植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织培养试验.docx

1、植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织培养试验XX农林职业技术学院 毕 业 设 计（论 文）不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响专 业 生物技术及应用学生XX X鑫 班 级 06生物技术及应用学 号 2104026 指导教师 宋刚完成日期 成绩评议学号2104026XXX鑫题目 不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响指导教师建议成绩：评阅教师建议成绩：答辩小组建议成绩：院答辩委员会评阅意见及评定成绩：答辩委员会主任签字（盖章）： 年 月 日毕业设计（论文）任务书XXX鑫学号2104026班级06生物技术及应用题目不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响设计(论

2、文)主要内容以MS为基本培养基，添加不同激素配比的细胞分裂素KT和生长素2,4-D 。根据植物生长调节物质种类和配比不同配制六种培养基对甘蓝下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化，分析实验结果，探讨植物生长调节物质对愈伤组织的诱导和分化的影响重点研究问题不同激素配比的细胞分裂素KT和生长素2,4-D对甘蓝下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化的影响主要技术指标1.无菌操作技术2.外植体选择3.母液配制4.组织培养条件的控制其它要说明的问题1.在接种过程中可能出现污染问题，以及在组织培养过程中出现玻璃化或褐化的问题.2.细胞分裂素和生长素的比例不同对愈伤组织诱导的影响。3. KT和2,4-D对愈伤组织生根的影响

3、。指导老师意见指导教师签字： 年月日指导教师意见对论文的简短评价：1.指出论文存在的问题及错误2.对创造性工作评价3.建议成绩 优 良 中 及格 不及格 指导教师签字年月日评阅教师意见对论文的简短评价：1.指出论文存在的问题及错误2.对创造性工作评价3.建议成绩 优 良 中 及格 不及格评阅教师签字年月日答辩小组评议意见学号2104026XXX鑫题目不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响答辩小组意见： 1、对论文的评价2.建议成绩等级 优 良 中 及格 不及格3.需要说明的问题 答辩小组长签字年月日不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响XX农林职业技术学院 06生物技术

4、及应用X鑫摘要：以MS培养基为基础，添加植物生长调节物质生长素和细胞分裂素，对甘蓝下胚轴进行愈伤组织培养，分析生长素和细胞分裂素在愈伤组织培养过程中，对愈伤组织的诱导和生长的影响，为植物愈伤组织培养提供参考。关键词：生长素；细胞分裂素；愈伤组织；组织培养Different Plant Growth Regulators on Brassica hypocotyl callus inductionBiotechnology 06 (2) classes Zhang XinAbstract：MS-based medium, add the plant growth regulators auxin

5、 and cytokinin, on the cabbage hypocotyl callus tissue culture for analysis of auxin and cytokinin in the process of callus tissue culture of callus Induction and growth of, for callus tissue culture plants for reference.Key words: auxin；cytokinin； callus；tissue culture目录1 引言32 材料与方法32.1外植体的获取32.2植物

6、生长调节物质的选择32.3培养基配制42.4诱导愈伤组织培养42.5实验观察43结果和分析53.1不同激素组合和配比对愈伤组织发生的影响53.2不同激素组合和配比对愈伤组织根分化的影响54小结5参考文献7致谢8不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响XX农林职业技术学院 06生物技术及应用X鑫摘要：以MS培养基为基础，添加植物生长调节物质生长素和细胞分裂素，对甘蓝下胚轴进行愈伤组织培养，分析生长素和细胞分裂素在愈伤组织培养过程中，对愈伤组织的诱导和生长的影响，为植物愈伤组织培养提供参考。关键词：生长素；细胞分裂素；愈伤组织；组织培养Plant Growth Regulators on

7、 Brassica hypocotyl callus inductionBiotechnology 06 (2) classes Zhang XinAbstract：MS-based medium, add the plant growth regulators auxin and cytokinin, on the cabbage hypocotyl callus tissue culture for analysis of auxin and cytokinin in the process of callus tissue culture of callus Induction and

8、growth of, for callus tissue culture plants for reference.Key words: auxin；cytokinin；callus； tissue culture1.引言MS培养基是目前应用最广泛的一种培养基，是一种具有较高的无机盐浓度，能够满足组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织和培养物的生长1。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰

