检验用细胞管理规程Word格式文档下载.docx

1、 年 月 日颁发部门：分发部门：拷贝号:NO。 /文件变更历史变更原因、依据及变更内容/新起草1 目的本规程规范分析研究部检验用细胞验收、制备、检定、储存、使用等过程的控制与管理，进而保证检验用细胞的规范使用与统一管理。2 范围本规程适用于分析研究部检验用细胞按中国药典2015年版对所用检验用细胞由产生到销毁的全过程。3 定义3.1 检验用细胞是指用于生物制品检定的细胞,包括原代细胞、连续传代细胞或二倍体细胞，以及经特定基因修饰过的细胞.3.2 细胞种子（Cell Seed）：由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体,或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品检定。在特定

2、条件下，将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，于液氮或-130 以下冻存，即为细胞种子，供建立主细胞库用. 3.3 主细胞库（Master Cell Bank，MCB）：取细胞种子通过规定的方式进行传代、增殖后,在特定倍增水平或传代水平同次均匀地混合成一批，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或130 以下，经检定合格后，即可作为主细胞库,用于工作细胞库的制备.3.4 工作细胞库（Working Cell Bank，WCB）：工作细胞库的细胞由MCB细胞传代扩增制成。由MCB的细胞经传代增殖,达到一定代次水平的细胞，合并后制成一批匀质

3、细胞悬液,定量分装于一定数量的细胞冻存管，保存于液氮或-130 以下备用,即为工作细胞库.4 环境、健康和安全4.1 DMSO对人眼睛、呼吸系统和皮肤有刺激性，应注意适当防护，细胞培养过程中应严格按照无菌操作要求操作。5 培训5.1 培训部门：分析研究部.5.2 培训对象:质量研究相关人员。5.3 培训方式和时数:集中授课或自学,8小时。5.4 考核方式：问答。6 职责6.1 质量保证部：负责监督本文件的执行。6.2 分析研究部、基因治疗部：负责严格执行本规程规定。7 程序（内容）7.1 检验用细胞的来源管理（细胞资料）7.1.1 检验用细胞应具有明确合法来源的证明资料。检验用细胞按来源可分为

4、技术转让方提供、购买、赠予三类.7.1.2 购买：质量研究人员细胞相关负责人根据检验需要，确定所需要的检验细胞,填写物资需求计划,注明细胞名称、细胞编号、申购数量、用途、要求购回时间等,提交至公司进行采购,公司应在中科院上海细胞库、ATCC或其他经国家批准的细胞保藏中心进行购买。7.1.3 技术转让或赠予检验细胞，需填写附表细胞交接单.7.2 检验用细胞的验收7.2.1 检验细胞取得后,由细胞库管理员与指定复核人一起按来源证明等资料验收，应详细核对细胞名称、来源及数量等的一致性以及相关资料符合后方可签字验收。接收时应填写细胞验收记录，包括细胞名称、数量、传代代次、细胞管编号、来源等内容。如果为

5、冻存细胞则由细胞库管理员与指定复核人办理入库。7.2.2 检验用细胞管理台账，内容包括细胞名称、细胞来源、细胞库名称、编号、入库日期、出库日期、入库数量、出库数量、结存数量、液氮罐中存放位置及使用人、复核人等项目。见附表检验用细胞管理台账。7.3 检验用细胞库的建立7.3.1 本公司检验用细胞应建立主细胞库（MCB）与工作细胞库（WCB），由细胞培养操作人员按要求进行培养建库，细胞培养记录见附表。在操作过程中应写明培养基、胰酶批号及来源，传代后培养方瓶上应注明信息,如UMR-106 P6 1：4传代 （操作时间）.如同时传多瓶应进行编号，如UMR-106 P6X 1：N传代 （操作时间），X即

6、为瓶号。7.3.2 检验细胞的检定7.3.2.1 检定项目：细胞鉴别试验、无菌检查、支原体检查、细胞功能检查。7.3.2.2 细胞鉴别试验、支原体检测、细胞功能检查等项目依照委托检验相关规定进行委托检验.7.3.2.3 检验记录归入建库资料保存.细胞库交细胞库管理员入库，并填写相应管理记录。7.4 检验用细胞的储存与管理7.4.1 本公司检验用细胞储存于细胞库专用液氮罐中.7.4.2 细胞库实行实验室管理员与细胞主要负责人共同管理，由实验室管理员管理钥匙与细胞领用台账.7.4.3 本公司检验细胞所用的保存容器上的标识应包括：细胞名称、代次、批号、细胞库类别-瓶号，例如UMR106 P6 201

7、40408 WCB1，即为UMR-106细胞第6代，批号为20140408（冻存日期为2014年04月08日）,工作细胞库的第一支。7.4.4 细胞存放位置编号应为：液氮罐编号+提篮编号+冻存盒层数，例如X号-01-01,即为X号罐的第1提篮的第一层（从下往上数）位置。7.4.5 细胞库管理员应每周检查液氮高度，在液氮危险高度2cm处时需要及时添加液氮，填写附表液氮记录。7.4.6 检验细胞的领用：检验细胞由细胞培养操作人员到细胞库管理员处领取，填写检验用细胞库管理台账。7.5 检验细胞的销毁7.5.1 检验剩余细胞,不得随意弃置,应采用高压蒸汽灭菌的方式处理（122，30分钟）或者置于沸水中

