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USP61

非无菌产品微生物学检查：

微生物计数检查法USP61中英对照版

<61>MICROBIOLOGICALEXAMINATIONOFNONSTERILEPRODUCTS:

MICROBIALENUMENRATIONTESTS

非无菌产品微生物学检查：

微生物计数检查法

INTRODUCTION导言

Thetestsdescribedhereafterwillallowquantitativeenumerationofmesophilicbacteriaandfungithatmaygrowunderaerobicconditions.

以下所描述的这些检测将使得对在有氧的条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数成为可能。

Thetestsaredesignedprimarilytodeterminewhetherasubstanceorpreparationcomplieswithanestablishedspecificationformicrobiologicalquality.Whenusedforsuchpurposes,followtheinstructionsgivenbelow,includingthenumberofsamplestobetaken,andinterprettheresultsasstatedbelow.

这些检测主要设计用于测定一种物质或制备品是否符合已确立的微生物质量标准。

当用于此类目的时，需遵照以下所给的说明，包括待取样品的数量，并且按照下面所述解释结果。

Themethodsarenotapplicabletoproductscontainingviablemicroorganismsasactiveingredients.

这些方法不适用于以活菌作为活性成分的产品。

Alternativemicrobiologicalprocedures,includingautomatedmethods,maybeused,providedthattheirequivalencetothePharmacopeialmethodhasbeendemonstrated.

可以使用替代的微生物规程，包括自动化方法，只要已经证明它们与药典方法具同等作用。

GENERALPROCEDURES通用规程

Carryoutthedeterminationunderconditionsdesignedtoavoid12microbialcontaminationoftheproducttobeexamined.Theprecautionstakentoavoidcontaminationmustbesuchthattheydonotaffectanymicroorganismsthataretoberevealedinthetest.

在经过设计可避免外来微生物污染供试产品的条件下，进行此项测定。

用于避免污染的这些预防措施是必须做到，它们不会影响任何试图在此项检验中揭示的微生物。

Iftheproducttobeexaminedhasantimicrobialactivity,thisis,insofaraspossible,removedorneutralized.Ifinactivatorsareusedforthispurpose,theirefficacyandtheirabsenceoftoxicityformicroorganismsmustbedemonstrated.

如果供试产品具有抗菌活性，则此活性需在尽可能的范围内去除或中和。

如果将灭活剂用于这个目的，则必须证实它们的功效和对微生物不具毒性。

Ifsurface-activesubstancesareusedforsamplepreparation,theirabsenceoftoxicityformicroorganismsandtheircompatibilitywithanyinactivatorsusedmustbedemonstrated.

如果表面活性物质用于样品制备，则必须证实它们对微生物不具毒性以及与所使用的任何灭活剂的兼容性。

ENUMERATIONMETHODS计数法

UsetheMembraneFiltrationmethodoroneofthePlate-CountMethods,asdirected.TheMost-Probable-Number（MPN）Methodisgenerallytheleastaccuratemethodformicrobialcounts;however,forcertainproductgroupswithverylowbioburden,itmaybethemostappropriatemethod.

按规定，使用膜过滤法或多个平板计数法中的一种。

液体稀释法（MPN）通常对微生物计数而言是最不准确的方法；然而，对具备非常低生物载荷的特定产品类型，它可能是最合适的方法。

Thechoiceofamethodisbasedonfactorssuchasthenatureoftheproductandtherequiredlimitofmicroorganisms.Themethodchosenmustallowtestingofasufficientsamplesizetojudgecompliancewiththespecification.Thesuitabilityofthechosenmethodmustbeestablished.

方法的选择基于某些因素，例如产品的性质和微生物的要求限度。

所选的方法必须能够对充足的样本量进行检测，以判断与质量标准的符合性。

所选方法的适用性必须被建立。

Table1.PreparationandUseofTestMicroorganisms

表1.供试微生物的制备和使用

GrowthPromotion

生长促进

SuitabilityofCountingMethodinthePresenceofProduct

在产品存在的情况下计数方法的适用性

Microorganism

微生物

PreparationofTestStrain

供试菌株的制备

TotalAerobicMicrobialCount

总好氧微生物计数

TotalYeastsandMoldsCount总酵母菌和霉菌计数

TotalAerobicMicrobialCount

总好氧微生物计数

TotalYeastsandMoldsCount总酵母菌和霉菌计数

StaphylococcusaureussuchasATCC6538,NCIMB9518,CIP4.83,orNBRC13276

金黄色葡萄球菌如：

ATCC6538,NCIMB9518,CIP4.83,或NBRC13276

Soybean-CaseinDigestAgarorSoybean-CaseinDigestBroth300-35018-24hours

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-35018-24小时

Soybean-CaseinDigestAgarandSoybean-CaseinDigestBroth≤100cfu300-350≤3days

大豆酪蛋白消化物培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100cfu300-350≤3天

Soybean-CaseinDigestAgar/MPNSoybean-CaseinDigestBroth≤100cfu300-350≤3days

大豆酪蛋白消化物培养基/MPN（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100cfu300-350≤3天

PseudomonasaeruginosasuchasATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118,orNBRC13275

绿脓杆菌如ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118,或NBRC13275

Soybean-CaseinDigestAgarorSoybean-CaseinDigestBroth300-35018-24hours

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-35018-24小时

Soybean-CaseinDigestAgarandSoybean-CaseinDigestBroth≤100cfu300-350≤3days

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100cfu300-350≤3天

Soybean-CaseinDigestAgar/MPNSoybean-CaseinDigestBroth≤100cfu300-350≤3days

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基/MPN（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100cfu300-350≤3天

BacillussubtilissuchasATCC6633,NCIMB8054,CIP52.62,orNBRC3134

枯草芽孢杆菌如ATCC6633,NCIMB8054,CIP52.62,或NBRC3134

Soybean-CaseinDigestAgarorSoybean-CaseinDigestBroth300-35018-24hours

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-35018-24小时

Soybean-CaseinDigestAgarandSoybean-CaseinDigestBroth≤100cfu300-350≤3days

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100cfu300-350≤3天

Soybean-CaseinDigestAgar/MPNSoybean-CaseinDigestBroth≤100cfu300-350≤3days

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基/MPN（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100cfu300-350≤3天

CandidaalbicanssuchasATCC10231,NCPF3179,IP48.72,orNBRC1594

白色念珠菌如ATCC10231,NCPF3179,IP48.72,或NBRC1594

SabouraudDextroseAgarorSabouraudDextroseBroth200-2502-3days

 Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培养基或Sabouraud（沙氏）葡萄糖肉汤培养基

Soybean-CaseinDigestAgar≤100cfu300-350≤5days大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100cfu300-350≤5天

SabouraudDextroseAgar≤100cfu200-250≤5days

Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100cfu200-250≤5天

Soybean-CaseinDigestAgar≤100cfu300-350≤5daysMPN:

notapplicable

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100cfu300-350≤5天MPN（最大几率数）：

不适用

SabouraudDextroseAgar≤100cfu200-250≤5days

Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100cfu200-250≤5天

AspergillusnigersuchasATCC16404,IMI149007,IP1431.83,orNBRC9455

黑曲霉如ATCC16404,IMI149007,IP1431.83,或NBRC9455

SabouraudDextroseAgarorPotato-DextroseAgar200-2505-7days,oruntilgoodsporulationisachieved

Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基 200-250 5-7天,或直到实现良好的产孢

Soybean-CaseinDigestAgar≤100cfu300-350≤5days

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100cfu300-350≤5天

SabouraudDextroseAgar≤100cfu200-250≤5days

Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100cfu200-250≤5天

Soybean-CaseinDigestAgar≤100cfu300-350≤5daysMPN:

notapplicable

大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100cfu300-350≤5天MPN（最大几率数）：

不适用

SabouraudDextroseAgar≤100cfu200-250≤5days

Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100cfu200-250≤5天

GROWTHPROMOTIONTESTANDSUITABILITYOFTHECOUNTINGMETHOD生长促进试验和计数方法的适用性

GeneralConsiderations通用考虑因素

Theabilityofthetesttodetectmicroorganismsinthepresenceofproducttobetestedmustbeestablished.

在供试产品存在的情况下，必须确立检测微生物的试验能力。

Suitabilitymustbeconfirmedifachangeintestingperformanceorachangeintheproductthatmayaffecttheoutcomeofthetest,isintroduced.

如果引入了可能影响试验结果的在测试性能或产品方面的变更，则必须确认其适用性。

PreparationofTestStrains

供试菌株的制备

Usestandardizedstablesuspensionsofteststrainsorprepareasstatedbelow.Seed-lotculturemaintenancetechniques（seed-lotsystems）areusedsothattheviablemicroorganismsusedforinoculationarenotmorethan5passagesremovedfromtheoriginalmasterseed-lot.GroweachofbacterialandfungalteststrainsseparatelyasdescribedinTable1.