9、子汁等有机附加物。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中硝酸盐含量大，而且还有一定数量的铵盐，因此培养基中含有大量氮、钾，这是它的显著特点。本试验以MS培养基为基础，添加不同种类和配比的植物生长调节物质，探寻它们在植物愈伤组织培养过程中，对外植体愈伤组织发生和根分化的作用和影响，为植物组培快繁技术提供参考。2.材料与方法2.1外植体的获取选取健康饱满的甘蓝种子，在无菌条件下用70%的酒精浸泡约30，取出种子用无菌水冲洗35次，再用0.1%升汞浸泡消毒78min,倒出升汞，用无菌水洗涤45次后，接种到含有15ml培养基（经过高压蒸汽灭菌，不加植物生长物质的MS培养基）的试管中，置于温度2230

10、，光照时间14h/,光强3000lx的条件下培养。约14天后可获得无菌苗2。2.2植物生长调节物质的选择植物生长调节物质主要包括细胞分裂素和生长素，在试验中选取实验室最常用的细胞分裂素KT和生长素2，4-D。KT能促进细胞的分裂和分化，延缓组织的衰老并增强蛋白质合成，经高温高压灭菌后性能仍然稳定； 2，4-D生理活性强，诱导快，稳定性高3，在120仍然稳定，有利于愈伤组织形成，但容易引起培养物突变4，使细胞老化，不利于根的形成。2.3培养基配制以MS为基本培养基，添加不同激素配比的细胞分裂素KT和生长素2,4-D。根据植物生长物质种类和配比不同配制六种培养基（见表1）。在高压灭菌之前将pH用0

11、.1mol/L氢氧化钠调至5.8，每只培养瓶分装15ml，经高压蒸汽灭菌处理后，冷却储藏于没有强光照射的专用柜中备用5。表1不同培养基的差异培养基类型基本培养基激素种类和调控水平蔗糖（g/ L）琼脂（g/ L）KT （mg/L）2,4-D （mg/L）MS 1MS05307MS 2MS100307MS 3MS1.05.0307MS 4MS0.10.5307MS 5MS0.50.1307MS 6MS0.103072.4 诱导愈伤组织培养从2.1步骤的试验中，选取苗龄为714天，生长整齐的无菌苗作为外植体，在超净工作台上切除切除子叶和胚根，保留下胚轴，放在无菌滤纸上6。然后将下胚轴直接剪成0.5c

12、m左右的切断，接种到已配制好的MS 1、MS 2、MS 3、MS 4、MS 5、MS 6中，每瓶接种三到四个切断，每种培养基接种3040瓶。将制备好的材料置于28左右，光强2000lx，每日光照14h的环境中进行愈伤组织诱导培养7。2.5 实验观察定期观察愈伤组织的生长情况，并详细记录接种材料生长、分化及污染情况。在培养7天时统计污染率，培养21天时统计愈伤组织的诱导率和根的分化率，并称量愈伤组织的生长量。出愈率=发生愈伤组织的下胚轴数目/接种下胚轴的总数目100%根分化率=分化根的下胚轴数目/接种下胚轴的总数目100%污染率=污染瓶数/接种瓶数100%愈伤组织生长量（g）=愈伤组织的总生长量

13、/下胚轴的总数目在出愈率、根分化率、愈伤组织生长量的计算中，不计算污染的下胚轴的数目8。3.结果和分析在接种7天、21天后，观察实验材料并统计结果如下：表2 甘蓝下胚轴诱导愈伤组织培养结果统计培养基接种下胚轴数目愈伤组织发生根分化污染发生数生长量（g）出愈率（%）发生数发生率（%）污染数污染率（%）MS 192780.034784.18%0099.4MS 2118950.031380.50%21.69%MS 399930.06993.93%22.02%MS 482670.0016481.7%67.3%68.8MS 598390.0012840.6%00MS 658130.0011522.4%3

14、5.17%表3 甘蓝下胚轴诱导愈伤组织培养生长情况统计培养基愈伤组织发生根分化生长情况生长量质地与颜色发生情况生长量MS 1不好一般黄色或褐色无无MS 2一般一般浅绿色差很少MS 3良好最高乳黄色或绿色差很少MS 4不好少黄色或褐色差很少MS 5不好少黄色无无MS 6差很少淡绿色差很少3.1 不同激素组合和配比对愈伤组织发生的影响由上表（2）和表（3）可见，将甘蓝下胚轴接种到六种不同激素组合的培养基中，培养21天后，观察试验结果，培养基MS 1、MS 2、MS 3 、MS 4、MS 5、MS 6都可以诱导愈伤组织发生。在MS 1、MS 2、MS 6三种只含一种激素，细胞分裂素KT或生长素2,4

