上师大植物组织培养学习纲要Word格式文档下载.docx
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植物材料消毒，接种及培养物继代转移操作
⒉组成：
缓冲室（间）接种室（间）
3.主要设备：
超净工作台，金属器械消毒器
4.无菌操作室的消毒
三）培养室
功能：
培养接种后材料，使其生长和分化。
主要设备：
培养架，干湿温度计
环境条件：
一般为25℃，白色日光灯，湿度30%到40%
四）温室
试管苗移栽生长
4.使用高压蒸汽灭菌锅进行各种器皿、器械及培养基灭菌时有哪些注意事项？
培养基灭菌温度？
到达灭菌温度时，培养基高压蒸汽灭菌所需的最少时间？
1）使用前应添加足够量的水；
2）锅内气压太高会引起部分有机物分解；
3）灭菌后在气压表归零之前不要打开锅盖，以免发生危险和培养基外溅现象；
4）橡胶等有机物品会因高温高压而变性；
5）高压蒸汽灭菌锅有一个自动排气的小孔，不要使其堵塞，否则会因气压升高而引起危险。
灭菌温度：
121℃。
保持15-20分
5.培养基中糖类物质的作用？
培养基中最常添加的糖类？
培养基中蔗糖的使用浓度？
糖类是非常重要的有机营养成分。
是植物生命活动中必不可少的碳源和能源。
同时还可以调节培养基渗透压。
最常添加蔗糖。
一般为：
10-50g/L，其中以30g/L用的最多。
6.培养基中最常添加的植物生长调节物质有哪两大类？
培养基中使用浓度范围？
为：
生长素和细胞分裂素。
生长素：
10-7——10-5mol/L，细胞分裂素：
10-7——10-5mol/L。
（0.1-10mg/L）
7.培养基中添加生长素类和细胞分裂素类物质各有何作用？
这两类激素的使用规律如何？
这两类激素母液如何配制？
激素母液浓度范围？
1）生长素：
有促进细胞生长和生根作用；
细胞分裂素：
促进细胞分裂和器官分化。
培养基中同时添加生长素和细胞分裂素时，细胞脱分化后器官分化频率提高。
2）二者的浓度比值决定器官分化方向：
生长素/细胞分裂素比值高时，有利于根分化，抑制芽形成。
反之，有利于芽分化，抑制根形成。
二者浓度比值适中时，促进愈伤组织的形成和生长。
3）有mg/L和mol/L可以选择。
母液通常用1～10mmol/L或0.1～1.0mg/mL
8.培养基的配制程序？
培养基配制的具体操作步骤？
1）取出母液按顺序放好，将有机营养物质母液溶解待用。
2）取一只烧杯放入三分之一左右蒸馏水，将母液按顺序加入。
3）加入植物生长调节剂和蔗糖，待糖溶解后定容。
4）将定容的培养基倒入容器中，称重并记住重量。
加入琼脂并加热使之溶解。
5）调PH6）分装培养基。
7）灭菌8）灭菌后待高压蒸汽灭菌锅压力下降为0时，打开并取出培养基。
9.已经污染的培养器皿如何清洗？
已经被污染的培养器皿必须先经过121℃高压蒸汽灭菌后，倒出污物，再浸入洗涤液中刷洗。
10.植物组织培养中污染的病原类型？
污染产生的原因？
防污染措施？
多为污染的来源.植物组培污染主要是霉菌、细菌和酵母菌引起的污染
产生原因：
外植体①年龄、种类和大小。
成年植株带菌多；
生理年龄老的材料带菌多②取材时期和部位。
雨季菌类繁殖旺盛，此时材料带菌多③灭菌效果。
外植体灭菌是组织培养的关键。
①培养基。
使用长菌的母液配制培养基；
②培养容器和接种器具。
培养容器不清洁③接种人员。
过长指甲；
双手未清洗干净；
衣服和头发有很多灰尘，接种时不换拖鞋、接种服、帽子和口罩。
④接种室和培养室。
人员的进出导致接种室和培养室空气中存在大量细菌和真菌
选取幼年植株或生理年龄为幼态的材料，选择合适的灭菌剂的选择，选择合适的灭菌方法，培养容器清洗干净后储存好，接种人员做好相应准备。
11.外植体的表面灭菌方法？
常用化学消毒剂的种类及浓度？
1）从田间取回的材料用自来水冲洗10min，洗去泥土等，剪去残伤部分，再用自来水冲洗数次，剪成小段放入烧杯中。
2）灭菌剂配制，（氯化汞）
3）材料灭菌：
把经过前处理的材料放入70%酒精中30-60s进行表面消毒。
取出后立即放入氯化汞中数分钟后再放入无菌水冲洗3-5次。
然后进行切割和接种。
4）常用的消毒剂：
70%究酒精，2%次氯酸钠，0.1%-1%氯化汞。
12.影响外植体消毒效果的因素？
影响外植体消毒效果的因素：
①消毒剂种类
②消毒剂使用浓度
③消毒处理时间
13.操作人员无菌操作前需要做哪些准备工作？
1.实验前20min将紫外灯打开，打开金属器械消毒器，实验时关闭紫外灯，2.用酒精喷壶对超净工作台消毒，对实验员的手和小臂也进行消毒。
3将镊子，手术刀等消毒，灭菌。
14.离体培养条件下，细胞脱分化的结果?
15.离体培养中再生植株的主要途径?
