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1、从众多的微生物分离所需的微生物依据某些微生物对某些物质的抗性而设计培养基中加入某种化学物质鉴别培养基鉴别不同种类的微生物依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计培养基中加入某种指示剂或化学药品二、无菌技术目的是防止杂菌污染消毒：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。常用的消毒方法有：、煮沸消毒法、巴氏消毒法：相对低温加热较长时间说明：该方法既可杀死病菌又能保持物营养物质和风味不变，常用于食品消毒。、酒精消毒（70%酒精）、紫外线消毒、其他化学消毒剂消毒灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内所有的

2、微生物，包括芽孢和孢子。灭菌种类主要方法应用范围灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧接种工具如接种环、接种针或其他金属用具、接种过程中试管口等干热灭菌电热鼓风干燥箱160170oC加热12h玻璃器皿（如吸管、培养皿等）、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品高压蒸汽灭菌121oC维持1530min培养基及多种器材物品三、实验操作（大肠杆菌的分离与纯化操作流程及分析）、稀释涂布平板法操作：【巩固练习】1、有关倒平板操作错误的是A、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B、使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C、将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上D、等待平板冷却凝固后需要倒过来放置2、有关稀释涂布平板法，叙述

3、错误的是A、首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释B、然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C、适宜条件下培养D、结果都可在培养基表面形成单个菌落3、关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是A、操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B、将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C、待培养基冷却至50oC左右进行倒平板D、待平板冷却凝固约510分钟后将平板倒过来放置4、获得纯净培养物的关键是A、将用于微生物培养的器皿、接种工具、培养基等进行灭菌B、接种纯种细菌C、适宜环境条件下培养D、防止外来杂菌的入侵5、下列关于灭菌的说法中，不正确的是A、灭菌是杀死一定环境中所有微生物的细胞，不包

4、括芽孢和孢子B、对不同的生物材料，应采取不同的灭菌方法C、培养基一般采用高压蒸汽灭菌法D、高压蒸汽灭菌法最终使菌体蛋白质凝固变性 课题2 微生物的分离和计数一、微生物数量的测定1、活菌计数法（稀释涂布平板法）（1）依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少个活菌。（2）统计活菌的数目：挑选菌落数在30300的平板进行计数。注：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。2、显微镜直接计数法（抽样检测法）（1）原理：利用特定的血球计数板或血细胞计数板，在显微镜下计数一定容积样品中微生物数量。（2）缺点：不能区分

5、死菌和活菌二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1、实验原理：（1）用以尿素作为唯一碳源的选择培养基筛选出能分解尿素的细菌（2）细菌中的脲酶将尿素分解成氨，氨使培养基碱性增强，pH升高。加入酚红指示剂，则会变红2、实验流程及分析注意：1、样品稀释倍数依计数微生物种类的不同而有差异，一般细菌:104、105、106倍稀释；放线菌：103、104、105倍稀释；真菌：102、103、104倍稀释。2、培养时间和温度依培养微生物种类的不同而有差异，一般细菌：3037培养12d；2528培养57d；霉菌：2528培养34d。三、分解纤维素的微生物的分离（1）刚果红与纤维素等多糖结合形成红色复合物，纤维素

6、被分解后的产物纤维二糖和葡萄糖均不能和刚果红形成红色复合物。（2）培养基中含有刚果红时，被分解的纤维素周围会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈1、下表表示在不同培养基中细菌的生长繁殖情况（A、B、C、H、I、J、K、M为培养基的成分，“+”表示生长，“”表示不生长），请分析下列哪种物质细菌不能合成培养基成分A、B、CA、B、C、I、MA、B、C、H、MA、B、C、J、MA、B、C、I、KA、B、C、H、JA、B、C、K、M生长状态+A、H B、I C、K D、M2、在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同

7、，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于A、空白对照 B、标准对照 C、相互对照 D、条件对照3、用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是选择土壤中分解尿素的生物所需氮源为A、硝酸 B、氨 C、尿素 D、蛋白胨4、在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学选择出大约20个菌落。A同学的结果产生原因可能是：采用的土样不同培养基跑被污染 操作出现失误没有设置对照A、 B、 C、 D、5、分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂 加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A、 B、C、D、6、要从多种

8、细菌中分离某种细菌，培养基要用A、加入青毒素的培养基 B、固体培养基 C、加入伊红美蓝 D、液体培养基7、用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目上，其结果与实际值相比A、比实际值高 B、比实际值低 C、和实际值可能高也可能低 D、和实际值一致8、关于测定土壤中细菌的数量的叙述，正确的是A、一般选用103107倍稀释液分别涂布B、测定放线菌的数量，一般选用103、104、105C、测定真菌的数量，一般选用103、104、105倍稀释D、当第一次测量某种细菌的数量时，可以将101107倍的稀释液分别涂布到平板上培养9、如下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：成分含量NaNO33gFeSO40.0

