Waters高效液相色谱仪仪器校验报告解读.docx

1、Waters高效液相色谱仪仪器校验报告解读 Waters自动进样系列高效液相色谱仪仪器校验报告 型号： 编号： 校验报告编号： 校验记录保管人： 归档时间：目 录1校验报告的起草说明. 21.1起草说明及目的. 21.2认可范围. 21.3运行项目及认可标准. 22校验报告的起草与批准. 32.1校验报告的归属. . 32.2江苏恒瑞医药股份有限公司研究所分析高效液相色谱仪信息一览表. 32.3待校验色谱仪各部件序列号. 43运行确认- 43.1目的- 43.2认可范围- 43.3运行前准备- 43.3.1环境条件- 43.3.2标准样准备- - 43.4运行测试项目及认可质量标准- 43.5

2、试验方法及结果：- 53.5.1泵流量设定值误差及流量稳定性检查- 53.5.2柱温箱的检定- 63.5.3进样精密度检测- 73.5.4最小检测浓度- 83.5.5检测器噪声稳定性检查- 83.5.6检测器样品浓度响应线性检测- 93.5.7进样体积线性检测- 103.5.8 检测器波长准确度- 103.5.8.1重铬酸钾溶液检定- 103.5.8.2咖啡因测试- 103.5.9 A/B通道梯度测试- 113.5.10C/D通道梯度测试- - 123.6运行确认结论- 14Waters高效液相色谱仪仪器校验报告1校验报告的起草说明1.1 起草说明及目的根据国家高效液相色谱仪检定规程、根据仪器

3、的不同配置要求，为了确保仪器使用正常，确保产品检测的准确性，对仪器的不同配置进行相应部件的确认1.2 认可范围 按该设备的SOP，每步操作均运行正常，并符合设计要求。1.3 运行试验项目及认可标准序号检查项目认可质量标准1泵流量设定值误差及流量稳定性检查流量设定值误差SS在FS=0.500 mL/min时应不超过5.0%，在FS=1.000 mL/min和1.500 mL/min时SS应不超过3.0%；流量稳定性误差SR在FS=0.500 mL/min时应不超过3.0%，在FS=1.000 mL/min和1.500 mL/min时SS应不超过2.0%2柱温箱准确度准确度应2.03进样精密度峰面

4、积的RSD2.0%4最小检测浓度（萘/甲醇）最小检测浓度110-7g/mL5噪音稳定性 噪音应0.500mAU，漂移5.000mAU/h6检测器样品浓度响应线性相关系数应0.9997检测器进样体积响应线性相关系数应0.9998检测器波长准确度重铬酸钾溶液检定波长误差不得大于2nm咖啡因测试波长误差不得大于2nm9A/B通道梯度测试最大梯度误差不得大于5%10C/D通道梯度测试最大梯度误差不得大于5%2校验报告的起草与批准2.1 校验报告的归属相关人员负责人签名日 期起草人审核人批准人2.2研究所分析高效液相色谱仪信息表仪器编号仪器使用人仪器校验人复核人部门分管领导：部门主管领导：2.3 待校验

5、色谱仪各部件序列号：待校验仪器编号：部件名称序列号四元泵检测器柱温箱2运行确认2.1 目的：根据仪器的不同配置进行相应部件的确认，确保仪器使用正常，确保产品检测的准确性。 2.2认可范围 按该设备的SOP，每步操作均运行正常，并符合设计要求。2.3运行前准备 2.3.1 环境条件：电源电压为 （应为220V）；室温为 （1535）；工作台不受阳光直射，相对湿度为 （45%80%）（假如室温大于30，相对湿度不得大于70%）；不得放在有剧烈振动或连续震动的地方；远离强磁或强电磁环境；不要放在有腐蚀性气体或在UV波长范围内有吸收的有机和无机气体环境内；不要放在脏乱有灰尘的地方。2.3.2标准样准备

6、：准备标准样1，2，3，4，5（分别为0.5 ，1.0，5.0，25.0和50 .0g/mL）的咖啡因标准溶液，批号： 来源： 。110-4g/mL的萘/甲醇标准溶液批号： 来源： 。 2.3.3待校验色谱仪各部件的出厂编号：泵检测器（VWD）柱温箱出厂编号2.4运行试验项目及认可质量标准序号检查项目认可质量标准1泵流量设定值误差及流量稳定性检查流量设定值误差SS在FS=0.500 mL/min时应不超过5.0%，在FS=1.000 mL/min和1.500 mL/min时SS应不超过3.0%；流量稳定性误差SR在FS=0.500 mL/min时应不超过3.0%，在FS=1.000 mL/mi