1、器官发生途径
2、胚胎发生途径
16.愈伤组织形成过程的三个阶段？
诱导期，分裂期，分化期。
17.愈伤组织生长的驯化现象?
延长培养期可使愈伤组织对生长素的需求发生变化，导致生长素的自给和自养——驯化现象。
18.愈伤组织质地及其与激素的关系？
愈伤组织分化方向？
有松脆和致密两种，高浓度生长素——松脆；
高细胞分裂素——致密。
19.植物离体培养中器官分化的两种类型？
分为器官型和器官发生型。
前者直接由外植体的细胞形成器官原基，继而发育为器官；
后者外植体先形成愈伤组织，再形成器官原基，继而发育为器官。
20.体细胞胚胎发生的途径？
直接途径：
外植体某些部位的胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎。
间接途径：
指外植体先脱分化成愈伤组织，再分化出体细胞胚胎。
（多数途径）
21.植物器官培养类型？
营养器官和繁殖器官。
22.离体根培养的应用？
植物根培养的外植体及其培养方式？
研究根系生理代谢，器官发生，形态建成。
实现根次生代谢产物及药物的工厂化。
多用于：
草本植物。
外植体：
无菌种子萌发产生的幼根，或植株根系经消毒后的切段。
培养方式：
1.固体培养法2.液体培养法3.固液双层培养法。
23.带芽茎段培养可能获得的产物？
影响带芽茎段进行芽增殖的主要影响因素？
1.单苗2.丛生苗3.完整植株4.愈伤组织。
植物材料：
枝条上芽所着生的位置不同，离体培养效果差异较大。
茎顶部的切段好于茎基部切段，顶芽好于侧芽。
植物生长调节剂：
若茎段培养目的是芽增殖，培养基中需加入适量的细胞分裂素，少加或不加生长素。
若茎段培养目的是诱导愈伤组织，培养基中需加入适量生长素，少加或不加细胞分裂素。
24.茎尖组织经离体培养后，可能的发育方向？
茎尖组织经过适当培养后，可能发育的方向为：
芽萌发、产生胚状体、产生不定器官、形成愈伤组织。
25.茎尖离体培养后，可能出现的反应及其发生原因？
离体培养茎尖可能出现的生长状态及其原因：
生长太慢，即茎尖无明显增大，颜色逐渐转绿，最终形成绿色小点。
可能原因是进入休眠状态，或是生长素浓度偏低，或培养温度低。
生长过旺，即茎尖明显增大，基部产生愈伤组织，茎尖不伸长，色泽较淡。
可能原因是生长素浓度偏高，或使用了2,4-D，或光照太弱、温度过高。
生长正常，即茎尖逐渐转绿，基部逐渐膨大，有时可见少量愈伤组织，茎尖逐渐伸长，最终形成小枝条。
26.植物离体快繁的器官形成方式有哪些？
各有何特点？
（一）短枝发生型：
一次成苗，遗传性状稳定，培养过程简单，移栽成活率高。
（二）丛生芽发生型：
不经过愈伤组织，能使无性系后代保持原品种的特性。
（三）不定芽发生型：
增值率高于丛生芽发生型，但经过愈伤组织途径或多次继代培养后，易导致细胞分裂不正常，增加变异植株发生频率。
（四）胚状体发生型：
成苗数量大，速度快，结构完整的特点。
（五）原球茎发生型：
是兰科植物的一种快繁方式
27.短枝发生型、丛生芽发生型、不定芽发生型的植物离体快繁程序?
28.无菌外植体的获得程序?
29.无菌外植体启动生长的方式？
最适合离体快繁的方式？
腋芽被刺激后进行生长（最适合）
外植体的切口处产生不定芽
外植体切口处产生愈伤组织
30.外植体启动生长培养基中最重要的成分？
生长素和细胞分裂素浓度最重要；
诱导不定芽形成时，需较高浓度的细胞分裂素；
诱导愈伤组织形成，需增加生长素的浓度，并补充一定浓度的细胞分裂素。
31.筛选有利于不定芽分化形成和生长的培养基的筛选重点？
诱导不定芽形成时，需较高浓度的细胞分裂素
32.初代培养物继代增殖培养时，繁殖体类型有哪些？
如何进行繁殖体的切割？
1对阶段Ⅰ初代培养物进行增殖，使之不断分化产生新的完整植株、丛生芽、不定芽、原球茎或胚状体。
2将初代培养物上获得的带有2～4个茎节的芽苗切割成单节茎段。
单节茎段可以垂直插入培养基中（茎节不能插入培养基），也可以平放于培养基表面。
如果初代培养物为丛生芽，应将丛生芽切分成单芽，同时切除芽周围的叶片，并在芽基部向上约0.5cm~1.0cm处切除叶片，然后将其接种于增殖培养基。
32.试管内诱导根分化的技术关键？
1.调节激素种类和浓度。
2.调节基本培养基的营养组成。
需降低无机盐浓度（通常只是降低大量元素化合物用量）3.调节渗透压。
34.试管苗移栽后如何进行驯化式管理以提高试管苗成活率？
（1）原则：
逐步过度，逐渐适应。
（2）驯化步骤：
⑴日光锻炼------晒苗
⑵湿度锻炼------试管内外气体交换
⑶驯化操作——炼苗：
出管前一周，在移栽温室中打开瓶口，逐渐提高光照强度和降低空气相对湿度，使试管苗逐渐适应外界环境。
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