超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究.pdf

超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究.pdf

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1360中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第12期2004年12月柱即可重复使用。

25结果及得率：

银杏叶提取物525g，银杏萜内酯615Vo（白果内酯344，银杏内酯C209，银杏内酯A05，银杏内酯B012），采用乙醇水梯度洗脱，大孔吸附树脂柱连续分离银杏叶提取物中萜内酯组份，真空浓缩后结晶，粗晶用乙醇水溶液重结晶，其4种萜内酯单体纯度和得率见表1。

表1产品纯度和得率TableIPurityandyieldofproducts采用本工艺将总萜内酯质量分数615的525g原料经纯化可得纯度为95的白果内酯1265g，银杏内酯C818g，银杏内酯A163g，银杏内酯B043g，总萜内酯为2289g。

总得率为426，平均提取率为6927。

晶体及原料采用HPLC法测定，与对照品的HPLC图谱相同，没有干扰峰。

3讨论本法只采用一次柱分离结晶纯化即可连续制得纯度达95以上的白果内酯，银杏内酯A、B、C单体。

本工艺操作中只采用无毒试剂水和乙醇，对产品药用提供了安全保障。

由于采用的是可重复使用的大孔树脂，使生产成本降低至约5万元kg。

本工艺简便，采用有机试剂少。

因此适用于中试及工业生产，为大规模开发银杏萜内酯药品奠定了良好基础。

References：

1LiZLExploitationandExertionofGinkgoLeaves（银杏开发与利用）MShangshi：

ShanghaiScientificandTechnicalPublishers，19962ZhangDQ，HeZFResearchintheChemalIngredientsinLeavesofGinkgobiloba（银杏叶资源化学研究）MBeijing：

ChinaLightIndustryPress1999超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究张虹。

，柳正良，王洪泉。

，杨莺。

（1同济大学附属同济医院，上海200065；2第二军医大学药学院，上海200433；3利群医院，上海200333）丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge的干燥根及根茎，味苦，性微寒，祛瘀止痛、活血通经、清心除烦。

丹参主要含有结晶性菲醌类化合物，如丹参酮I（tanshinoneI）、丹参酮A、B（tanshinoneA、B）、隐丹参酮（cryptotanshinone）、二氢丹参酮（dihydrotanshinone）；水溶性有效成分为丹参素（danshensu）及酚酸类成分原儿茶醛（protocatechualdehyde）、咖啡酸（caffeicacid）、迷迭酸甲酯（methylrosmarinate）等，以及棕罗汉松酚（Ierrugino1）等其他成分。

脂溶性有效成分丹参酮经研究表明具有抑制血栓形成等药理作用；水溶性有效成分丹参素能抗心肌缺血并对冠状动脉有较好作用，原儿茶醛能显著增加冠状动脉流量，对抗ADP诱导的血小板积聚，并有广谱抗菌作用。

本实验对脂溶性有效成分以丹参酮为指标，水溶性有效成分以丹参素、原儿茶醛为指标对丹参进行提取研究，并作为制剂的一组质控指标。

1仪器与材料高效液相色谱仪：

日本岛津LC一9A，配有SPD6A紫外可变波长检测器；CR一4A数据处理器；超临界萃取设备：

SFX。

一10型超临界流体萃取器（美国Isco公司）；Branson1200型超声波清洗器。

丹参酮A（批号：

0766200011）、原儿茶醛（批号：

08109402）购自中国药品生物制品检定所；丹参素（纯度大于99）购自复旦大学药学院天然药物化学教研室。

丹参药材购于上海市药材公司，经第二军医大学宓鹤鸣教授鉴定。

本品经自然晾干后，60C干燥12h，粉碎，过三号筛。

甲醇为HPLC或AR纯，蒸馏水为双蒸水（自制）。

2有效成分的测定21脂溶性成分丹参酮的测定211色谱条件：

色谱柱：

DiamonsilTMCl8柱（250mm46mm，5m）（迪马公司）；流动相：

甲醇一水收稿日期：

20040312作者简介：

张虹（1967一），女，浙江海宁人，副主任药师，1990年毕业于上海医科大学药学系，获理学学士学位，2001年毕业于第二军医大学药物分析专业，获医学硕士学位，主要从事药物分析及临床药学研究，发表论文1O余篇。

