Waters高效液相色谱仪仪器校验报告解读.docx
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Waters高效液相色谱仪仪器校验报告解读
Waters自动进样系列高效液相色谱仪
仪器校验报告
型号：
编号：
校验报告编号：
校验记录保管人：
＿＿＿＿＿＿＿归档时间：
＿＿＿＿＿＿＿
目录
1校验报告的起草说明……………………………………….…………………...2
1.1起草说明及目的………………………………….……….……………………2
1.2认可范围……………………………………….……………………………….2
1.3运行项目及认可标准………………………….………………………………2
2校验报告的起草与批准…………………………….……………………………3
2.1校验报告的归属………………………………………………………………..3
2.2江苏恒瑞医药股份有限公司研究所分析高效液相色谱仪信息一览表……..3
2.3待校验色谱仪各部件序列号………………………………………………..…4
3．运行确认-------------------------------------------------------------------------------------------4
3.1目的----------------------------------------------------------------------------------------------------4
3.2认可范围----------------------------------------------------------------------------------------------4
3.3运行前准备-------------------------------------------------------------------------------------------4
3.3.1环境条件-----------------------------------------------------------------------------------------4
3.3.2标准样准备--------------------------------------------------------------------------------------4
3.4运行测试项目及认可质量标准-------------------------------------------------------------------4
3.5试验方法及结果：
-----------------------------------------------------------------------------------5
3.5.1泵流量设定值误差及流量稳定性检查-----------------------------------------------------5
3.5.2柱温箱的检定-----------------------------------------------------------------------------------6
3.5.3进样精密度检测--------------------------------------------------------------------------------7
3.5.4最小检测浓度-----------------------------------------------------------------------------------8
3.5.5检测器噪声稳定性检查-----------------------------------------------------------------------8
3.5.6检测器样品浓度响应线性检测-------------------------------------------------------------9
3.5.7进样体积线性检测---------------------------------------------------------------------------10
3.5.8检测器波长准确度--------------------------------------------------------------------------10
3.5.8.1重铬酸钾溶液检定----------------------------------------------------------------------10
3.5.8.2咖啡因测试-------------------------------------------------------------------------------10
