HP1100高效液相色谱仪验证方案Word文档格式.docx

1、 柱温箱： VWD 多波长检测器:8.1.1仪器情况仪器名称仪器型号仪器厂家仪器编号仪器精密度咼效液相色谱仪HP1100水银温度计0-100 C1/万电子天平AEG-120G填表人/日期:8.1.2验证用仪器校正情况和结果校正日期校正结果校正有效日期校验单位8.2验证用试剂的准备试剂名称来 源100%纯水水处理室咖啡因Caffeine 标准品组美国惠普部门： 填表人/日期:8 .3验证步骤8.3 . 1验证的准备工作（1）将限流毛细管（HP物料编号5022-2159 ）安装到装色谱柱位置。（2）开始OQ/PV程序前24小时打开检测器灯管，达到最佳的检测器稳定性的状态。（3）将管道A注入纯水。（

2、4）打开分析管柱温控箱的开关，将两个热交换器的温度设定在 40 C。（5）把温度表探头安装在柱温箱的热交换器上。（6）打开清洗阀，以5ml/min流速将A管道至少清洗10分钟以上。（7）关闭泵与清洗阀。（8）调节流量1.0ml/min的纯水（100%）通过检验器，继续其他安装程序待系统达到 平衡。（9）将OQ/PV咖啡因标准品依照表 1的位置装到手动进样器旁边。8. 3. 2波长准确度测试原理波长的准确度可利用测定一已知其光谱的化合物来加以得知。在特定的波长下，光谱某一特定波段一定会出现，此一波段与特定波长的偏差则可视为检测器的不确度。 本测试所用的标准品为浓度 25ug/ml的咖啡因溶液。咖

3、啡因在272 nm波长时有最大吸收，而在244 nm有最小吸收，这两个波长即用以验证 UV检测器的波长准确度。可变波长检测器（VWD： 先在水流过检测器、流动池时作一空白扫描，然后以自动进样方式将咖啡因注入流动池中。作波长扫描，空白光谱会自动扣除。设备HP1100系列的单元泵，手动进样器，配有温度控制之可变波长检测器。测试条件方法：HP OQ/PV之波长准确性测试.流动相 A：纯水。流量 1.0 ml/min 。.柱温箱温度：40 C。.限流毛细管2M*0.12mm i.d.标准品#3 （25ug/ml ）咖啡因，用注射器按编号注射到手动进样器里。.运行方法，其结果自动记录并显示测试结果。测试

4、评估所测得最大/最小波长与预期的最大 /最小波长之间的偏差会自动计算，测得结果列入OQ/PVB 告中。认可标准及结果名称最大波长1最大波长2最小波长最大偏差标准 2.0nm测定值测得最大偏差结论签名/日期： 复核/日期:8. 3. 3 Holmium Oxide 氧 化钦测 试（检 测 器）检测器波长校正准确度可以借助测量一已知化合物的光谱来加以求取， 在特定波长下，光谱应该显示特定的波段， 此一波段与给定波长间的差值， 即可视为检测器的不准确度， 建 具有最大特性吸收的氧化钦滤光器则可用于决定波长准确度。可变波长检测器（vwd： vw利用下列氧化钦的三个最大波长来测定波长准确度：.360.8

5、nm.418.5 nm .536.4nm氧化钦测试会进行建氧化钦滤光器的扫描 ，求取最大吸收波长与期望波长之差值 ，为了避免吸收溶剂的效应，此一测试是在流动池充满水的情况下进行。HP1100系列的单元泵，手动进样器，配置 Chemstation控制的可变波长 VWD佥测器认可标准波长准确性w 2.0nmHP OQ/PV之氧化钦测试.纯水置于管线A中.100% A，流量 1ml/min.柱温箱之温度：准确度可由最大吸收时的测量波长与理论波长的偏差来检定。 在特定波长围，测出最小及最大光源强度，并自动与合格规值作比较，结果将列验证报告中。要求值（nm）标准差值测定值（nm）测得差值.8w 2.0

6、nm8.5w 2.0nm6.4364153签名/日期:复核/日期:8. 3. 4检测器响应线性测试当光吸收的量超过某一限度时， 吸收检测器即呈现非线性现象。造成非线性现象主要原因是散光，在较高的吸收时，散光变得重要，对检测器的应答影响就愈重要。线性的测试方法是在不同样品瓶中放入不同浓度的咖啡因标准品（依序增加浓度） ，每样品瓶注入多次，每次注入相同体积， 色谱图应该得到面积愈来愈大的波峰， 当这些波峰 的面积（或高度）对浓度作图时，应得到一条通过原点的直线。HP1100系列的单元泵，手动进样器，配有温度控制的可变波长检测器。.方法：HP OQ/PV之检测器线性测试顺序：。进样量：20ul.管线