9、1gK2HPO41g（CH2O）30g琼脂15gH2O1000mlMgSO47H2O0.5g青霉素0.1万单位（1）不同的培养基一般都含有 、 、 、 等营养要素，另外还要有适宜的外界条件，如 、 、 。（2）依物理性质，该培养基属于 培养基；依用途划分，则属于 培养基。（3）该培养基中的碳源是 ，不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是 。（4）若用该培养基培养纤维素分解菌，就除去的物质是 ，应加入的物质是 ，为检测纤维素分解菌的存在也否还应加入 ，将出现 。答案：（1）水 无机盐 碳源 氮源 适宜温度 PH 氧气的有无（2）固体 选择 （3）先调整PH（4）青霉素和（CH2O）

10、纤维素粉 刚果红 透明圈 专题二酶的应用一、酶活力测定的一般原理和方法、酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力。酶活性的高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的速率来表示。反应速率用单位时间、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。、影响酶活性的因素：温度、PH值、抑制剂等二、酶在食品制造和洗涤等方面的应用、果胶酶：能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁和胞间层，使果汁榨取变得容易。而果胶酶是一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶等。、加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶。、普通洗衣粉含有磷，含磷污水大量排放会造成水体

11、富营养化。三、探究在什么温度和PH的条件下果胶酶活性最大自变量：不同温度、PH条件 因变量：滤出的苹果汁的体积（果胶酶的活性）无关变量：果胶酶用量、反应时间、过滤时间等、酶反应速度可用哪一项来表示、单位时间内反应物的减少量、单位体积内产物的增加量、单位时间内产物的增加量、单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量、下列说法正确的是、植物、霉菌、酵母菌和细菌等所有生物活细胞均能产生果胶酶、由酵母菌发酵产生的果胶酶是食品工业中使用量最大的酶制剂之一、果胶酶是分解果胶的一类酶的总称、温度过高或过低，果胶酶都丧失活性、果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，它不包括、多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、乳酸

12、分解酶、果胶酯酶、在“探究温度和对酶活性的影响”“探究果胶酶的用量”三个实验中，实验变量依次为、温度、酶活性、果胶酶用量、苹果泥用量、果汁量、反应时间、酶活性、果胶酶用量、温度、果胶酶用量、蛋白酶是一种专门用在液体洗涤剂中的高强度蛋白溶液。蛋白酶的活力与的关系如图所示。请据图分析，下列说法中正确的是、该洗涤适宜于酸性条件下使用、该洗涤剂在温水中的洗涤效果比冷水中好、该洗涤剂在弱碱性条件下洗涤下洗涤效果较好、该酶的活力随的升高，活力不断增强、下列关于加酶洗衣粉的叙述，正确的是加酶洗衣粉能将衣服上的蛋白质、脂肪等水解成溶于水的小分子物质加酶洗衣粉最常用的酶制剂是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶使用加酶洗衣粉

13、时一般先用开水浸开，然后调至适宜温度使用加酶洗衣粉可减少对环境的污染加酶洗衣粉的酶通过特殊的化学物质将其层层包裹，遇水后溶解实际生活中，用加酶洗衣粉的水温在之间较适宜温度过高或过低均不宜加酶洗衣粉使用加酶洗衣粉时应注意衣服的承受能力、 B 、专题三DNA和蛋白质技术课题 DNA的粗提取与鉴定l 说明：用鸡血细胞等进行实验时，需要加入柠檬酸钠以防止凝血。加入酒精和玻璃棒搅拌等，动作要轻，以免DNA分子断裂，不能形成絮状沉淀。二苯胺要现配现用，否则影响鉴定效果。思考：DNA粗提取的原理： 1、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同2、DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精DN

14、A鉴定的原理： 1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是A、防止凝血B、加快DNA析出C、加快DNA溶解D、加速凝血2、下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是A、氯化钠的浓度越低，DNA的溶解度越大B、人体的血液不可代替鸡血进行该实验C、柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂D、利用DNA易溶于酒精的特点可除去DNA中的部分杂质3、若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞是加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是A、利于DNA的溶解B、分离DNA和蛋白质C、溶解细胞膜D、溶解蛋白质4、下列操作中，对DNA的提取量影响较小的是A、使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质B、搅拌时，

15、要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动C、在析出DNA黏稠物时，要缓慢加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增多D、在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却5、实验得到细胞中提取的丝状物主要成分就是DNA的结论，最重要的依据是A、这些丝状物易溶于2mol/L的氯化钠溶液中B、加酒精可使溶解的丝状物再被析出C、这些丝状物易溶于0.015mol/L氯化钠溶液中D、将这些丝状物溶解后，遇二苯胺（沸水浴）变蓝色6、下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是（双选）试剂操作作用A柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固B蒸馏水与鸡血细胞混合保持细胞形状C加入到溶解有DN

