植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织培养试验.docx

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植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织培养试验

XX农林职业技术学院

毕业设计（论文）

不同植物生长调节物质对

甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响

专业生物技术及应用

学生XXX鑫

班级06生物技术及应用

学号2104026

指导教师宋刚

完成日期

成绩评议

学号2104026XXX鑫

题目不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响

指导教师建议成绩：

评阅教师建议成绩：

答辩小组建议成绩：

院答辩委员会评阅意见及评定成绩：

答辩委员会主任签字（盖章）：

年月日

毕业设计（论文）任务书

X鑫

学号

2104026

班级

06生物技术及应用

题目

不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响

设计（论文）主要内容

以MS为基本培养基，添加不同激素配比的细胞分裂素KT和生长素2,4-D。

根据植物生长调节物质种类和配比不同配制六种培养基对甘蓝下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化，分析实验结果，探讨植物生长调节物质对愈伤组织的诱导和分化的影响

重点研究问题

不同激素配比的细胞分裂素KT和生长素2,4-D对甘蓝下胚轴进行愈伤组织的诱导和分化的影响

主要技术指标

1.无菌操作技术

2.外植体选择

3.母液配制

4.组织培养条件的控制

其它要说明的问题

1.在接种过程中可能出现污染问题，以及在组织培养过程中出现玻璃化或褐化的问题.

2.细胞分裂素和生长素的比例不同对愈伤组织诱导的影响。

3.KT和2,4-D对愈伤组织生根的影响。

指导老师意见

指导教师签字：

年月日

指导教师意见

对论文的简短评价：

1.指出论文存在的问题及错误

2.对创造性工作评价

3.建议成绩

优良中及格不及格

指导教师签字

年月日

评阅教师意见

对论文的简短评价：

1.指出论文存在的问题及错误

2.对创造性工作评价

3.建议成绩

优良中及格不及格

评阅教师签字

年月日

答辩小组评议意见

学号2104026XXX鑫

题目不同植物生长调节物质对甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响

答辩小组意见：

1、对论文的评价

2.建议成绩等级

优良中及格不及格

3.需要说明的问题

答辩小组长签字

年月日

不同植物生长调节物质对

甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响

XX农林职业技术学院06生物技术及应用X鑫

摘要：

以MS培养基为基础，添加植物生长调节物质生长素和细胞分裂素，对甘蓝下胚轴进行愈伤组织培养，分析生长素和细胞分裂素在愈伤组织培养过程中，对愈伤组织的诱导和生长的影响，为植物愈伤组织培养提供参考。

关键词：

生长素；细胞分裂素；愈伤组织；组织培养

DifferentPlantGrowthRegulatorsonBrassicahypocotylcallusinduction

Biotechnology06

（2）classesZhangXin

Abstract：

MS-basedmedium,addtheplantgrowthregulatorsauxinandcytokinin,onthecabbagehypocotylcallustissuecultureforanalysisofauxinandcytokininintheprocessofcallustissuecultureofcallusInductionandgrowthof,forcallustissuecultureplantsforreference.

Keywords:

auxin；cytokinin；callus；tissueculture

目　　　　录

1引言·····································································3

2材料与方法·······························································3

2.1外植体的获取·····························································3

2.2植物生长调节物质的选择···················································3

2.3培养基配制·······························································4

2.4诱导愈伤组织培养·························································4

2.5实验观察·································································4

3结果和分析······························································5

3.1不同激素组合和配比对愈伤组织发生的影响···································5

3.2不同激素组合和配比对愈伤组织根分化的影响·································5

4小结····································································5

参考文献····································································7

致谢··················································································8

不同植物生长调节物质对

甘蓝下胚轴愈伤组织诱导的影响

XX农林职业技术学院06生物技术及应用X鑫

摘要：

关键词：

生长素；细胞分裂素；愈伤组织；组织培养

PlantGrowthRegulatorsonBrassicahypocotylcallusinduction

Biotechnology06

（2）classesZhangXin

Abstract：

Keywords:

auxin；cytokinin；callus；tissueculture

1.引言

MS培养基是目前应用最广泛的一种培养基，是一种具有较高的无机盐浓度，能够满足组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织和培养物的生长[1]。

由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。

MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。

因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加物。

和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中硝酸盐含量大，而且还有一定数量的铵盐，因此培养基中含有大量氮、钾，这是它的显著特点。

本试验以MS培养基为基础，添加不同种类和配比的植物生长调节物质，探寻它们在植物愈伤组织培养过程中，对外植体愈伤组织发生和根分化的作用和影响，为植物组培快繁技术提供参考。

