，丹参中大于 9 9 的丹参酮 A、大于 9 7 的丹参 素、9 2 0 6 4 原儿茶醛已被提出。4 讨论 本试验提取丹参中有效成分的最佳工艺是：首 先，利用 S F E技术 提取脂溶性成分如：丹参酮 I 等，其提取条件是：精密称取样品粉末(过 6 0目筛)3 0 0 g，放入 S F E萃取罐中，用 3 5 乙醇，于 5 5温

19、 度、3 0 MP a压力下萃取 2 5 h，收集萃取液，滤过，浓缩，浓缩后所得物再经真空干燥，即得萃取物；再 利用传统的水煎法提取丹参 S F E残渣 中的水溶性 成分如：丹参素、原儿茶醛等，其提取条件是：以残渣 8 倍量的水煎煮 3 次，每次 1 5 h。丹参 S F E残渣中的丹参素、原儿茶醛较丹参药 材中的浓度高，其原因有待于进一步研究。Re f e r e nc e s：1-1 3 K i n g J WF u n d a m e n t a l s a n d a p p l i c a t i o n s o f s u p e r c r i t i c a l f l u i

20、 d e x t r a c t i o n i n c h r o ma t o g r a p h i c s c i e n c e r-J J C h r o m a t o g r S c i，1 9 8 9，2 7(7)：3 5 5 1-2 3 Y u a n H M，Dl e a i k S VS u p e r c r i t i c a l fl u i d a n d e n h a n c e d f l u i d i t y l i q u i d e x t r a c t i o n o f p h e n o l i c s f r o m v i v e r

21、s e d i m e n t r-J J Ch r o ma t o gr，1 9 9 7，76 4：2 65 西红花及注射 用西红花苷的 HP L C指纹图谱研究 郁健，杜春波，周素娣。(1 中国药科大学 分析化学教研室，江苏 南京2 1 0 0 3 8；2 中国药科大学制药有限公司，江苏 南京2 1 0 0 0 9；3 中国药科大学 中药分析教研室，江苏 南京2 1 0 0 3 8)西红花为鸢尾科番红花属植 物番红花 C r o c u s s a t i v u s L 的干燥柱头，西红花苷(c r o c i n)为西红花 药材的提取物，经过加工制成注射用西红 花苷(冻 干)制剂，具

22、有活血化瘀、散郁开结，用于中风病血瘀 证(脑脉痹塞)，临床上用于脑梗死，或局限性脑梗死(包括脑血栓、脑栓塞、脑动脉痉挛等)。西红花的主要成分为类胡萝 卜 色素、苦味质和 挥发油 1。类胡萝 卜 色素为西红花苷元(西红花酸 c r o c r t i n)与多种糖组成各种糖苷，西红花苷分为西 红花苷一 1、2、3、4。目前有文献 2,3 3 报道采用 HP L C和 T L C法对西红花苷一 1、2的测定。作为中药注射剂，S F D A规定必须进行指纹图谱的研究，以便控制中药 注射剂的质量。本实验建立 HP L C法，对西红花药 材、西红花提取物及注射用西红花苷制剂进行指纹图 收稿日期：2 0 0 4 0 3 1 3 作者筒介：郁健(1 9 5 9 一)，男，工程师，江苏启东人，主要从事药 物分析工作，研究领域包括中西药质量分析、药物体 内分析研究等。Te l：(0 2 5)8 5 3 2 2 6 3 5 E ma i l：y u j i a n 5 9 5 9 1 6 3 t o m 维普资讯 http:/