检验用细胞管理规程Word格式文档下载.docx

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年月日

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1目的

本规程规范分析研究部检验用细胞验收、制备、检定、储存、使用等过程的控制与管理，进而保证检验用细胞的规范使用与统一管理。

2范围

本规程适用于分析研究部检验用细胞按《中国药典》2015年版对所用检验用细胞由产生到销毁的全过程。

3定义

3.1检验用细胞是指用于生物制品检定的细胞,包括原代细胞、连续传代细胞或二倍体细胞，以及经特定基因修饰过的细胞.

3.2细胞种子（CellSeed）：

由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体,或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品检定。

在特定条件下，将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，于液氮或-130℃以下冻存，即为细胞种子，供建立主细胞库用.

3.3主细胞库（MasterCellBank，MCB）：

取细胞种子通过规定的方式进行传代、增殖后,在特定倍增水平或传代水平同次均匀地混合成一批，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或—130℃以下，经检定合格后，即可作为主细胞库,用于工作细胞库的制备.

3.4工作细胞库（WorkingCellBank，WCB）：

工作细胞库的细胞由MCB细胞传代扩增制成。

由MCB的细胞经传代增殖,达到一定代次水平的细胞，合并后制成一批匀质细胞悬液,定量分装于一定数量的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃以下备用,即为工作细胞库.

4环境、健康和安全

4.1DMSO对人眼睛、呼吸系统和皮肤有刺激性，应注意适当防护，细胞培养过程中应严格按照无菌操作要求操作。

5培训

5.1培训部门：

分析研究部.

5.2培训对象:

质量研究相关人员。

5.3培训方式和时数:

集中授课或自学,8小时。

5.4考核方式：

问答。

6职责

6.1质量保证部：

负责监督本文件的执行。

6.2分析研究部、基因治疗部：

负责严格执行本规程规定。

7程序（内容）

7.1检验用细胞的来源管理（细胞资料）

7.1.1检验用细胞应具有明确合法来源的证明资料。

检验用细胞按来源可分为技术转让方提供、购买、赠予三类.

7.1.2购买：

质量研究人员细胞相关负责人根据检验需要，确定所需要的检验细胞,填写物资需求计划,注明细胞名称、细胞编号、申购数量、用途、要求购回时间等,提交至公司进行采购,公司应在中科院上海细胞库、ATCC或其他经国家批准的细胞保藏中心进行购买。

7.1.3技术转让或赠予检验细胞，需填写附表《细胞交接单》.

7.2检验用细胞的验收

7.2.1检验细胞取得后,由细胞库管理员与指定复核人一起按来源证明等资料验收，应详细核对细胞名称、来源及数量等的一致性以及相关资料符合后方可签字验收。

接收时应填写《细胞验收记录》，包括细胞名称、数量、传代代次、细胞管编号、来源等内容。

如果为冻存细胞则由细胞库管理员与指定复核人办理入库。

7.2.2检验用细胞管理台账，内容包括细胞名称、细胞来源、细胞库名称、编号、入库日期、出库日期、入库数量、出库数量、结存数量、液氮罐中存放位置及使用人、复核人等项目。

见附表《检验用细胞管理台账》。

7.3检验用细胞库的建立

7.3.1本公司检验用细胞应建立主细胞库（MCB）与工作细胞库（WCB），由细胞培养操作人员按要求进行培养建库，细胞培养记录见附表。

在操作过程中应写明培养基、胰酶批号及来源，传代后培养方瓶上应注明信息,如UMR-106P61：

4传代（操作时间）.如同时传多瓶应进行编号，如UMR-106P6—X1：

N传代（操作时间），X即为瓶号。

7.3.2检验细胞的检定

7.3.2.1检定项目：

细胞鉴别试验、无菌检查、支原体检查、细胞功能检查。

7.3.2.2细胞鉴别试验、支原体检测、细胞功能检查等项目依照委托检验相关规定进行委托检验.

7.3.2.3检验记录归入建库资料保存.细胞库交细胞库管理员入库，并填写相应管理记录。

7.4检验用细胞的储存与管理

7.4.1本公司检验用细胞储存于细胞库专用液氮罐中.

7.4.2细胞库实行实验室管理员与细胞主要负责人共同管理，由实验室管理员管理钥匙与细胞领用台账.

7.4.3本公司检验细胞所用的保存容器上的标识应包括：

细胞名称、代次、批号、细胞库类别-瓶号，例如UMR—106P620140408WCB—1，即为UMR-106细胞第6代，批号为20140408（冻存日期为2014年04月08日）,工作细胞库的第一支。

7.4.4细胞存放位置编号应为：

液氮罐编号+提篮编号+冻存盒层数，例如X号-01-01,即为X号罐的第1提篮的第一层（从下往上数）位置。

7.4.5细胞库管理员应每周检查液氮高度，在液氮危险高度2cm处时需要及时添加液氮，填写附表《液氮记录》。

7.4.6检验细胞的领用：

检验细胞由细胞培养操作人员到细胞库管理员处领取，填写《检验用细胞库管理台账》。

7.5检验细胞的销毁

7.5.1检验剩余细胞,不得随意弃置,应采用高压蒸汽灭菌的方式处理（122℃，30分钟）或者置于沸水中30min进行销毁。

7.5.2无保存价值、污染或经检验不合格细胞库细胞，应经细胞管理负责人、质量保证部审核，销毁时应在质量保证人员的监督下进行销毁，并应填写好相应的附表八《细胞销毁记录》。