7、A: HPLC级纯水.流量 1.0ml/min.标准品#1, #2, #3, #4, #5依序放在手动进样器旁边 1、2、3、4、5的位置上。.检测波长：273nm将所得波峰面积（或高度）对浓度作图时，应得到一条通过原点的直线，实际上就是强迫通过原点，线性回归的一条校正曲线，此一校正曲线的相关性（相关系数）即可作为测量检测器的一种判断依据。此直线斜率的倒数即是列印在校正表格中的应答因子。 理论上每个浓度下的应答因子应是相同的。 因此针对这些应答因子所得的相对标准差即可作为测试检测器线性的另一判断依据。相关性标准 0.999位置样品名针数样品浓度/峰面积标准浓度结 论1咖啡因10.5ug/ml2

8、咖啡因21.0ug/ml3咖啡因35ug/ml4咖啡因425ug/ml5咖啡因550ug/ml样品名称：咖啡因以峰面积与浓度可作出图如下:Area检测波长：相关性：公式：Y=mx+bm: b:x:Am ount（n g/ul）Y: Amount（n g/ul）8. 3. 5杂讯、温度稳定性测试（检测器、柱温箱）A . 杂讯测试杂讯，偏移及偏离是检测器的特定性能。 在分析极微量化合物时，检测器的杂讯低与否就显得特别重要，偏移及偏离值对积分的品质影响最大。紫外线/可见光（UV/Vis ）吸收检测器的杂讯是采用 ASTM ASTME19.09方法来测试，ASTM 杂讯测试是根据美国国家标准协会对测定

9、液相色谱仪所用可变波长检测为之标准程序。为尽可能测得实际的杂讯，选用水作测试溶剂（因为大多溶剂组合中都会用到水） ，所选用的波长也是落在常用的波长围。 偏移基本上是温度所造成的， 其主要的影响是在灯管热机时（约1小时），在进行ASTM杂讯测试时，为避免温度（偏移）的效应，必须至少 在24小时前打开灯管。B.度稳定性测试为测试温度稳定性，在杂讯测试时即可使用一部温度感测器将温度不断记录下来。 理论上，在测试过程中，温度讯号应该保持稳定， 最大温度与最小温度的差距即可视为温度讯号的稳定性。HP1100系列单元泵，手动进样器，配置有 Chemstation控制的VWD佥测器。HP OQ/PV.HPL

10、C级纯水置于管线 A中.100% A，流量1ml/min，运行时间：20分钟限流毛细管2M*0.12mm i.d.首先，将讯号以每一分钟为区隔切割成 20等份，每一等份的偏移可由回归线的线性斜率求得。其次，各时间等份平行线的波峰到波峰杂讯（垂直距离）可视为经偏移校正过的波峰到波峰杂讯，所有波峰对波峰杂讯的平均值即为杂讯值。偏移值是指20个时间等份平行线斜率的平均值。偏离值的求取是将 20个时间等份的中点连起来，将杂讯计算方式应用于此线即可求得。所得的基准线杂讯、偏移及偏离值、设定温度的最大偏差值与可接受的标准相比较， 自动与OQ/PV系统建立时所定义的合格规值相比较，测试值会列入 OQ/PVB

11、告中。测试项目接受标准（限制）测试结果杂讯，温度准确性AST M 杂讯mAU0.40偏移mAU0.2漂移mAU/h0.5温度稳定性左 C温度稳定性右 C杂讯测试结果时 间杂讯漂离漂移温度稳定性由（分） 至（分）（6*SD）mAU（Ptop）（ASTM）（mAU）mAU/h左C右C 复核/日期：8. 3. 6 柱温箱温度准确性测试（柱温箱）温度的准确度是借助一已事先校正过的外来温度计来检测， 此留点温度计附在柱温箱热交换器的测量点上，待系统平衡后，便读取温度计的温度， 将此温度与柱温箱设定温度相比较，并检测两者之差距是否在合格围。此测试取 25C, 27C, 40C, 60 C, 65C五个温度

