DNS法测定还原糖的含量Word格式.docx
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葡萄糖标准溶液（1.0*10-3mol/l>
:
取10ml上述10・2mol/l溶液，稀释至100ml容量瓶中。
匍萄辎标准溶液（1.0*10-4mol/l>
取伽I上述10・3mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。
二•显色条件的选择
1.波长选择取5支试管按卜-表加和应溶液.沸水浴15min,均加入7m冰定容为10ml,流水冷却，在不同波长处分别进行扫描。
试管号
1
2
3
4
DNS/nil
水/ml
糖/ml
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IO:
«
lO^mol/l）
图1为不同条件卜溶液的波长——吸光度图（水涮零八由图1可以看出白色号绿色曲线几乎重命说明0.0001mol/l葡萄糖溶液与DNS反应生成的氮基化合物极州用比色法很难区分.故此法所能够测吊的俪葡糖浓度应人JL0.0001mol/L
由DNS+H2O肘线可以存出当波长大J530nm时.DNS的吸比应已綽很小.这时DNS竹反应牛成的粽圧化合物吸光度的讹响町以忽略°
图2为4号试管稀释10倍后波长扌I描图
逸扌羊540如作为赧住吸收波L<
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iv***Iv|*1iiii
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5105205X540550560570
Fig.24-｝试讼林甘10仃G波匕打描
4号•试管川离浓度的匍羽榊洛液和少尿的DNS试剂反应，伙
生成大眾的氨基化合物•但其吸光度太大•仪器无法测定•故
将其稀邸10倍。
以水调零未出现最髙席.以DNS调零时（图2）
/i：
540nm处有最奇峰.这说明在该浓度下.DNS町能会对氨垄
化合物吸光度的测航仃佼大影响,故测啟时以DNS训零较准确
2・DNS用厳选择取试符按卜我加相应溶液，沸水浴
3（加in,加入适最水使定容为10ml,流水冷却,以1号
试管中DNS溶液为参比，在540H1U处测吸光度。
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15
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山图31«
r以看出溶液的吸光度随着dns用ntm大而增大，但当DNS用量达到3・5讷时，吸光度反而下降,这说明DNS的用杲不是越多越好,只要在与糖的反应中DNS有剩余即可。
如果DNS用量过多,会使测量时DNS溶液浓度过大,造成测最不准。
综合考虑，此次实验选
3.反应时间（水浴时间）取试管按卜•表加相应溶液,沸水浴相应时间后，加入7nil水定容为10ml,流水冷却.
以6©
试管中的DNS试剂凋冬，在540niu处测吸光度。
6
A
■
i
B
*
V
ml
才
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11MOr
Z
AW皿
KM/■kn
10
IB
30
25
40
由图4可以看出,随着煮沸时间的加长,吸光度
加大,另有实验表明单纯加热DNS试剂也会使其
吸光度增大，故在制作标准曲线和测定未知浓
度时，煮沸时间必须相同。
此次实验确宦晟佳
煮沸时间为30mino
4反应溶液的酸度范西的选择
取试符按下表加相应试剂,由于所用器皿为试管,不方便用PH计调节PH,此次实验采用加入不同敬的6%的盐酸溶液的办法,以PH试纸调节洛液的酸度。
点沸2011in・各加入7nl水定容为1血1•流水冷却.以MS试剂调零./l；
540m处测吸光喪。
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S-
p
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HI
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H
11
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7
图5中的PH是用PH试纸调出的,该曲线只能反映变化趋势.山图5町以看岀.溶液的碱性越强.反应进彳j•的越完全.溶液的酸度越小.越有利『氨菇化合物的生成。
另外由于DNS试列就定用NaOH溶液配制的•址纯DNS与水的混合液的PH值己经超过14•且DNS在皮应屮是过贾的.反应时间是足够长的,故测量时只需将被测溶液调至中1k无需刻意调节反应混合物溶液的PH值，保证测琏时DNS试剂、糖的用量与制作标准曲线时相同即可。
0.3
025
02
＜015
0.1
0.05
6810121416PH
piciurr5
三.标准曲线的建龙
取试竹按下农加柑应试剂，由0・01耐1/1葡豁丽标准液配制“10•■ol/l（3＜二只＜二27）的葡萄糖•恿沸30・in后.各加入7讥水定容为101L流水冷却,以DNS试剂调零,在540niu处测吸比度。
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21
卜用I为匍簡糖标准曲线图.匍萄糖含S：
（BOl/l）
与相应的吸光度（A）有一定的线性关系，且其回归方程为:
y=・0」4971+0.035786X.R=0.9954c
1020304050007080,
Siucc^standardarvdglUClBWChn>
llkl/IOm<
UI
010463.0W16MMFU000617
OD
••••••••
gluccnc*MarxlMilcurveI
另外采用较高浓度的葩萄糖來制作标准曲线,得到下图2：
其回归方用为：
y=-0.10483+0.031804x,R=0<
99817.
当所测得的吸光度比较小时,可用图1中的方程
，当所测得的吸光度较大时，可用图2中的方程
下一步实验计划：
1・重复以上已做实验,找到几组较准确的实验数据，做出匍萄糖标准曲线。
2•探索秸秆屮葡萄糖含量与产氢量的关系，将本次实验结果服务J：
生物制氢。
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