1022计数培养基适用性检查标准操作规程Word格式.docx

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质量部

分发范围:

质量部、质控部、档案室

目的：

规范计数培养基适用性检查的标准操作程序。

范围：

本标准适用于计数培养基适用性检查的操作程序。

责任：

质控部微生物检验人员负责执行，质控部负责人监督实施。

正文：

1概述：

培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，计数培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素。

2培养基适用性检查的范围：

2010年版《中国药典》规定微生物检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

3试验用菌株

大肠埃希菌［CMCC（B44102］

金黄色葡萄球菌［CMCC（B26003］

枯草芽孢杆菌［CMCC（B63501］

白色念珠菌［CMCC（F98001］

黑曲霉［CMCC（F98003］

4试验用培养基

4.1菌液制备用培养基

营养肉汤培养基

改良马丁培养基

改良马丁琼脂培养基

4.2适用性检查培养基

营养琼脂培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基

4.34.2中培养基的对照培养基

5试验用稀释剂

0.9%无菌氯化钠溶液

含0.05%（ml/ml聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液

6试验用仪器设备

6.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平

6.2锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）

6.3接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。

7操作步骤：

7.1菌液的制备

7.1.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h，取30～35℃培养18～24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备用。

7.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h，取于23～28℃培养24～48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备用。

7.1.3接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。

7.2菌液的计数（每种菌液制备2个平皿）

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液1ml接种至营养琼脂培养基上，30～35℃培养48h，白色念珠菌和黑曲霉菌1ml接种至改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养72h，计数。

7.3适用性检查

7.3.1培养基的配制：

按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。

7.3.2营养琼脂培养基的适用性检查

取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃倒置培养48h，计数；

被检培养基同法操作。

7.3.3玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查

取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于23～28℃倒置培养72h，计数；

7.3.4酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的适用性检查

取3个无菌平皿，分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于23～28℃倒置培养72h，计数；

7.4结果判断

若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。

8附件：

计数培养基适用性检查记录/报告书（SOP-QC-1022-R-01）

9变更历史

版本号

变更控制号

更改内容

附件：

计数培养基适用性检查记录/报告书

SOP-QC-1022-R-01

检验编号：

培养基名称

规格

批号

生产单位

配制批号

琼脂培养基

被检品

g/瓶

对照品

g/袋

检验日期

年月日

检验人

报告日期

复核人

检验依据

《中国药典》2010年版微生物限度检查法

一、主要仪器设备

□恒温培养箱DHP120上海试验仪器厂

□霉菌培养箱MJ-160BSH-II上海新苗医疗器械制造有限公司

2、菌液的制备

取备用菌种的新鲜培养物接种至相应的培养基中依法培养，将培养物用0.9%无菌氯化钠溶液［黑曲霉菌的培养物用含0.05%（ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液］，按10倍递增稀释制成含菌数50～100cfu/ml的菌悬液。

试验用菌种

菌种

传代至

菌种接种至

稀释用溶液

稀释级

计数cfu/ml

□大肠埃希菌

［CMCC（B44102］

第代

□金黄色葡萄球菌［CMCC（B26003］

□枯草芽孢杆菌

［CMCC（B63501］

□白色念珠菌

［CMCC（F98001］

□黑曲霉

［CMCC（F98003］

改良马丁琼脂斜面培养基

含0.05%（ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液

三、适用性检查：

1、操作：

取上述菌液（50～100cfu/ml）各1ml立即注入无菌平皿中，立即倾注45℃□营养琼脂培养基□玫瑰红钠琼脂培养基□酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基15ml，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置□30～35℃培养48h/□23～28℃倒置培养72h，计数。

另取一平皿不接种菌液作为空白对照。

同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

2、记录：

培养温度：

℃，培养时间：

日时分～日时分

试验菌生长情况记录表

试验菌株

平皿号

被检培养基

对照培养基

回收率

%

被检培养基与

对照培养基菌落

形态大小比较

□大肠

埃希菌

1

□一致

□不一致

2

平均值

□金黄色

葡萄球菌

□枯草芽孢

杆菌

□白色

念珠菌

□黑曲霉菌

判定标准

被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致

结论

□被检培养基符合规定。

□被检培养基不符合规定。

四、检查报告：

本品按照《中国药典》2010年版微生物限度检查法进行适用性检查检验，结果□符合规定□不符合规定。