7.6文件归档

7.6.1细胞培养记录按同一细胞系进行归类，按季度归档至实验管理员处。

7.6.2细胞建库资料如:

购买合同（复印件）、发票（复印件）、验收记录、细胞检定报告、细胞交接单等均应归档至实验室管理员处。

8相关文件

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9参考文献

《中国药典》2015年版三部“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程

10流程图

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11附录

细胞培养记录（细胞复苏记录）

时间：

年月日

细胞名称

代次/编号

冻存时间

规格/密度

冻存人

领用数量（支）

设备及编号

CO2培养箱

□ESCO/CCl—170B—8（BZSY—022）□THERMO/311（201412178）

离心机

湘智离心机/TD25-WS（BZSY-046）

倒置显微镜

Motic倒置显微镜/AE31（BZSY—041）

细胞计数仪

Bio-rad细胞计数仪/TC20（2016011301）

超净工作台

苏净安泰超净工作台/SW-CJ-2FD（□BZSY—007□201412145）

试剂试液

培养基/来源

FBS/来源

操作过程（*无菌操作）

取细胞冻存管，于37℃水浴中融化后，立即用移液器转移至ml完全培养基中,rpm离心min，弃上清,用ml完全培养基重悬细胞。

取重悬的细胞悬液计数，结果（若未计数，此处填“/"

）.

将重悬的细胞悬液转移至细胞培养瓶中，放入CO2培养箱中培养.

备注：

操作人/日期

细胞培养记录（细胞传代、接板记录）

时间:

传代时间

□ESCO/CCl—170B—8（BZSY-022）□THERMO/311（201412178）

湘智离心机/TD25—WS（BZSY-046）

Bio—rad细胞计数仪/TC20（2016011301）

苏净安泰超净工作台/SW-CJ-2FD（□BZSY-007□201412145）

0。

25％胰酶/来源

操作过程（＊无菌操作）

□消化：

取上述生长状态良好的细胞，吸弃培养液，用ml0.25％胰酶（或PBS缓冲液）洗涤细胞后弃去，加入ml0。

25％胰酶消化，消化结束后，加入ml完全培养基终止反应，轻轻吹下细胞.（悬浮细胞无需此操作）

□离心：

将细胞液转移至离心管中,rpm离心min，弃上清,用ml完全培养基重悬细胞。

□接板：

取重悬的细胞悬液计数，计数结果:

cells/ml，取ml细胞悬液，加入ml完全培养基（终浓度cells/ml）；

μl/孔接板,接板数量：

。

□传代:

取重悬的细胞悬液ml，加入ml完全培养基，于培养瓶中培养，传代后信息：

细胞培养记录（细胞冻存记录）

操作时间

数量

□ESCO/CCl-170B—8（BZSY—022）□THERMO/311（201412178）

湘智离心机/TD25-WS（BZSY—046）

Motic倒置显微镜/AE31（BZSY-041）

苏净安泰超净工作台/SW—CJ—2FD（□BZSY-007□201412145）

DMSO/来源

□冻存液:

取上述生长状态良好的细胞,吸弃培养液，用ml0.25％胰酶（或PBS缓冲液）洗涤细胞后弃去，加入ml0.25%胰酶消化,消化结束后，加入ml完全培养基终止反应，吹下细胞并收集于离心管中。

（悬浮细胞无需此操作）

将细胞液转移至离心管中，rpm离心min，弃上清，用ml冻存液重悬细胞。

□计数：

cells/ml。

□稀释：

取ml细胞悬液,加入ml冻存液，混匀（终浓度cells/ml）。

□分装：

将上述含细胞的冻存液分装入冻存管中，ml/支、共支。

于每支冻存管上标记细胞名称、代次、批号、细胞库类别-瓶号等信息，分装完成后,将冻存管放入冻存盒中，于-70℃下冷冻过夜，将冻存管转移至液氮管中保存，冻存位置：

细胞交接单

细胞信息

序号

代次

单位

数量

资料明细

资料名称

原件/复印件

份数

移交单位

签字/日期

接收单位

传代代次

编号

来源

验收人/日期

复核人/日期

验收项目

验收结果

1、□实物与购买申请单的一致性。

□实物与交接单的一致性。

2、包装完好，标签清晰,封口严密、无渗漏、无启封痕迹.

结论：

□验收合格

□验收不合格

细胞验收记录

检验用细胞管理台账

类别□主细胞库□工作细胞库

细胞来源

用途

细胞编号/批号

细胞密度

装量

冻存数量

存放位置

冻存人

冻存日期

使用日期

使用数量

（）

结存数量

使用人

复核人

备注

注：

备注应注明细胞具体编号等信息。

液氮高度记录

液氮罐编号：

液氮危险高度：

工作内容

液氮高度

操作人

测量高度

监测频率为每周一次，危险高度为液氮完全淹没细胞冻存管处的高度。

.2413

细胞销毁记录

销毁原因

销毁方式

销毁人/负责人

质量保证人员