狂犬病毒致病机理基于灭活与减毒疫苗免疫的发觉.docx

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狂犬病毒致病机理基于灭活与减毒疫苗免疫的发觉

（此文是一篇专业论文的全文翻译，本来是作内部参考用，但因很多网友关心这方面的问题，而在网上对相关问题常有过时或错谋的观点流传，所以在此全文发布，供感兴趣的网友参考。

因主如果供本专业人员阅读的文献，对其他专业或一般读者，其中有些内容可能不易理解，可先只看摘要。

咱们以后争取能有时刻作一些简化的解读。

）

摘要

虽然狂犬病疫苗的应用已经有一个多世纪的历史，可是狂犬病疫苗通过免疫接种或天然感染后引发机体免疫应答的具体机制仍不太清楚。

本研究通过减少灭活和减毒活疫苗剂量，别离采用常规、提前或延迟的处治方案来比较所产生的不同保护效果。

别离对2月龄叙利亚地鼠、4周龄］CR小鼠或成年獗猴接种犬狂犬病毒（RV）变种。

在暴露后6小时、1、2、3、4、5、6和7天开始处治。

应用单剂或多剂灭活疫苗（HDCV）、反向遗传技术构建的减毒活疫苗或丫射线灭活的ERAG333疫苗进行肌肉接种。

对病毒在这些啮齿类动物模型中的传播动力学进行监测。

结果发觉，RV在感染4天后播散到脊髓，6天抵达脑部。

在暴露后迟至5—6天才接种ERAG333活疫苗的地鼠全数死亡。

而在6小时、1、2、3和4天别离接种一个剂量的ERAG333活疫苗的存活率别离是78%,44%,56%,22%和22%。

与此相似，在暴露后24小时接种灭活ERAG333疫苗，地鼠存活率是67%O若是标准预防方案一一埃森（Essen）方案推延3-6天才执行，则所有的地鼠全数死亡，而暴露后1-2天即开始进行预防的地鼠的存活率别离是67%和33%。

徹猴在暴露后24小时接种一剂减毒的ERAG333疫苗即可取得保护力。

即便预防延迟，高度减毒（活的）和灭活的ERAG333疫苗也可诱导强有力的保护性免疫反映。

依照埃森方案，采用2-5剂商品疫苗和人狂犬病免疫球蛋白（HRIG）进行预防，实验动物的存活率可达89-100%。

经缩减的疫苗接种程序仍能够提供有效的预防，接种疫苗的剂量总数不影响结杲。

1.引言

狂犬病一旦发病就会致命，可是若是能够及早采取适当的暴露后预防

（PEP）,完全能够避免疾病发生。

到目前为止，尚未单独的任何一种药物具有特异性的医治效杲，可是联合采用不同生物制剂的医治方案可发挥协同作用，已成功地应用于实验性医治。

目前，PEP仍是在暴露后唯一有效的预防人类狂犬病的方式。

现代的PEP主要包括被动免疫和主动免疫，被动免疫是初期输入针对狂犬病毒（RV）的中和性抗体，这些抗体是由病毒的有效成份刺激产生的；而经诱导产生的主动免疫则可进一步清除外周组织的病毒。

在接种的疫苗能产生主动免疫应答之前，被动输入免疫球蛋白所提供的病毒中和抗体（VNAs）能够填补机体抵抗力暂时的空缺，这是PEP的一个重要组成部份，专门是对于严峻的暴露。