8、30min进行销毁。7.5.2 无保存价值、污染或经检验不合格细胞库细胞，应经细胞管理负责人、质量保证部审核，销毁时应在质量保证人员的监督下进行销毁，并应填写好相应的附表八细胞销毁记录。7.6 文件归档7.6.1 细胞培养记录按同一细胞系进行归类，按季度归档至实验管理员处。7.6.2 细胞建库资料如:购买合同（复印件）、发票（复印件）、验收记录、细胞检定报告、细胞交接单等均应归档至实验室管理员处。8 相关文件 9 参考文献中国药典2015年版三部“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程10 流程图 11 附录细胞培养记录（细胞复苏记录）时 间： 年 月 日细胞名称代次/编号冻存时间规格/

9、密度冻存人领用数量（支）设备及编号CO2培养箱ESCO/CCl170B8（BZSY022） THERMO/311（201412178）离心机湘智离心机/TD25-WS（BZSY-046）倒置显微镜Motic倒置显微镜/AE31 （BZSY041）细胞计数仪Bio-rad细胞计数仪/TC20 （2016011301）超净工作台苏净安泰超净工作台/SW-CJ-2FD （ BZSY007 201412145）试剂试液培养基/来源FBS/来源操作过程（*无菌操作）取细胞冻存管，于37水浴中融化后，立即用移液器转移至 ml完全培养基中, rpm离心 min，弃上清,用 ml完全培养基重悬细胞。取重悬的细

10、胞悬液计数，结果 （若未计数，此处填“/）.将重悬的细胞悬液转移至 细胞培养瓶中，放入CO2培养箱中培养.备注：操作人/日期细胞培养记录（细胞传代、接板记录）时 间:传代时间ESCO/CCl170B8（BZSY-022） THERMO/311（201412178）湘智离心机/TD25WS （BZSY-046）Biorad细胞计数仪/TC20 （2016011301）苏净安泰超净工作台/SW-CJ-2FD （ BZSY-007 201412145）0。25胰酶/来源操作过程（无菌操作） 消化：取上述生长状态良好的细胞，吸弃培养液，用 ml0.25胰酶（或PBS缓冲液）洗涤细胞后弃去，加入 ml0

11、。25胰酶消化，消化结束后，加入 ml完全培养基终止反应，轻轻吹下细胞.（悬浮细胞无需此操作） 离心：将细胞液转移至离心管中, rpm离心 min，弃上清,用 ml完全培养基重悬细胞。 接板：取重悬的细胞悬液计数，计数结果: cells/ml，取 ml细胞悬液，加入 ml完全培养基（终浓度 cells/ml）； l/孔接板,接板数量： 。 传代:取重悬的细胞悬液 ml，加入 ml完全培养基，于 培养瓶中培养，传代后信息： 细胞培养记录（细胞冻存记录）操作时间数 量 ESCO/CCl-170B8（BZSY022） THERMO/311（201412178）湘智离心机/TD25-WS （BZSY0

12、46）Motic倒置显微镜/AE31 （BZSY-041）苏净安泰超净工作台/SWCJ2FD （ BZSY-007 201412145）DMSO/来源 冻存液:取上述生长状态良好的细胞,吸弃培养液，用 ml0.25胰酶（或PBS缓冲液）洗涤细胞后弃去，加入 ml0.25%胰酶消化,消化结束后，加入 ml完全培养基终止反应，吹下细胞并收集于离心管中。（悬浮细胞无需此操作）将细胞液转移至离心管中， rpm离心 min，弃上清，用 ml 冻存液重悬细胞。 计数： cells/ml。 稀释：取 ml细胞悬液,加入 ml冻存液，混匀（终浓度 cells/ml）。 分装：将上述含细胞的冻存液分装入冻存管中

13、， ml/支、共 支。于每支冻存管上标记细胞名称、代次、批号、细胞库类别-瓶号等信息，分装完成后,将冻存管放入冻存盒中，于-70下冷冻过夜，将冻存管转移至液氮管中保存，冻存位置： 细胞交接单细胞信息序号代次单位数量资料明细资料名称原件/复印件份数移交单位签字/日期接收单位传代代次编 号来 源验收人/日期复核人/日期 验 收 项 目验收结果1、实物与购买申请单的一致性。实物与交接单的一致性。2、包装完好，标签清晰,封口严密、无渗漏、无启封痕迹.结论： 验收合格 验收不合格细胞验收记录检验用细胞管理台账 类 别 主细胞库 工作细胞库细胞来源用 途细胞编号/批号 细胞密度装 量冻存数量存放位置冻 存 人冻存日期 使用日期使用数量（ ）结存数量使用人复核人备注注：备注应注明细胞具体编号等信息。液氮高度记录液氮罐编号： 液氮危险高度：工作内容液氮高度操作人测量高度监测频率为每周一次，危险高度为液氮完全淹没细胞冻存管处的高度。.2413细胞销毁记录销毁原因销毁方式销毁人/负责人质量保证人员