使用供试菌株的标准化稳定悬浮液或按下面所述制备。

使用菌种保藏技术（种子批系统），以便用于接种的可萌发微生物从最初的主种子批开始传代不超过5次。

按照在表1中的描述，分别培养每个细菌和霉菌供试菌株。

UseBufferedSodiumChloride-PeptoneSolutionpH7.0orPhosphateBufferSolutionpH7.2tomaketestsuspensions;tosuspendA.nigerspores,0.05%ofpolysorbate80maybeaddedtothebuffer.Usethesuspensionswithin2hours,orwithin24hoursifstoredbetween2oand8o.AsanalternativetopreparingandthendilutingafreshsuspensionofvegetativecellsofA.nigerorB.subtilis,astablesporesuspensionispreparedandthenanappropriatevolumeofthesporesuspensionisusedfortestinoculation.Thestablesporesuspensionmaybemaintainedat2oto8oforavalidatedperiodoftime.

使用pH7.0的缓冲氯化钠-蛋白胨溶液，或pH7.2的磷酸盐缓冲液制作供试悬浮液；为使黑曲霉孢子悬浮，可以将0.05%的聚山梨醇酯80加入该缓冲液中。

这些悬浮液需在2个小时之内使用，或如果存放在2o至8o的条件下，则可在24小时之内使用。

作为制备然后稀释黑曲霉或枯草杆菌的新鲜体细胞悬浮液的替代方法，可制备稳定的孢子悬浮液，然后将适量的孢子悬浮液用于试验接种。

此稳定的孢子悬浮液可以在2o至8o之间于一段经过验证的时间内保存。

NegativeControl阴性对照

Toverifytestingconditions,anegativecontrolisperformedusingthechosendiluentinplaceofthetestpreparation.Theremustbenogrowthofmicroorganisms.

为了确认试验的条件，在制备供试品的场所使用所选的稀释液替代供试品，作阴性对照。

其必须没有微生物的增长。

GrowthPromotionoftheMedia

培养基的生长促进

Testeachbatchofready-preparedmediumandeachbatchofmediumpreparedeitherfromdehydratedmediumorfromtheingredientsdescribed.

对每一批已经制备好的培养基和每一批从脱水培养基或根据描述的组分制备出来的培养基，进行测试。

Inoculateportions/platesofSoybean-CaseinDigestBrothandSoybean-CaseinDigestAgarwithasmallnumber（notmorethan100cfu）ofthemicroorganismsindicatedinTable1,usingaseparateportion/plateofmediumforeach.InoculateplatesofSabouraudDextroseAgarwithasmallnumber（notmorethan100cfu）ofthemicroorganismsindicatedinTable1,usingaseparateplateofmediumforeach.IncubateaccordingtotheconditionsdescribedinTable1.

在部分/整个平皿内的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基和大豆酪蛋白消化物琼脂培养基中接种少量（不超过100cfu）表1中指定的微生物，每种微生物均使用单独的部分/整个平皿的培养基。

在平皿内的Sabouraud（沙氏）葡萄粮琼脂培养基中接种少量（不超过100cfu）表1中指定的微生物，每种均使用一个单独平皿的培养基。

按照表１中描述的条件进行培养。

Forsolidmedia,growthobtainedmustnotdifferbyafactorgreaterthan2fromthecalculatedvalueforastandardizedinoculum.Forafreshlypreparedinoculum,growthofthemicroorganismscomparabletothatpreviouslyobtainedwithapreviouslytestedandapprovedbatchofmediumoccurs.Liquidmediaaresuitableifclearlyvisiblegrowthofthemicroorganismscomparabletothatpreviouslyobtainedwithapreviouslytestedandapprovedbatchofmediumoccurs.

对于固体培养基，所获得的生长与标准化接种体的计算值之间的差异因素决不能大于2。

对于刚刚制备好的接种体，发生的微生物生长与用此前检验并批准过的培养基批次所得到的微生物生长相当。

如果出现了与此前从上一个经过测试并批准的培养基批次获得的微生物生长相当的、清晰可见的、微生物生长，则液体培养基适用。

SuitabilityoftheCountingMethodinthePresenceofProduct

在存在产品的情况下计数法的适用性

PREPARATIONOFTHESAMPLE样品的制备

Themethodforsamplepreparationdependsonthephysicalcharacteristicsoftheproducttobetested.Ifnoneoftheproceduresdescribedbelowcanbedemonstratedtobesatisfactory,asuitablealternativeproceduremustbedeveloped.

样品制备方法取决于供试品的物理