以往的实验表明，体液免疫对清除外周RV作用专门大，而细胞免疫应答则作用有限。

PEP—方面能够快速诱导免疫应答，还能够使机体产生持续的免疫记忆，这是PEP的另一个重要作用。

在过去的一个世纪中，狂犬病疫苗生产所用的基质、减毒和灭活的水平和方式，和接种途径都发生了庞大转变。

同时，由于疫苗免疫原性、有效性和安全性的提高，PEP经肌肉途径接种疫苗的剂量从原来的21剂以上逐渐减少到此刻的4剂。

关于未来的疫苗产品，亚单位、DNA和重组活疫苗都正处在实验评估阶段。

虽然狂犬病生物制品的生产在全世界已取得改良,对狂犬疫苗的免疫原性和有效性的熟悉也在不断进步，但其实际应用仍受到经济和技术的制约。

在21世纪，某些国家仍在生产神经组织疫苗，并用作暴露于疯动物后唯一的预防手腕。

而且，虽然针对狂犬病的成功的疫苗接种已有一个多世纪的历史，但在自然感染或接种灭活或减毒活疫苗所引发初期的细胞和体液免疫的分于机制仍不清楚。

本研究目的是在不同动物模型中，对各类灭活和减毒狂犬病疫苗及PEP程序的预防效杲迸行实验比较。

2.材料与方式

•动物与病毒

2月龄雌性叙利亚地鼠（金仓鼠）、4周龄雌性1CR小鼠，在实验前至少观察72小时。

1岁龄雌性猱猴，实验前至少经2个月检疫。

为了便于对比，选用两种不同的犬街毒株作为解决毒株。

其中一株滴度为10次方）MlCLD5（）/5（）m,分离自德克萨斯州一只自然感染狗的唾液腺；另一株滴度为10（2次方）\IICLD5（）/5（）M，分离自墨西哥一只自然感染狗的唾液腺。

所有的实验动物的处置及实验程序都是符合疾病预防与控制中心关于动物管理和操作委员会的指导方针。

•生物制品

对于啮齿类动物，按如实验设计方案一次性接种最低效价为1匕/凶的50卩1

（非人灵长类动物1ml）HDCV,Imovax®（sanofipastcur）或50讪纯化的鸡胚疫苗（PCEC）,Rabavcrt（Novartis）<>一样地，对于啮齿类动物，按照PEP的原则，在相应部位肌肉注射5（加1未经稀释的HR1G,HypcrRablmS/D（TalccrisBiothcrapcutics,15（）］C/ml）或lrru）gam®Rabics-HT（sanofipastcur,150lU/ml）。

减毒疫苗ERAG333（通过定点突变的方式将病毒G蛋白333位点的精氨酸突变成谷氨酸）和ERA2G333（含有两个G基因，333位点都突变）通过反向遗传系统构建。

ERAG333株显示出高度的安全性，对3周龄的成年小鼠及其他目标或非目标物种均无致病性，乃至经颅内注射也是如此。

经Y射线灭活的

ERAG333株，将灭活病毒样品在鼠神经瘤细胞（MNA）中持续传3代以验证完全灭活的病毒。

将减毒或灭活的已RAG333株5（以1（10（9次方）TOP50/ml）肌肉接种于仓鼠或小鼠右腓肠肌或接种1心于狒猴三角肌（10（9次方）TCID5（）/ml）。

•实验方式

2.3.1.直接荧光抗体实验（DFA）

采用异硫氟酸荧光素标记的单克隆抗体检测脑组织样本中的狂犬病毒抗原。

2.3.2.逆转录聚合酶链反映（RT-PCR）及半嵌真式RT-PCR（hnRT-PCR）

采用RT-PCR和hnRT-PCR方式追踪检测RV从地鼠的接种部位抵达脑部的进程。

收集腰部、胸部脊髓及脑部切片组织，应用无菌技术以避免交叉污染，依照TRlzolReagent（Invitrogcn）说明书进行操作提取组织总RNA。

逆转录的引物为l（）66hv（5'GAGAGAAGATTCTTCAGGGA），引物按照RVPV株基因组（登录号M13215）1136m-1155nt处的序列设计，反映条件为42°C90min。

第一次PCR采用引物1066&和3（）4rv（3‘TTGACAAAGATCTTGCTCAT5'）扩増病毒基因组从304nt-1066111的一段序列。

另设计两条引物通过hnRT-PCR检测微量的病毒RNA:

（a）1087&（5‘GAGAARGAACTTCARGA3',1087-1104）和3（）4rv;（b）504s&（5'TCATGATGAATGGAGGT3',504-521）和304rve两次PCR反映条件一致:

94＜预变性1min,40个循环:

方式检测扩增片段大小，然后通过序列分析鉴定病毒。

2.3.3.快速荧光灶抑制实验（RFF1T）

采用RFFIT方式利用CVS-11作为解决毒株检测病毒中和抗体（VNA）。

2.3.4.统计学分析

统计并绘制Kaplan-Meier生存曲线（SAS,采历时序査验法（log-raiikWst）分析各个实验组的生存量不同。

同一生存函数的査验假设在PV时被否定。

•应用灭活的商用HDCV和减毒活疫苗ERAG333或ERA2G333对地鼠迸行PEP

2.4.1利用分离于德克萨斯狗的RV进行解决实验

将分离于德克萨斯狗的RV（10次方）MICLD5（）/5（加1）肌肉接种于2月龄雌性叙利亚地鼠（6只/组）左腓肠肌。

实验动物按照不同的PEP方案被分为若干组，每只地鼠经左腓肠肌注射5（肚1灭活的HDCV或减毒疫苗ERAG333或ERA2G333。

接种HDCV的实验组，于0,3,7,14和28天各接种一剂（同时注射或不注射HIUG）;接种减毒活疫苗已RAG333或ERA2G333的实验组，每只动物只接种一次，别离于暴露后1、3、5或7天；对照组6只地鼠不做任何处置，发病后于1-6天执行安乐死并检测病毒的播散情形。

2.4.2.利用分离于墨西哥狗RV迸行解决实验

将2月龄雌性叙利亚地鼠分为13组（9只/组），每只地鼠经左腓肠肌注射50pil（10（2次方）MICLD5O/5OM）分离于墨西哥的狗然后，应用减毒的ERAG333疫苗在6小时、24小时和2、3、4、5、6天对地鼠进行PEP,每只地鼠只免疫一次。

埃森方案规定于暴露后（）、3、7、14和28天各接种一剂

HDCV疫苗或同时注射HRlGo对照组9只地鼠不做任何处置，发病后于1-6天执行安乐死并检测病毒的播散情形。

搜集各个实验组动物腰部、胸部脊髓和脑组织并用hiiRT-PCR检测病毒RNA。

同时，每日观察动物情形，持续观察4个月，并对发病动物执行安乐死,做好记录。

.应用减毒和灭活的ERAG333疫苗对地鼠进行PEP

将2月龄雌性地鼠分为5组（6只/组），每只地鼠经左腓肠肌注射5（加1（10（2次方）MICLD5O/5Opd）分离于墨西哥狗的RVo然后，应用减毒或灭活的ERAG333疫苗在24小时和3天对地鼠进行PEP,每只地鼠只免疫一次。

每日观察动物情形，持续观察2个月，并对发病动物执行安乐死，做好记录。

•应用灭活的细胞培育疫苗或减毒的ERAG333疫苗对殊猴进行PEP

将成年雌性獄猴分为3组（3只/组），每只獗猴经咀嚼肌注射滴度为10（2次方）MICLD5O/5（加】分离于墨西哥狗的RVo24小时后，第一组于三角肌接种1mlHDCV（按照埃森方案于0,3,7,14和28天各一剂，不包括HRIG）;第二组于三角肌接种一次lml减毒ERAG333疫苗（10（9次方）TCID50/ml）（于3,7,14和28天在三角肌接种lmlPBS）;第三组只在0,3,7,14和28天于三角肌接种1ml的PES。