12、点。.100% A，流量 1.0 ml/min评估包括将外部温度计所量的温度与柱温箱的设定温度相减，比较差值是否在合格规值。设定温度标准偏差测得温度差值左C 右C25 C30 C40 C50 C55 C60 C65 C8. 3. 7流量准确度/精确度测试（泵）流量被定义为一定时间被送出的体积量；在 HP1100系列的泵系统中，流量则被定义为活塞推送的速度。确认流速的方法是将检测器的出口端直接注入一已知重量的容量瓶， 通过测量单位时间容量瓶重量的变化而折算出溶液的体积量。方法：按设定的运行时间，检测器波长 254nm.顺序：流量 0.5ml/min、1.0ml/min、2.0ml/min、3.0

13、ml/min.纯水置于管线A中. 流量1.0ml/min.限流毛细管2M*0.12mm i.d. 柱温箱温度：40C。将在不同时间检测器出口收集到的溶剂量 -一体积可用以计算流量准确度，测量的流量与其设定值比较。认可标准 准确性w 5.0% 精确度RSD嗨0.5%流量准确性测试结果-1流量：0.500ml/分钟 压力：29.7bar序号容量瓶重（g）时间（s）瓶重+水重水重（g ）温度（C）密度（g/ml）体积（ml）测得流量（ml/mi n）7910平均流量（ml/min ）:RSD%流量准确性测试结果-21.000ml/分钟 压力：59.8bar平均流量（ml/min）:流量准确性测试结果

14、-32.000ml/分钟 压力：118.5bar流量准确性测试结果-43.00ml/分钟 压力：179.1bar8. 3. 8进样器精确度与交叉污染测试（手动进样器）A进样器精确度进样器精确度的测试是利用注入多次相同体积咖啡因标准品的方法进行。 在相同注入体积下，色谱图应该显示相同面积的波峰， 这些面积和平均面积的偏差应该愈小愈好， 此偏差通常以面积标准差来表示， 标准差与平均面积之比可得相对标准差。 相对标准差即可用以作为精确度的测量，此数值最后再与可接受的标准围比较。B交叉污染测试为测试样品交叉污染的情况， 首先注入一高浓度的样品， 将充满于另一样品瓶中的溶剂注入（溶剂与前次高浓度溶液相同

15、）。在理想的情形下，第二次注射分析结果不应有样品出现，而第二次注射所出现的样品面积即可作为交叉污染的测定值指标。HP OQ/PV之进样器精确度与交叉污染测试顺序位置浓度进样量图谱编号空白0.00OQPVMNUPRC 01OQPVMNUPRC 04OQPVMNUPRC 1C 检测波长273nm.管线A：纯水.标准品#4（25ug/ml咖啡因），放在手动进样器旁边位置 4。.HPLC级纯水（空白瓶），放在手动进样器旁边位置 6。每一个咖啡因波峰的面积、高度及停滞时间得到后，计算每一个波峰对平均值的相对标准 差（ RSD%。进样器精确度与交叉污染认可标准进样器精确度与交叉污染精确度 面积 （RSD

16、%1.000精确度 高度 （RSD %2.0交叉污染面积（RSD %交叉污染高度（RSD %0.4进样器交叉污染测试结果名 称前次运行当次运行交叉污染（%峰面积峰高进样器精确度测试结果运行序号保留时间（min）峰高（mAU峰面积（mAU *S）平均：S. DRSD95% CI九、验证结果及结论9. 1 .验证标准及结果1. VWDfe长准确性最大波长1准确度nm最大波长2准确度nm最小波长准确度nm2.氧化钦波长波长准确性nm3.温度准确性左侧温度准确性边 c右侧温度准确性 c4.检测器线性相关性0.999005.杂讯，温度准确性0.040温度稳定性左 c温度稳定性右 c6.流量准确性/精确性准确性（%5.0精确性（%0.507.进样器精确度与交叉污染附录：分析所用方程式回归分析通常回归分析的方程式表示如下， 线性杂讯测试及测试线性时均使用回归分析进行评估,则由线性方程式得来：线性方程式：Y （X）=a+b*X其中N=观察值数目Xi= 自变数，第i个观察值其中= 因变数，方程式1系数计算bN（XiYi其中 a1 1N 1（Xi2i 1N i 1Xi回归系数（N*XiY其中r*XXi* Yi n i 1 XiYN NXi Y）2i 1 i 1方程式2相对标准差（RSD的计算标准差：SDYi a bXi