16、A的NaCl中析出DNA丝状物D冷却的酒精加入到过滤后DNA的NaCl中产生特定的颜色反应7、“DNA的粗提取与鉴定”实验中，除下表所列的处理方法不同外，A、B、C、D、E五组实验操作步骤均相同，且正确。请据表回答问题：组别实验材料提取核物质时加入的溶液却除杂质时加入的溶液DNA鉴定时加入的试剂鸡血95%的酒精（25oC）二苯胺菜花95%的酒精（冷却）双缩脲人血浆人血细胞2mol/L的氯化钠0.14mol/L的氯化钠E（1）实验材料选择错误的组别是 ，其原因 （2）沸水浴中试管颜色变蓝的组别是 （3）B组实验不能获得DNA的主要原因是 （1）C、D 人的血浆中没有DNA，成熟的红细胞中没有细胞

17、核，选用这些材料提取不到DNA （2）A、E （3）菜花细胞在蒸馏水中不能被破坏，需要加入一定的洗涤剂和食盐，并研磨。 课题 血红蛋白的提取和分离一、凝胶色谱法（分配色谱法）原理：是根据相对分子质量的大小分离蛋白质凝胶色谱法中所用的凝胶为多糖类物质构成的微小的多孔球体，小球体内部有许多贯穿的通道。相对分子质量大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快；相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。不同相对分子质量的蛋白质因此得以分离。二、缓冲溶液缓冲溶液是指能够抵制外界的酸碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变的溶液。一般由弱酸和相应的强

18、碱弱酸盐组成（如H2CO3/NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制出不同pH的缓冲液三、电泳、原理：电泳利用各分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电粒子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离、类型：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳四、分离血红蛋白的流程及分析、血红蛋白的提取和分离实验中，将搅拌好的混合液转移到离心管离心后，可以明显看到试管中的溶液分为层，其中第层是（从上往下数）、无色透明的甲苯层、脂溶性物质的沉淀层、血红蛋白的水溶液、其他杂质的暗红色沉淀物、凝胶色谱法是根据蛋白质（）分离蛋白质的有效方法、对其他分子的亲和力、相

19、对分子质量的大小、带电荷的多少、溶解度的大小、在凝胶色谱柱移动得快的是、相对分子质量大的、溶解度高的、相对分子质量小的、溶解度低的、蛋白质分离和提取分为哪几步？、样品处理、凝胶色谱操作、纯化、样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定、样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定、样品处理、凝胶色谱操作、聚丙烯酰胺凝胶电泳、下列有关提取和分离血红蛋白实验的叙述错误的是、样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液、通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取、可通过凝胶色谱法将相对分子质量磊的杂质蛋白除去，即样品的纯化、可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度课题 多聚酶链式反应扩增DNA片段

20、一、技术的原理l PCR也叫多聚酶链式反应或聚合酶链式反应，它是在体外模拟DNA复制的过程，双链复制的原理PCR和细胞内DNA复制的比较细胞内DNA复制需要PCR需要解旋酶解旋（打开DNA双链）升高温度破坏氢键DNA分子的两条链模板4种脱氧核苷酸（dNTP）原料细胞内的DNA聚合酶DNA聚合酶Taq DNA聚合酶（耐高温）RNA引物一般用DNA（两个引物）细胞内液缓冲液配制的缓冲溶液二、的反应过程三、技术的应用利用技术，就能以极少量的为模板，在几小时内复制出上百万份相同的。这项技术有效地解决了因为样品中含量太低而难以对样品进行分析研究的问题，从而补广泛地应用于遗传疾病的诊断、基因克隆和序列测定

21、等方面。、标准的技术过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是、OC、的合成方向总是（）延伸、从分子的左端向右端、从分子的右端向左端、从子链的端向端、从子链的端向端、关于复制，下列叙述正确的是、聚合酶不能从头开始合成，只能从端延伸链、复制不需要引物、引物与母链通过碱基互补配对进行结合、的合成方向总是从子链的端向端延伸、技术利用了的（）原理，来控制的解聚与结合、特异性、稳定性、热变性、多样性、一般经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物延伸而成的单链做模板时将、仍与引物结合进行子链的延伸、与引物结合进行子链的延伸、同时与引物和引物结合进行子链延伸、无需也引物结合，在酶的作用下从头合成子链专题四 植物的组织培养一、植物组织培养1、过程：离体的植物器官、组织或细胞（外植体）愈伤组织胚状体新个体外植体用于组织培养的离体的植物器官或组织。愈伤组织未分化的、高度液泡化的无固定形状态的薄壁细胞。脱分化已分化的细胞返回到原先的未分化状态的过程。再分化脱分化的细胞