1022计数培养基适用性检查标准操作规程Word格式.docx

1、质量部分发范围: 质量部、质控部、档案室目的：规范计数培养基适用性检查的标准操作程序。范围：本标准适用于计数培养基适用性检查的操作程序。责任：质控部微生物检验人员负责执行，质控部负责人监督实施。正文：1 概述：培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，计数培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素。2 培养基适用性检查的范围：2010年版中国药典规定微生物检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。3 试验用菌株大肠埃希菌CMCC（B44102金黄色葡萄球菌CMCC（B26003枯草芽孢杆菌CMCC（B63501白色念珠菌CMCC（F98001黑曲

2、霉CMCC（F980034 试验用培养基4.1 菌液制备用培养基营养肉汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基4.2 适用性检查培养基营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基4.3 4.2中培养基的对照培养基5 试验用稀释剂0.9%无菌氯化钠溶液含0.05%（ml/ml聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液6 试验用仪器设备6.1 恒温培养箱（3035）、霉菌培养箱（2328）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平6.2 锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）6.3 接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘

3、伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。7 操作步骤：7.1 菌液的制备7.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于3035培养1824h，取3035培养1824h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml，用 0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50100cfu的菌悬液，备用。7.1.2 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于2328培养2448h，取于2328培养2448h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50100cfu的菌悬液备用

4、。7.1.3 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于2328培养57天，加入35ml0.05%（ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50100cfu的孢子悬液备用。7.2 菌液的计数（每种菌液制备2个平皿）大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液1ml接种至营养琼脂培养基上，3035培养48h，白色念珠菌和黑曲霉菌1ml接种至改良马丁琼脂培养基上，2328培养72h，计数。7.3 适用性检查7.3.1 培养

5、基的配制：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。7.3.2 营养琼脂培养基的适用性检查取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于3035倒置培养48h，计数；被检培养基同法操作。7.3.3 玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接种菌做空白对

6、照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于2328倒置培养72h，计数；7.3.4 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的适用性检查取3个无菌平皿，分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于2328倒置培养72h，计数；7.4 结果判断若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。8 附件：计数培养基适用性检查记录/报告书（SOP-QC-1022-R-01）9 变更历史版本号变更控制号更改内容附

7、件：计数培养基适用性检查记录/报告书SOP-QC-1022-R-01检验编号： 培养基名称规格批号生产单位配制批号琼脂培养基被检品g/瓶对照品g/袋检验日期年 月 日 检验人报告日期复核人检验依据中国药典2010年版微生物限度检查法一、主要仪器设备恒温培养箱 DHP120 上海试验仪器厂霉菌培养箱 MJ-160BSH-II 上海新苗医疗器械制造有限公司2、菌液的制备取备用菌种的新鲜培养物接种至相应的培养基中依法培养，将培养物用0.9%无菌氯化钠溶液黑曲霉菌的培养物用含0.05%（ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释制成含菌数50100cfu/ml的菌悬液。试验用菌

8、种菌种传代至菌种接种至稀释用溶液稀释级计数cfu/ml大肠埃希菌CMCC（B44102第 代金黄色葡萄球菌CMCC（B26003枯草芽孢杆菌CMCC（B63501白色念珠菌CMCC（F98001黑曲霉CMCC（F98003改良马丁琼脂斜面培养基含0.05%（ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液三、适用性检查：1、操作：取上述菌液（50100cfu/ml）各1ml立即注入无菌平皿中，立即倾注45 营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基15ml，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养48h / 2328倒置培养72h，计数。另取一平皿不接种菌液作为空白对照。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。2、记录：培养温度： ，培养时间： 日 时 分 日 时 分试验菌生长情况记录表试验菌株平皿号被检培养基对照培养基回收率%被检培养基与对照培养基菌落形态大小比较大肠埃希菌1一致不一致2平均值金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌判定标准被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致结 论被检培养基符合规定。被检培养基不符合规定。四、检查报告：本品按照中国药典2010年版微生物限度检查法进行适用性检查检验，结果符合规定不符合规定。