Tel：

（021）560510803203Email：

zkzhuyahoocomcn维普资讯http:

/中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第12期2004年12月1361（85：

15）；体积流量：

10mLmin；灵敏度：

008AUFS；检测波长：

270am；柱温：

35；进样量：

1OttL。

丹参酮1I保留时间约为125min，其他成分不影响。

212线性关系考察：

精密称取丹参酮1I对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。

用流动相稀释成1248gmL的系列溶液，进样1OL，以峰面积与质量浓度进行线性回归，得标准曲线方程：

y一433657X+0690，r一099998。

丹参酮1I在1248gmL时峰面积与其质量浓度具有良好的线性关系。

213供试品溶液的制备：

精密称取经真空干燥后的萃取物01g，加适量甲醇，超声使溶解，用甲醇配制成适当质量浓度，取少量溶液用微孔滤膜（045m）滤过，弃去初滤液，取续滤液01mL于50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

22水溶性成分丹参素、原儿茶醛的含量测定221色谱条件：

色谱柱：

DiamonsilTMC18（250mm46mm，5m）（迪马公司）；流动相：

甲醇一05醋酸水溶液（25：

75）；体积流量：

10mErain；灵敏度：

008AUFS；检测波长：

280am；柱温：

35；进样量：

1OL。

丹参素和原儿茶醛的保留时间分别约为65、102min。

222线性关系的考察：

精密称取丹参素、原儿茶醛对照品各5mg，分别置50mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用流动相稀释成一定质量浓度的系列溶液，进样1OL，以峰面积与质量浓度进行线性回归，得标准曲线方程及线性范围，丹参素：

Y一86746X一33，r一09999，线性范围：

5O250gmL；原儿茶醛：

Y一623400X+9259，r一09999，线性范围：

25200gmL。

223供试品溶液的制备：

取丹参SFE提取后的残渣水煎液、SFE提取物水煎液或丹参药材的水煎液，浓缩，甲醇定容于100mL量瓶中。

精密吸取20mL样品液，再加甲醇20mL，摇匀，超声1Omin，冷却，用045m过滤膜滤过，取滤液，即得。

3提取工艺的考察31脂溶性成分的提取：

精密称取样品粉末（过60目筛）300g，放入萃取罐中，按表1设计因素水平，选L。

（3）正交设计表对丹参中脂溶性成分（以丹参酮I为测定指标）进行超临界萃取，收集萃取液，滤过，浓缩，浓缩后所得物再经真空干燥，即得萃取物，测定结果见表2。

经统计学分析，结果表明：

对丹参酮I影响为表1因素水平表Table1Factorsandlevels表2L，（3）正交试验结果Table2ResultsofL9（3）orthogonaltest试验号ABCD丹参酮IA（g100g）BCAD。

提取丹参酮1I的最佳条件是：

A。

BCD。

，即：

夹带剂为100g药材用35mL的乙醇，于55温度、30MPa压力下萃取25h。

32水溶性成分的提取：

称取经上述超临界萃取后的丹参残渣粉末5g，按表3，选用L。

（3）正交试验表对丹参素SFE残渣中的水溶性成分（以丹参素、原儿茶醛为测定指标）进行水煎煮提取。

提取液按上述丹参素、原儿茶醛的测定方法进行测定，测定结果见表4。

表3因素水平表Table3Factorsandlevels由统计学分析结果表明，对丹参素、原儿茶醛的影响均为因素ACB。

提取丹参素和原儿茶醛的最佳条件是A。

BC。

，即：

以丹参残渣8倍量的水煎煮3次，每次15h。

33最佳工艺的验证试验：

本实验通过对丹参中有效成分提取方法的摸索，发现SFE1特别适合脂溶性有效成分，如丹参酮II的提取，丹参酮的得率高，杂质少；但SFE不适合水溶性有效成分如丹参素、原儿茶醛的提取，经检测，丹参经SFE所得提加O“盯u3鸲uH4弘聃M2123456789KKKR维普资讯http:

/1362中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第12期2004年12月取物中未检测出水溶性成分丹参素、原儿茶醛，两者存在于丹参的SFE残渣中，结果见表5。

可见丹参SFE残渣中的丹参素、原儿茶醛较丹参药材中的浓度高，其原因有待于进一步研究。

表4L，（3）正交试验结果Table4ResultsofL9（3）ohogonaltest表5丹参的有效成分的测定（，l一3）Table5EffectivecomponentsinSmiltorrhiza（，l一3）将丹参按上述试验条件进行超临界萃取，将其SFE残渣再按上述试验条件进行水煎煮提取，之后所得残渣于5060烘干，称取烘干物适量，照前述丹参酮A、丹参素、原儿茶醛的测定方法测定各有效成分的残留量，结果SFE残渣水煎后残渣中残留各成分分别为丹参酮00031，丹参素2907，原儿茶醛7936。

可见经上述提取工艺后，丹参中大于99的丹参酮A、大于97的丹参素、92064原儿茶醛已被提出。

4讨论本试验提取丹参中有效成分的最佳工艺是：

首先，利用SFE技术提取脂溶性成分如：

丹参酮I等，其提取条件是：

精密称取样品粉末（过60目筛）300g，放入SFE萃取罐中，用35乙醇，于55温度、30MPa压力下萃取25h，收集萃取液，滤过，浓缩，浓缩后所得物再经真空干燥，即得萃取物；再利用传统的水煎法提取丹参SFE残渣中的水溶性成分如：

丹参素、原儿茶醛等，其提取条件是：

以残渣8倍量的水煎煮3次，每次15h。

丹参SFE残渣中的丹参素、原儿茶醛较丹参药材中的浓度高，其原因有待于进一步研究。

References：

1-13KingJWFundamentalsandapplicationsofsupercriticalfluidextractioninchromatographicsciencer-JJChromatogrSci，1989，27（7）：

3551-23YuanHM，DleaikSVSupercriticalfluidandenhancedfluidityliquidextractionofphenolicsfromviversedimentr-JJChromatogr，1997，764：

265西红花及注射用西红花苷的HPLC指纹图谱研究郁健，杜春波，周素娣。

（1中国药科大学分析化学教研室，江苏南京210038；2中国药科大学制药有限公司，江苏南京210009；3中国药科大学中药分析教研室，江苏南京210038）西红花为鸢尾科番红花属植物番红花CrocussativusL的干燥柱头，西红花苷（crocin）为西红花药材的提取物，经过加工制成注射用西红花苷（冻干）制剂，具有活血化瘀、散郁开结，用于中风病血瘀证（脑脉痹塞），临床上用于脑梗死，或局限性脑梗死（包括脑血栓、脑栓塞、脑动脉痉挛等）。

西红花的主要成分为类胡萝卜色素、苦味质和挥发油1。

类胡萝卜色素为西红花苷元（西红花酸crocrtin）与多种糖组成各种糖苷，西红花苷分为西红花苷一1、2、3、4。

目前有文献2,33报道采用HPLC和TLC法对西红花苷一1、2的测定。

作为中药注射剂，SFDA规定必须进行指纹图谱的研究，以便控制中药注射剂的质量。

本实验建立HPLC法，对西红花药材、西红花提取物及注射用西红花苷制剂进行指纹图收稿日期：

20040313作者筒介：

郁健（1959一），男，工程师，江苏启东人，主要从事药物分析工作，研究领域包括中西药质量分析、药物体内分析研究等。

Tel：

（025）85322635Email：

yujian5959163tom维普资讯http:

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