所有动物在第1个月每周采一次血检测VNA,1个月后继续每日至少观察动物两次，持续观察3个月，并对发病动物执行安乐死，做好记录。

.在地鼠模型中检测初期和延迟进行标准PEP（5剂疫苗）的有效性

将地鼠分为6组（3只/组），每只地鼠经左腓肠肌注射5（口滴度为10次方）MICLP5O/5Oli1分离于德克萨斯狗的RV。

按照埃森方案，应用灭活的疫苗

（PCEC）和免疫球蛋白于1、2、3、4、5和6天迸行PEP,对照组不进行任何处置。

每日观察动物情形，持续观察3个月，并对发病动物执行安乐死，做好记录。

.在地鼠模型或ICR小鼠中检测不同剂量疫苗PEP的有效性

将两月龄叙利亚地鼠或1CR小鼠分为8组（9-1（）只/组），每只小鼠经左腓肠肌注射50|il滴度为10（2次方）MICLr>5O/5ORl分离于墨西哥狗的RVO按照埃森方案，应用灭活的疫苗（HDCV）和HRIG于24小时进行PEP,第一组免疫5次（0,3,7,14和28天），第二组4次（0,3,7,和14天），第三组3次（0,3,和7天），第四组2次（（）和3天），第五组1次（（）天）。

每日观察动物情形，持续观察2个月，并对发病动物执行安乐死，做好记录。

3.结果

.应用灭活的商用HDCV和减毒ERAG333或ERA2G333疫苗对地鼠迸行

PEP

3.1.1利用分离于德克萨斯的狗RV进行解决实验

对照组的动物和仅接种灭活HDCV的地鼠全数发病，与何时开始PEP无关。

在经1M5天的暗藏期出现狂犬病症状后执行安乐死，检测发觉：

病毒于第4天播散到实验动物的腰部脊髓,第6天抵达脑部。

于第7天接种减毒疫苗ERAG333和第5或7天接种减毒疫苗ERA2G333的地鼠全数死亡。

但是，暴露后第1或3天接种1个剂量减毒疫苗ERA2G333的地鼠存活率为50%。

与此类似，暴露后第5、3、1天接种减毒疫苗ERAG333的实验组中别离有17%、33%和83%的地鼠存活。

在对照组与接种HDCV、ERAG333或ERA2G333疫苗的实验组之间,病毒的暗藏期无不同。

3.12利用分离于墨西哥狗的RV进行解决实验

仅接种HDCV或感染后第5或6天只接种减毒疫苗ERAG333的地鼠全数死亡。

但是，暴露后第6小时、1、2、3或4天接种一剂减毒疫苗ERAG333的地鼠存活率别离为78%（7/9）、44%（4/9）、56%（5/9）、22%（2/9）和22%

（2/9）。

通过比较发觉，按照标准PEP方案进行预防或仅注射HR1G的动物有44%（4/9）存活。

对照组（只用病毒解决，没有采取PEP）中仅有一只地鼠存活（1/6）,检测发觉病毒于暴露后第4天播散到动物的腰部脊髓，第6天抵达脑部。

•应用减毒或经、/射线灭活的ERAG333疫苗对地鼠进行PEP

在暴露后24小时接种减毒ERAG333株的地鼠全数存活（6/6）;于暴露后第3天接种一剂相同疫苗的只有50%存活。

在暴露后24小时接种灭活ERAG333株的地鼠有4只存活（4/6）,存活率为67%;于暴露后第3天接种相同灭活疫苗的存活率只有20%（1/5）o仅接种PBS的对照组中，地鼠存活率为33%（2/6）。

•应用灭活的细胞培育疫苗或减毒的ERAG333疫苗对殊猴迸行PEP

实验前，在本组实验动物中未检出VNAs。

对照组发病动物执行安乐身后，采用DFA均在脑部组织检测到RV抗原。

接种5剂HDCV（没有接种HRIG）的实验组有2只徹猴存活（2/3）。

而暴露后24小时仅接种一剂减毒ERAG333疫苗的徹猴全数存活。

两个疫苗免疫组中动物的VNA水平相差无几，在14-28天抵达顶峰，并逐渐降低直至免疫后第90天。

.在地鼠模型中检测初期和延迟标准PEP（5剂剂量）的有效性

于第3、4、5和6天开始进行灭活疫苗（PCEC）加免疫球蛋白的PEP实验组中，所有的地鼠都死于狂犬病，而暴露后第1和2天进行PEP的实验组存活率别离为67%和33%。