15、-D起调控作用的培养基上，愈伤组织生长量和出愈率都是同组水平中最低的。而在细胞分裂素KT 生长素2,4-D共同起调控作用的MS 3、MS 4、MS 5培养基上，愈伤组织生长量和出愈率都是同组水平中最高的。表明在一定浓度X围内（在植物组织培养过程中生长素和细胞分裂素使用浓度通常为0.110 mg/L9）细胞分裂素和生长素配合使用，可以弥补彼此的缺陷，有利于诱导愈伤组织发生和生长，使愈伤组织培养达到最佳的效果。激素水平在1mg/L10 mg/LMS1、MS 2、MS 3培养基，比激素水平在0.1mg/L0.5mg/L MS 4、MS 5、MS 6培养基愈伤组织的生长量和出愈率高。说明激素水平在1m

16、g/L10 mg/L之间更加有利于愈伤组织的发生和生长。在添加1.0 mg/LKT和5mg/L 2,4-D，细胞分裂素和生长素比为15，生长素在组织培养过程起主导作用的MS 3培养基上，和添加0.1 mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D，细胞分裂素和生长素比也为15，生长素在组织培养过程起主导作用的MS 4培养基上，愈伤组织生长量和出愈率都是同水平中最大。说明细胞分裂素和生长素配比为15的培养基，更加有利于培养基有愈伤组织的发生和生长。3.2 不同激素组合和配比对愈伤组织根分化的影响试验结果表明，只有MS 2、MS 3 、MS 4、MS 6四种培养基有愈伤组织根的分化，且分化率很低，MS

17、 1、MS 5两种培养基则没有愈伤组织根的分化。说明这六种培养基中的激素种类或配比不能很好的诱导愈伤组织根的分化。在生产实践中可以采用调整激素种类和配比或进行继代培养的方法来促进愈伤组织根的分化，提高愈伤组织根的分化率。4.小结激素可调控器官发生，但在不同组织中这些激素的内水平不同，因而对于某一具体形态发生过程来说，它们所要求的外源激素的水平也有所不同10。通过本次试验的结果表明：植物生长调节物质在愈伤组织培养中具有重要作用，细胞分裂素和生长素结合在一起使用最适合愈伤组织的生长和根的分化；在MS培养基基础上，加入细胞分裂素和生长素的不同种类和不同配比，对愈伤组织的发生和根的分化有不同程度的影响

18、。MS 3培养基在此试验中采用细胞分裂素KT和生长素2,4-D组合，尤其是浓度在110 mg/L，且细胞分裂素和生长素比为15的培养基上（愈伤组织的形成和分化，不仅与激素的绝对含量有关，而且还取决于细胞分素和生长素比例11），愈伤组织发生和生长都很明显，但对根的分化作用却不明显。因此在以后的植物组培实践中，可以选用其他种类的激素组合和浓度配比，或进行继代培养的方法进行诱导根的分化，提高愈伤组织根的分化和生长，以达到最佳的组培快繁效果。参考文献1赵国凡,王兴理.植物组织培养概论.XX:XX工学院,19882董建新等.除虫菊愈伤组织的诱导和继代.西北农林科技大学学报(自然科学版),2004,32(

19、3):773廖劲松,郭勇.微甘菊愈伤组织的诱导及培养研究.XX农业大学学报.2004，35(4)5215254X忠荣，洪波.培养因素对菊花组织培养的影响.XX农业科学2004(1)19215裘文达, 曹孜义.植物组织培养实用技术.:高等教育,19896杨增海.园艺植物组织培养.:农业,19877李浚明.植物组织培养教程.:农业大学,20008中国科学院XX植物生理研究所,XX市植物生理学会.现代植物生理学实验指南.:科学,19999王清连.植物组织培养.:中国农业，200210李浚明.植物组织培养教程.:中国农业大学,200211叶小曲，沈效东，邵雪.切花菊组织培养及移栽农业科技通讯，1998，（11）：17致谢 感谢含辛茹苦生我养我的父母，感谢培养我的母校，感谢给予我指导的宋刚老师、X远老师、谢春芹老师、黄小忠老师、谢正林老师，感谢辅导员X雪松老师和学校其他老师，感谢朝夕相处，共同学习的同学们。谢谢你们的谆谆教诲，谢谢你们的热心帮助。愿你们身体健康，工作顺利。愿母校的明天更加繁荣、昌盛。