2.材料与方法

2.1外植体的获取

选取健康饱满的甘蓝种子，在无菌条件下用70%的酒精浸泡约30ｓ，取出种子用无菌水冲洗3～5次，再用0.1%升汞浸泡消毒7～8min,倒出升汞，用无菌水洗涤4～5次后，接种到含有15ml培养基（经过高压蒸汽灭菌，不加植物生长物质的MS培养基）的试管中，置于温度22～30℃，光照时间14h/ｄ,光强3000lx的条件下培养。

约14天后可获得无菌苗[2]。

2.2植物生长调节物质的选择

植物生长调节物质主要包括细胞分裂素和生长素，在试验中选取实验室最常用的细胞分裂素KT和生长素2，4-D。

KT能促进细胞的分裂和分化，延缓组织的衰老并增强蛋白质合成，经高温高压灭菌后性能仍然稳定；2，4-D生理活性强，诱导快，稳定性高[3]，在120℃仍然稳定，有利于愈伤组织形成，但容易引起培养物突变[4]，使细胞老化，不利于根的形成。

2.3培养基配制

以MS为基本培养基，添加不同激素配比的细胞分裂素KT和生长素2,4-D。

根据植物生长物质种类和配比不同配制六种培养基（见表1）。

在高压灭菌之前将pH用0.1mol/L氢氧化钠调至5.8，每只培养瓶分装15ml，经高压蒸汽灭菌处理后，冷却储藏于没有强光照射的专用柜中备用[5]。

表1不同培养基的差异

培养基类型

基本培养基

激素种类和调控水平

蔗糖（g/L）

琼脂（g/L）

KT（mg/L）

2,4-D（mg/L）

MS1

MS2

MS3

1.0

5.0

MS4

0.1

0.5

MS5

0.5

0.1

MS6

0.1

2.4诱导愈伤组织培养

从2.1步骤的试验中，选取苗龄为7～14天，生长整齐的无菌苗作为外植体，在超净工作台上切除切除子叶和胚根，保留下胚轴，放在无菌滤纸上[6]。

然后将下胚轴直接剪成0.5cm左右的切断，接种到已配制好的MS1、MS2、MS3、MS4、MS5、MS6中，每瓶接种三到四个切断，每种培养基接种30～40瓶。

将制备好的材料置于28℃左右，光强2000lx，每日光照14h的环境中进行愈伤组织诱导培养[7]。

2.5实验观察

定期观察愈伤组织的生长情况，并详细记录接种材料生长、分化及污染情况。

在培养7天时统计污染率，培养21天时统计愈伤组织的诱导率和根的分化率，并称量愈伤组织的生长量。

出愈率=发生愈伤组织的下胚轴数目/接种下胚轴的总数目×100%

根分化率=分化根的下胚轴数目/接种下胚轴的总数目×100%

污染率=污染瓶数/接种瓶数×100%

愈伤组织生长量（g）=愈伤组织的总生长量/下胚轴的总数目

在出愈率、根分化率、愈伤组织生长量的计算中，不计算污染的下胚轴的数目[8]。

3.结果和分析

在接种7天、21天后，观察实验材料并统计结果如下：

表2甘蓝下胚轴诱导愈伤组织培养结果统计

培养基

接种下胚轴数目

愈伤组织发生

根分化

污染

发生数

生长量（g）

出愈率（%）

发生数

发生率（%）

污染数

污染率（%）

MS1

0.0347

84.18%

9.4

MS2

118

0.0313

80.50%

1.69%

MS3

0.069

93.93%

2.02%

MS4

0.00164

81.7%

7.3%

8.8

MS5

0.00128

40.6%

MS6

0.00115

22.4%

5.17%

表3甘蓝下胚轴诱导愈伤组织培养生长情况统计

培养基

愈伤组织发生

根分化

生长情况

生长量

质地与颜色

发生情况

生长量

MS1

不好

一般

黄色或褐色

无

MS2

一般

浅绿色

差

很少

MS3

良好

最高

乳黄色或绿色

差

很少

MS4

不好

少

黄色或褐色

差

很少

MS5

不好

少

黄色

无

MS6

差

很少

淡绿色

差

很少

3.1不同激素组合和配比对愈伤组织发生的影响

由上表

（2）和表（3）可见，将甘蓝下胚轴接种到六种不同激素组合的培养基中，培养21天后，观察试验结果，培养基MS1、MS2、MS3、MS4、MS5、MS6都可以诱导愈伤组织发生。