在地鼠和小鼠模型中检测不同剂量疫苗进行标准PEP的有效性

在对照组中（PES处置），78%（7/9）的地鼠死于狂犬病；依照埃森方案接种5剂HDCV疫苗（没有接种HR1G）的实验组中，有89%（8/9）的地鼠死亡。

而按照修订的埃森方案接种1、2、3、4和5剂疫苗和HR1G的实验组中，地鼠的存活率别离为67%（6/9）,89%（8/9）,78%（7/9）,100%（9/9）,78%（7/9）和78%0/9）。

与此类似，在接种1,2,3和4剂HDCV疫苗和HR1G的小鼠实验组中，其存活率别离为80%（8/10）,90%（9/10）,90%（9/10）和70%（7/10）。

对照组动物全数死亡。

4.讨论与结论

暴露于某个特定RV后的结果与该RV的基因型或是不是存在变异体,和其致病性（致凋亡力、神经侵袭性）、病毒的感染剂量、感染途径和严峻程度、宿主种类及其对病毒的易感性等都有必然的关系。

这些因素与宿主的固有和适应性免疫应答一路决定着病毒感染的最终结杲。

PEP的目的是快速刺激宿主免疫应答，并介导宿主在初期对病毒的中和和清除。

不同的免疫方式能够刺激固有或适应性免疫应答的不同分支部份。

由于中枢和外周神经系统具有免疫学方面的某些特权而且对初期的病毒识别能力有限，所之外周非神经组织中的病毒中和作用在清除RV的迸程中起到超级重要的作用，也是PEP成功的关键。

致病性的RV通过限制复制水平从而降低糖蛋白的表达、抑制干扰素反映、抗细胞凋亡刺激和单一的沿神经传播方式等特别机制来逃避外周免疫系统的初期识别。

病毒颗粒一旦进入外周神经系统就开始向中枢神经系统（CNS）传播，该病的致命性后杲就不可避免。

鉴于RV病理学的特殊性，越早开始合理的PEP,医治的效杲越好。

但是，病毒的暗藏期尺从感染到成功进行PEP的距离时刻是不同的，取决于RV的基因型/是不是存在变异体、尺其对特定宿主的致病性、病毒的感染量、感染的途径及严峻程度。

在啮齿动物模型中发觉，病毒可能进入肌肉细胞并在入侵部位增殖，或直接进入外周神经而不预先在非神经组织增殖。

大量研究表明，RV第一侵入外周神经元的运动和/或感觉神经的轴突并沿轴突以5（）-2（X）mm/天的速度逆行至CNS。

咱们研究发觉，两种不同RV变异株在地鼠模型中的逆行传播速度为15-30mm/天。

若是病毒只是“被动地”传播，仅依赖于沿轴突转运固有的速度，那么不同的宿主种类和其他实验因素的不同能够用来解释当前的发觉与以往研究结果的不同。

RV侵入外周和CNS后不断地适应和逃避免疫系统的反映，尽可能增进自身的存活。

病毒在不同的宿主内具有不同的致病性，所引发的免疫应答强度也存在不同。

一旦RV侵入神经元，便有可能发生经典的中和作用，但发生的槪率很小。

初期的PEP利用免疫球蛋白，并用灭活的疫苗诱导体液免疫，随后可中和外周非神经组织中的病毒，这是在发病前清除病毒的主要机制。

若是缺失TE细胞和T细胞，或仅缺失E细胞，小鼠在经罠感染减毒的CVS-F3RV后会进展成为迸行性疾病并死于狂犬病。

但是将缺失了CD8+T细胞、1FN受体或补体C3和C4的小鼠与相应功能正常的小鼠进行比较，结果存活率无显普不同，这表明细胞免疫在清除RV迸程中起到的作用较小。

其他研究也显示，免疫功能正常的小鼠，而不是E细胞有缺点或缺失了IFZ-1、TLR或］J1受体信号通路的小鼠，在经颅内感染致病性的0（）04RV和减毒SPBAAN-GAS-GAS-GASRV的混合物后，仍然能够存活。