3.5.9A/B通道梯度测试----------------------------------------------------------------------------11
3.5.10C/D通道梯度测试--------------------------------------------------------------------------12
3.6运行确认结论---------------------------------------------------------------------------------------14
Waters高效液相色谱仪仪器校验报告
1校验报告的起草说明
1.1起草说明及目的
根据国家《高效液相色谱仪检定规程》、根据仪器的不同配置要求，为了确保仪器使用正常，确保产品检测的准确性，对仪器的不同配置进行相应部件的确认
1.2认可范围
按该设备的SOP，每步操作均运行正常，并符合设计要求。
1.3运行试验项目及认可标准
序号
检查项目
认可质量标准
1
泵流量设定值误差及流量稳定性检查
流量设定值误差SS在FS=0.500mL/min时应不超过5.0%，在FS=1.000mL/min和1.500mL/min时SS应不超过3.0%；流量稳定性误差SR在FS=0.500mL/min时应不超过3.0%，在FS=1.000mL/min和1.500mL/min时SS应不超过2.0%
2
柱温箱准确度
准确度应≤2.0℃
3
进样精密度
峰面积的RSD≤2.0%
4
最小检测浓度（萘/甲醇）
最小检测浓度≤1×10-7g/mL
5
噪音稳定性
噪音应≤0.500mAU，漂移≤5.000mAU/h
6
检测器样品浓度响应线性
相关系数应>0.999
7
检测器进样体积响应线性
相关系数应>0.999
8
检测器波长准确度
重铬酸钾溶液检定
波长误差不得大于2nm
咖啡因测试
波长误差不得大于2nm
9
A/B通道梯度测试
最大梯度误差不得大于5%
10
C/D通道梯度测试
最大梯度误差不得大于5%
2校验报告的起草与批准
2.1校验报告的归属
相关人员
负责人签名
日期
起草人
审核人
批准人
2.2研究所分析高效液相色谱仪信息表
仪器编号
仪器使用人
仪器校验人
复核人
部门分管领导：
部门主管领导：
2.3待校验色谱仪各部件序列号：
待校验仪器编号：
部件名称
序列号
四元泵
检测器
柱温箱
2．运行确认
2.1目的：
根据仪器的不同配置进行相应部件的确认，确保仪器使用正常，确保产品检测的准确性。
2.2认可范围按该设备的SOP，每步操作均运行正常，并符合设计要求。
2.3运行前准备
2.3.1环境条件：
电源电压为（应为220V）；室温为（15～35℃）；工作台不受阳光直射，相对湿度为（45%~80%）（假如室温大于30℃，相对湿度不得大于70%）；不得放在有剧烈振动或连续震动的地方；远离强磁或强电磁环境；不要放在有腐蚀性气体或在UV波长范围内有吸收的有机和无机气体环境内；不要放在脏乱有灰尘的地方。
2.3.2标准样准备：
准备标准样1，2，3，4，5（分别为0.5，1.0，5.0，25.0和50.0μg/mL）的咖啡因标准溶液，批号：
来源：
。
1×10-4g/mL的萘/甲醇标准溶液批号：
来源：
。
2.3.3待校验色谱仪各部件的出厂编号：
泵
检测器（VWD）
柱温箱
出厂编号
2.4运行试验项目及认可质量标准
序号
检查项目
认可质量标准
1
泵流量设定值误差及流量稳定性检查
流量设定值误差SS在FS=0.500mL/min时应不超过5.0%，在FS=1.000mL/min和1.500mL/min时SS应不超过3.0%；流量稳定性误差SR在FS=0.500mL/min时应不超过3.0%，在FS=1.000mL/min和1.500mL/min时SS应不超过2.0%
2
柱温箱准确度
准确度应≤2.0℃
3
进样精密度
峰面积的RSD≤2.0%
4
最小检测浓度（萘/甲醇）
最小检测浓度≤1×10-7g/mL
5
噪音稳定性
噪音应≤0.500mAU，漂移≤5.000mAU/h
6
检测器样品浓度响应线性
相关系数应>0.999
7
检测器进样体积响应线性
相关系数应>0.999
8
检测器波长准确度
重铬酸钾溶液检定
波长误差不得大于2nm
咖啡因测试
波长误差不得大于2nm
9
A/B通道梯度测试
最大梯度误差不得大于5%
10
C/D通道梯度测试
最大梯度误差不得大于5%
2.5试验方法及结果
2.5.1泵流量设定值误差及流量稳定性检查
按下表进行相应的检查，流动相为色谱级水（批号：
）（4℃时密度ρ=1.0g/mL），在一定时间内称量流出流动相的重量而计算出流量。
合格标准：