在MS1、MS2、MS6三种只含一种激素，细胞分裂素KT或生长素2,4-D起调控作用的培养基上，愈伤组织生长量和出愈率都是同组水平中最低的。

而在细胞分裂素KT生长素2,4-D共同起调控作用的MS3、MS4、MS5培养基上，愈伤组织生长量和出愈率都是同组水平中最高的。

表明在一定浓度X围内（在植物组织培养过程中生长素和细胞分裂素使用浓度通常为0.1～10mg/L[9]）细胞分裂素和生长素配合使用，可以弥补彼此的缺陷，有利于诱导愈伤组织发生和生长，使愈伤组织培养达到最佳的效果。

激素水平在1mg/L～10mg/LMS1、MS2、MS3培养基，比激素水平在0.1mg/L～0.5mg/LMS4、MS5、MS6培养基愈伤组织的生长量和出愈率高。

说明激素水平在1mg/L～10mg/L之间更加有利于愈伤组织的发生和生长。

在添加1.0mg/LKT和5mg/L2,4-D，细胞分裂素和生长素比为1﹕5，生长素在组织培养过程起主导作用的MS3培养基上，和添加0.1mg/LKT和0.5mg/L2,4-D，细胞分裂素和生长素比也为1﹕5，生长素在组织培养过程起主导作用的MS4培养基上，愈伤组织生长量和出愈率都是同水平中最大。

说明细胞分裂素和生长素配比为1﹕5的培养基，更加有利于培养基有愈伤组织的发生和生长。

3.2不同激素组合和配比对愈伤组织根分化的影响

试验结果表明，只有MS2、MS3、MS4、MS6四种培养基有愈伤组织根的分化，且分化率很低，MS1、MS5两种培养基则没有愈伤组织根的分化。

说明这六种培养基中的激素种类或配比不能很好的诱导愈伤组织根的分化。

在生产实践中可以采用调整激素种类和配比或进行继代培养的方法来促进愈伤组织根的分化，提高愈伤组织根的分化率。

4.小结

激素可调控器官发生，但在不同组织中这些激素的内水平不同，因而对于某一具体形态发生过程来说，它们所要求的外源激素的水平也有所不同[10]。

通过本次试验的结果表明：

植物生长调节物质在愈伤组织培养中具有重要作用，细胞分裂素和生长素结合在一起使用最适合愈伤组织的生长和根的分化；在MS培养基基础上，加入细胞分裂素和生长素的不同种类和不同配比，对愈伤组织的发生和根的分化有不同程度的影响。

MS3培养基在此试验中采用细胞分裂素KT和生长素2,4-D组合，尤其是浓度在1～10mg/L，且细胞分裂素和生长素比为1﹕5的培养基上（愈伤组织的形成和分化，不仅与激素的绝对含量有关，而且还取决于细胞分素和生长素比例[11]），愈伤组织发生和生长都很明显，但对根的分化作用却不明显。

因此在以后的植物组培实践中，可以选用其他种类的激素组合和浓度配比，或进行继代培养的方法进行诱导根的分化，提高愈伤组织根的分化和生长，以达到最佳的组培快繁效果。

参考文献

[1]赵国凡,王兴理.植物组织培养概论.XX:

XX工学院,1988

[2]董建新等.除虫菊愈伤组织的诱导和继代.西北农林科技大学学报（自然科学版）,2004,32（3）:

[3]廖劲松,郭勇.微甘菊愈伤组织的诱导及培养研究.XX农业大学学报.2004，35（4）521～525

[4]X忠荣，洪波.培养因素对菊花组织培养的影响.XX农业科学2004

（1）19～21

[5]裘文达,曹孜义.植物组织培养实用技术.:

高等教育,1989

[6]杨增海.园艺植物组织培养.:

农业,1987

[7]李浚明.植物组织培养教程.:

农业大学,2000

[8]中国科学院XX植物生理研究所,XX市植物生理学会.现代植物生理学实验指南.:

科学,1999

[9]王清连.植物组织培养.:

中国农业，2002

[10]李浚明.植物组织培养教程.:

中国农业大学,2002

[11]叶小曲，沈效东，邵雪.切花菊组织培养及移栽．农业科技通讯，1998，（11）：

致谢

感谢含辛茹苦生我养我的父母，感谢培养我的母校，感谢给予我指导的宋刚老师、X远老师、谢春芹老师、黄小忠老师、谢正林老师，感谢辅导员X雪松老师和学校其他老师，感谢朝夕相处，共同学习的同学们。

谢谢你们的谆谆教诲，谢谢你们的热心帮助。

愿你们身体健康，工作顺利。

愿母校的明天更加繁荣、昌盛。

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