DNS法测定还原糖的含量Word格式.docx

1、葡萄糖标准溶液（1.0*10-3mol/l :取10ml上述10 2mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。匍萄辎标准溶液（1.0*10-4mol/l取伽I上述10 3mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。二显色条件的选择1.波长选择 取5支试管按卜-表加和应溶液.沸水 浴15min,均加入7m冰定容为10ml,流水冷却，在不 同波长处分别进行扫描。试管号1234DNS/nil水/ml糖/ml IO : lOmol/l）图1为不同条件卜溶液的波长吸光度图（水涮零八 由图1可以看出白色号绿色曲线几乎重命 说明0.0001mol/l葡萄 糖溶液与DNS反应生成的氮基化合物极州 用比色法很难区

2、分. 故此法所能够测吊的俪葡糖浓度应人JL0.0001mol/L由DNS + H2O肘线可以存出当波长大J 530nm时.DNS的吸比应已綽很小. 这时DNS竹反应牛成的粽圧化合物吸光度的讹响町以忽略图2为4号试管稀释10倍后波长扌I描图逸扌羊540如作为赧住吸收波L * * i v * * * I v | * 1i i i i/; （Xa510 520 5X 540 550 560 570Fig.2 4-试讼林甘10仃G波匕打描4号试管川离浓度的匍羽榊洛液和少尿的DNS试剂反应，伙生成大眾的氨基化合物但其吸光度太大仪器无法测定故将其稀邸10倍。以水调零未出现最髙席.以DNS调零时（图2）/i

3、：540nm处有最奇峰.这说明在该浓度下.DNS町能会对氨垄化合物吸光度的测航仃佼大影响,故测啟时以DNS训零较准确2DNS用厳选择取试符按卜我加相应溶液，沸水浴3（加in,加入适最水使定容为10ml,流水冷却,以1号试管中DNS溶液为参比，在540H1U处测吸光度。UWH）t95MValL15H- i（rI山图31 r以看出溶液的吸光度随着dns用n t m 大而 增大，但当DNS用量达到35讷时，吸光度反而下降, 这说明DNS的用杲不是越多越好,只要在与糖的反应中 DNS有剩余即可。如果DNS用量过多,会使测量时DNS溶 液浓度过大,造成测最不准。综合考虑，此次实验选3.反应时间（水浴时间

4、）取试管按卜表加相应溶液, 沸水浴相应时间后，加入7nil水定容为10ml,流水冷却.以6试管中的DNS试剂凋冬，在540niu处测吸光度。6AiB*Vml才-11M OrZAW 皿KM /kn10IB302540由图4可以看出,随着煮沸时间的加长,吸光度加大,另有实验表明单纯加热DNS试剂也会使其吸光度增大，故在制作标准曲线和测定未知浓度时，煮沸时间必须相同。此次实验确宦晟佳煮沸时间为30mino4反应溶液的酸度范西的选择取试符按下表加相应试剂,由于所用器皿为试管,不方便用PH 计调节PH,此次实验采用加入不同敬的6%的盐酸溶液的办法, 以PH试纸调节洛液的酸度。点沸2011 in各加入7n

5、l水定容 为1血1 流水冷却.以MS试剂调零./l；540m处测吸光喪。?S-pI 1HI/ H11sLO7图5中的PH是用PH试纸调出的,该曲线只能反映变化趋势. 山图5町以看岀.溶液的碱性越强.反应进彳j的越完全. 溶液的酸度越小.越有利氨菇化合物的生成。另外由于 DNS试列就定用NaOH溶液配制的址纯DNS与水的混合 液的PH值己经超过14且DNS在皮应屮是过贾的.反应时 间是足够长的,故测量时只需将被测溶液调至中1k无需 刻意调节反应混合物溶液的PH值，保证测琏时DNS试剂、 糖的用量与制作标准曲线时相同即可。0.3025020 150.10.056 8 10 12 14 16 PHp

6、iciurr 5三.标准曲线的建龙取试竹按下农加柑应试剂，由001耐1/1葡豁丽标准液配 制“10 ol/l （3二只二27）的葡萄糖恿沸30in后.各 加入7讥水定容为101L流水冷却,以DNS试剂调零,在 540niu处测吸比度。!IIMDWV.JWtlBMlfIMne1、ITHx21卜用I为匍簡糖标准曲线图.匍萄糖含S： （BOl/l）与相应的吸光度（A）有一定的线性关系，且其回归方程为: y=04971+0.035786X. R= 0.9954 c10 20 30 40 50 00 70 80 ,Siucc standard arvd glUClBW Chnllkl/IO mUI0 10463.0W16MM FU 0 00617O D gluccnc* MarxlMil curve I另外采用较高浓度的葩萄糖來制作标准曲线,得到下图2： 其回归方用为：y=-0.10483+0.031804x,R=099817.当所测得的吸光度比较小时,可用图1中的方程，当所测得的吸光度较大时，可用图2中的方程下一步实验计划：1重复以上已做实验,找到几组较准确的实 验数据，做出匍萄糖标准曲线。2探索秸秆屮葡萄糖含量与产氢量的关系， 将本次实验结果服务J：生物制氢。谢谢!