流量设定值误差SS在FS=0.500mL/min时应不超过5.0%，在FS=1.000mL/min和1.500mL/min时SS应不超过3.0%；流量稳定性误差SR在FS=0.500mL/min时应不超过3.0%，在FS=1.000mL/min和1.500mL/min时SS应不超过2.0%
液相色谱仪—泵检定记录
使用单位
日期
仪器型号
室温
仪器编号
检定员
制造厂
复核员
泵流量设定值误差及流量稳定性误差：
耐压（Mpa/PSI）
流动相：
密度ρ=g/mL
FS（mL/min）
FS1=0.500
FS2=1.000
FS3=1.500
T（min）
10
10
10
5
5
5
5
5
5
W1（g）
W2（g）
ΔW（g）
ΔW/ρ（mL）
FM（mL/min）
平均值Fm
流量设定误差SS
流量稳定误差SR
注：
Ss=[（Fm-FS）/FS]×100%，SR=[（FMmax-FMmin）/Fm]×100%，FM=（W2-W1）/ρ/T，W1为容器质量，W2为容器与内容物总质量
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.5.2柱温箱的检定
将探头放置在柱温箱里面，按下表根据柱温箱的温度范围，设定不同的温度用经过校正的数字温度探测计进行检定，分别在20.0℃、25.0℃、30.0℃、35.0℃、40.0℃、50.0℃测定三次，取平均值，温度准确度由平均值与设定值绝对偏差得到。
合格标准：
要求准确度不大于2.0℃。
液相色谱仪—柱温箱检定记录
使用单位
日期
测量设备名称/型号
室温
仪器编号
检定员
校验有效期
复核员
柱温准确度：
见下表
测量值
设定值
柱温箱
测定值
平均值
准确度
20℃
25℃
30℃
35℃
40℃
50℃
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.5.3进样精密度
2.5.3.1所需的色谱条件如下表，从Empower工作站界面设定噪音测定项目。
方法
cfx
流速
1.000mL/min
停止时间
1.00minute
溶液A
色谱级甲醇
波长
254nm
温度
30.0℃
序列
cfx
第一行
连续进样六针
2.5.3.2以1×10-4g/mL的萘/甲醇标准溶液为样品,在波长为254nm，色谱级甲醇为流动相,流速为1.000mL/min情况下采集1min的样品，进样量20.0μl，连续进样六针。
2.5.3.3计算样品峰面积的相对标准偏差RSD不大2.0%。
进样次数
1
2
3
4
5
6
RSD
峰面积
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.5.4最小检测浓度（萘/甲醇）
2.5.4.1进样精密度测试通过后,选用其中一张色谱图计算最小检测浓度CL
CL=c*2Nd/H
•CL------最小检测浓度，g/mL
•Nd------基线噪音高度，mAU
•c-------标准溶液浓度，g/mL
•H------标准溶液的色谱峰高，mAU
2.5.4.2计算的最小检测浓度CL应≤1×10-7g/mL
色谱图名称
c（g/mL）
H（mAU）
噪音色谱图名称
Nd（mAU）
CL（g/mL）
2.5.5检测器噪音稳定性检查
2.5.5.1所需的色谱条件如下表，从Empoer工作站运行窗口界面设定噪音测定项目。
流速
1.000mL/min
停止时间
60.00minute
溶液A
色谱级甲醇
波长
254nm
温度
30.0℃
序列
wdx
第一行
一针空针
2.5.5.2在波长为254nm，色谱级甲醇的流速为1.000mL/min情况下采集60min的基线。
噪音和漂移由手工测量后进行计算。
2.5.5.3将噪音，漂移与限度作比较。
噪音应≤0.500mAU,漂移≤5.000mAU/h
噪音
漂移
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.5.6检测器样品浓度响应线性检测
2.5.6.1这个测试使用咖啡因溶液来进行waters系列HPLC仪器的响应值线性。
从Empower工作界面设定检测器响应线性测定项目。
色谱条件为：
流速
1.000mL/minute
停止时间
1.00minute
溶液A
色谱级水
波长
273nm
进样量
20.0μl
温度
40.0℃
Line1
0.5μg/mL标准样1一针
Line2
1.0μg/mL标准样2一针
Line3
5.0μg/mL标准样3一针
Line4
25.0μg/mL标准样4一针
Line5
50.0μg/mL标准样5一针
2.5.6.2其中标准样1，2，3，4，5分别为0.5，1.0，5.0，25.0和50.0μg/mL的咖啡因标准溶液。
根据5个浓度逐渐增加的咖啡因标准品在以色谱级水为流动相，1.000mL/min的条件下，进样20.0μl，测量峰面积。
2.5.6.3由峰面积的相关性计算响应值的线性，相关系数应>0.999。
0.5μg/mL
1.0μg/mL
5.0μg/mL
25.0μg/mL
50.0μg/mL
峰面积
线性方程