7、n和1.500 mL/min时SS应不超过2.0%2柱温箱准确度准确度应2.03进样精密度峰面积的RSD2.0%4最小检测浓度（萘/甲醇）最小检测浓度110-7g/mL5噪音稳定性 噪音应0.500mAU，漂移5.000mAU/h6检测器样品浓度响应线性相关系数应0.9997检测器进样体积响应线性相关系数应0.9998检测器波长准确度重铬酸钾溶液检定波长误差不得大于2nm咖啡因测试波长误差不得大于2nm9A/B通道梯度测试最大梯度误差不得大于5%10C/D通道梯度测试最大梯度误差不得大于5%2.5 试验方法及结果2.5.1泵流量设定值误差及流量稳定性检查按下表进行相应的检查，流动相为色谱级水（

8、批号： ）(4时密度=1.0g/mL)，在一定时间内称量流出流动相的重量而计算出流量。合格标准：流量设定值误差SS在FS=0.500 mL/min时应不超过5.0%，在FS=1.000 mL/min和1.500 mL/min时SS应不超过3.0%；流量稳定性误差SR在FS=0.500 mL/min时应不超过3.0%，在FS=1.000 mL/min和1.500 mL/min时SS应不超过2.0%液相色谱仪泵检定记录使用单位日期仪器型号室温仪器编号检定员制造厂复核员泵流量设定值误差及流量稳定性误差：耐压（Mpa/PSI）流动相： 密度= g/mLFS (mL/min)FS1=0.500 FS2=

9、1.000 FS3=1.500 T(min)101010555555W1(g)W2(g)W(g)W/(mL)FM(mL/min)平均值Fm流量设定误差SS流量稳定误差SR注：Ss=（Fm-FS）/FS100%， SR= (FMmax-FMmin) /Fm100%，FM =( W2- W1)/ / T，W1为容器质量，W2为容器与内容物总质量结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.5.2柱温箱的检定将探头放置在柱温箱里面，按下表根据柱温箱的温度范围，设定不同的温度用经过校正的数字温度探测计进行检定，分别在20.0、25.0、30.0、35.0、40.0、50.0测定三次，取平均值，温度准确

10、度由平均值与设定值绝对偏差得到。合格标准：要求准确度不大于2.0。液相色谱仪柱温箱检定记录使用单位日期测量设备名称/型号室温仪器编号检定员校验有效期复核员柱温准确度：见下表 测量值 设定值柱温箱测定值平均值准确度20 2530354050结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.5.3进样精密度2.5.3.1所需的色谱条件如下表，从Empower工作站界面设定噪音测定项目。方 法cfx流 速1.000mL/min停止时间1.00 minute溶液A色谱级甲醇波 长254nm温 度30.0序 列cfx第一行连续进样六针2.5.3.2以110-4g/mL的萘/甲醇标准溶液为样品,在波长为254

11、nm，色谱级甲醇为流动相,流速为1.000mL/min情况下采集1min的样品，进样量20.0l，连续进样六针。2.5.3.3计算样品峰面积的相对标准偏差RSD不大2.0%。进样次数123456RSD峰面积结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.5.4 最小检测浓度（萘/甲醇）2.5.4.1 进样精密度测试通过后,选用其中一张色谱图计算最小检测浓度CL CL=c*2 Nd/H CL-最小检测浓度， g/mL Nd -基线噪音高度，mAU c-标准溶液浓度， g/mL H-标准溶液的色谱峰高，mAU2.5.4.2计算的最小检测浓度CL应110-7g/mL色谱图名称c （g/mL）H （mA

12、U）噪音色谱图名称Nd（mAU）CL（g/mL）2.5.5检测器噪音稳定性检查2.5.5.1所需的色谱条件如下表，从Empoer工作站运行窗口界面设定噪音测定项目。流 速1.000mL/min停止时间60.00 minute溶液A色谱级甲醇波 长254nm温 度30.0序 列wdx第一行一针空针2.5.5.2在波长为254nm，色谱级甲醇的流速为1.000mL/min情况下采集60min的基线。噪音和漂移由手工测量后进行计算。2.5.5.3将噪音，漂移与限度作比较。噪音应0.500mAU,漂移5.000mAU/h噪音漂移结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.5.6检测器样品浓度响应线性

13、检测2.5.6.1这个测试使用咖啡因溶液来进行waters系列HPLC仪器的响应值线性。从Empower工作界面设定检测器响应线性测定项目。色谱条件为：流 速1.000 mL/minute停止时间1.00 minute溶液A色谱级水 波 长273nm进样量20.0l温度40.0 Line 10.5g/mL标准样1 一针Line 21.0g/mL标准样2 一针Line 35.0g/mL标准样3 一针Line 425.0g/mL标准样4 一针Line 550.0g/mL标准样5 一针2.5.6.2其中标准样1，2，3，4，5分别为0.5，1.0，5.0，25.0和50 .0g/mL的咖啡因标准溶液