相关系数
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.5.7进样体积线性检测
2.5.7.1选用标准样4即25.0μg/mL咖啡因作为样品，以色谱级水为流动相，1.000mL/min的条件下，波长为273nm，测量峰面积。
分别进样5.0ul，10.0ul，20.0ul，30.0ul，50.0ul，100.0ul各5针，取峰面积平均值。
2.5.7.2由峰面积与进样体积的相关性计算线性，相关系数应>0.999。
2.5.7.3数据记录在下表：
进样体积
进样次数
5.0ul
10.0ul
20.0ul
30.0ul
50.0ul
100.0ul
1
2
3
4
5
峰面积平均值
线性方程
相关系数R值
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.5.8检测器波长准确度
取咖啡因标准样4（25μg/mL），（批号：
，来源：
），注入流通池后进行190-400nm的全波长扫描，得到扫描图谱。
规定的咖啡因标准品的第一个最大吸收为205.0nm，最小吸收为245.0nm，第二个最大吸收为273.0nm。
波长标准值
205.0nm
245.0nm
273.0nm
实际读数
绝对偏差
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.5.9A/B通道梯度测试
此过程使用丙酮来测定Waters系列HPLC仪器A/B通道梯度组成的准确度，从Empower工作站界面设定梯度测定项目。
配制0.5%的丙酮溶液：
精密吸取5.0mL丙酮（批号：
来源：
）以色谱级水（批号：
）稀释至1000mL即得。
2.5.9.1色谱条件为：
梯度表:
流速
1.500mL/minute
停止时间
35.00minutes
通道A
色谱级水
通道B
0.5%丙酮溶液（纯化水稀释）
波长
265nm
柱温
40.0℃
时间表
时间
通道B
0.00
0.0
5.00
0.0
5.01
20.0
10.01
20.0
10.02
40.0
15.02
40.0
15.03
60.0
20.03
60.0
20.04
80.0
25.04
80.0
25.05
100
30.05
100
30.06
0
2.5.9.2步骤：
测试梯度组成之前，需将B通道进行10.0分钟的旁通冲洗。
A溶剂为色谱水，B溶剂为含0.5%丙酮的水溶液，B溶剂由5个阶梯从0%变到100%。
将泵和检测器直接连接（不接色谱柱，以二通管代替），开机后以A溶剂平衡系统，基线平稳后开始执行梯度程序，记录梯度变化图谱，重复测量2次，得到B溶剂不同比例时对应的输出信号值的高度差，计算平均值。
按下式计算各段梯度误差Gci，取最大者作为仪器梯度误差（应≤5%）：
Gci=（Li-Lm）/Lm×100%
式中:
Gci-----第i段梯度误差
Li-----第i段输出信号高度差的平均值
Lm-----各段输出信号高度差平均值的总平均值
2.5.9.3梯度的准确度
B溶液变化范围%
20
40
60
80
100
记录仪读数
L1
L2
平均Li
Lm
Gci（%）=（Li-Lm）/Lm*100%
︱Gci（max）（%）︱（≤5%）
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.5.10C/D通道梯度测试
此过程使用丙酮来测定Waters系列HPLC仪器C/D通道梯度组成的准确度，从Empower工作站界面设定梯度测定项目。
配制0.5%的丙酮溶液：
精密吸取5.0mL丙酮（批号：
来源：
）以色谱级水（批号：
）稀释至1000mL即得。
2.5.10.1色谱条件为：
梯度表:
方法
cdtd
流速
1.500mL/minute
停止时间
35.00minutes
通道C
色谱级水
通道D
0.5%丙酮溶液（纯化水稀释）
波长
265nm
柱温
40.0℃
时间表
时间
通道D
0.00
0.0
5.00
0.0
5.01
20.0
10.01
20.0
10.02
40.0
15.02
40.0
15.03
60.0
20.03
60.0
20.04
80.0
25.04
80.0
25.05
100
30.05
100
30.06
0
2.5.10.2步骤：
测试梯度组成之前，需将D通道进行10.0分钟的旁通冲洗。
操作及计算过程同A/B通道梯度测试。
2.5.10.3梯度的准确度
（D为0.5%丙酮的水溶液）
D溶液变化范围%
20
40
60
80
100
记录仪读数
L1
L2
平均Li
Lm
Gci（%）=（Li-Lm）/Lm*100%
︱Gci（max）（%）︱（≤5%）
结论：
操作人:
日期:
复核人：
日期:
2.6运行确认结论：
确认人：
审核人：
日期：
日期：
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