14、。根据5个浓度逐渐增加的咖啡因标准品在以色谱级水为流动相，1.000mL/min的条件下，进样20.0l，测量峰面积。2.5.6.3由峰面积的相关性计算响应值的线性，相关系数应0.999。0.5g/mL1.0g/mL5.0g/mL25.0g/mL50 .0g/mL峰面积线性方程相关系数结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.5.7进样体积线性检测2.5.7.1选用标准样4即25.0 g/mL咖啡因作为样品，以色谱级水为流动相， 1.000mL/min的条件下，波长为273nm，测量峰面积。分别进样5.0ul，10.0ul，20.0ul，30.0ul，50.0ul，100.0ul各5针，取

15、峰面积平均值。2.5.7.2由峰面积与进样体积的相关性计算线性，相关系数应0.999。2.5.7.3数据记录在下表： 进样体积 进样次数5.0ul10.0ul20.0ul30.0ul50.0ul100.0ul12345峰面积平均值线性方程 相关系数R值结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.5.8 检测器波长准确度 取咖啡因标准样4（25g/mL），（批号：，来源：），注入流通池后进行190-400nm的全波长扫描，得到扫描图谱。规定的咖啡因标准品的第一个最大吸收为205.0nm，最小吸收为245.0nm，第二个最大吸收为273.0nm。波长标准值205.0nm245.0nm273.0

16、nm实际读数绝对偏差结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.5.9 A/B通道梯度测试 此过程使用丙酮来测定Waters系列HPLC仪器A/B通道梯度组成的准确度，从Empower工作站界面设定梯度测定项目。配制0.5%的丙酮溶液：精密吸取5.0mL丙酮（批号： 来源： ）以色谱级水（批号： ）稀释至1000mL即得。2.5.9.1色谱条件为： 梯度表:流速1.500mL/minute停止时间35.00 minutes 通道A色谱级水通道B0.5%丙酮溶液（纯化水稀释 ）波长265nm柱温40.0时间表时间通道B0.000.05.000.05.0120.010.0120.010.0240

17、.015.0240.015.0360.020.0360.020.0480.025.0480.025.0510030.0510030.0602.5.9.2步骤：测试梯度组成之前，需将B通道进行10.0分钟的旁通冲洗。A溶剂为色谱水，B溶剂为含0.5%丙酮的水溶液，B溶剂由5个阶梯从0%变到100%。将泵和检测器直接连接（不接色谱柱 ，以二通管代替），开机后以A溶剂平衡系统，基线平稳后开始执行梯度程序，记录梯度变化图谱，重复测量2次，得到B溶剂不同比例时对应的输出信号值的高度差，计算平均值。按下式计算各段梯度误差Gci，取最大者作为仪器梯度误差（应5%）：Gci =(Li-Lm)/Lm100%式中

18、: Gci -第i段梯度误差 Li -第i段输出信号高度差的平均值 Lm-各段输出信号高度差平均值的总平均值2.5.9.3梯度的准确度B溶液变化范围%20406080100记录仪读数L1L2平均LiLmGci(%)=(Li-Lm)/Lm*100%Gci(max)(%)(5%)结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.5.10 C/D通道梯度测试 此过程使用丙酮来测定Waters系列HPLC仪器C/D通道梯度组成的准确度，从Empower工作站界面设定梯度测定项目。配制0.5%的丙酮溶液：精密吸取5.0mL丙酮（批号： 来源： ）以色谱级水（批号： ）稀释至1000mL即得。2.5.10.1

19、色谱条件为： 梯度表:方法cdtd流速1.500mL/minute停止时间35.00 minutes 通道C色谱级水通道D0.5%丙酮溶液（纯化水稀释）波长265nm柱温40.0时间表时间通道D0.000.05.000.05.0120.010.0120.010.0240.015.0240.015.0360.020.0360.020.0480.025.0480.025.0510030.0510030.0602.5.10.2步骤：测试梯度组成之前，需将D通道进行10.0分钟的旁通冲洗。操作及计算过程同A/B通道梯度测试。2.5.10.3梯度的准确度（D为0.5%丙酮的水溶液）D溶液变化范围%20406080100记录仪读数L1L2平均LiLmGci(%)=(Li-Lm)/Lm*100%Gci(max)(%)(5%)结论：操作人: 日期: 复核人： 日期: 2.6运行确认结论：确认人： 审核人： 日 期： 日 期：