目前，所有人用细胞培育商品疫苗都是基于灭活的RV。

疫苗中的病毒抗原能够激活CD4+辅助性T细胞反映，随后通过MHC-1I机制（主要针对病毒糖蛋白）激活E细胞体液反映，产生VNA。

正如在咱们的“严峻暴露”实验中所显示的，暴露后被动和主动免疫的时刻超级关键，延迟PEP开始时刻将会增加疾病的死亡率，若是推延3天乃至更晩才迸行预防接种，可能会完全没有保护作用。

显然，暴露后尺早开始PEP是成功的关键。

咱们的结杲表明，被动免疫和VZAs在病毒的清除进程中超级重要：

初期开始的PEP即便接种了5剂灭活疫苗，解决后的动物仍全数死亡。

相反，若是PEP只包括HRIG,或包括HRIG加灭活疫苗，则6（）%-1（）（）%的实验动物存活。

灭活疫苗能够激活B细胞并通过MHC-II机制激活CD4+T细胞，而重组ONA和减毒活疫苗除能够激活CD4+T细胞和E细胞外，还能够激活CD8+细胞毒T细胞。

后者在狂犬病PEP中的作用尚未取得充分研究。

在啮齿类和非人灵长类动物模型中，与接种灭活商品疫苗相较，仅接种一剂减毒ERAG333疫苗在引发体液免疫反映的效果上并无不同（前7天检测不到VNAs）,这说明细胞免疫、趋化因于、细胞因于和固有免疫在外周非神经组织的狂犬病毒清除中具有重要作用。

咱们发觉减毒活疫苗能够有效地保护感染的动物，即即是在暴露后3-5天仅接种一剂疫苗，现在已经能够在动物的腰部和胸部脊髓检测到病毒RNA,这进一步表明存在能够从神经系统清除RV的机制。

咱们的结论是，高度减毒的活疫苗比灭活疫苗能诱导在质或量方面都不同的更强的免疫反映，即即是在PEP延迟开始和病毒已经在部份神经系统中散布的情形下,也能够提供保护。

一个类似的报导显示，在小鼠模型中，采用致病性的OOG4RV

进行解决后4、16、24、48和72小时再肌肉注射减毒活疫苗SPBAAN-GAS-GAS-GAS,小鼠的存活率别离为100%,、9（）%、55%、40%和3（）%。

咱们推测在CNS中已存在致病性的RV,因为实验中观察到于暴露后4小时或更晚给予PEP的小鼠中，有50%-90%岀现暂时性后肢麻痹，而未感染、仅接种了疫苗的小鼠无任何临床转变。

在免疫功能正常的小鼠中经颅内接种致病的和活的减毒狂犬病疫苗的混合物后，观察到1（）0%的生存率。

咱们并未详细研究后来在外周神经组织中清除RV的具体机制，但咱们推测细胞介导的免疫应答联同血液-神经间屏障的改变对整个结果具有重要影响。

血脑屏障（BBB）和CNS内的免疫应答的作用以前已有详述，可是关于血脑屏障的通透性及其协助CNS在发生可检测到的脑炎之前清除病毒的准确机制目前尚不清楚。

外周神经系统的神经内膜距离由结缔组织、内皮细胞和神经内膜血管组成，被血液-神经屏障所分隔。

虽然这些内皮细胞并非像脑部血管内皮细胞那样紧密连接，但他们在将外周神经与血浆组分分隔开的能力方面仅次于CNS。

有趣的是，最近在脊髓根处，最远在运动神经终板处，其间的屏障效杲要差一些。

而且，已知T细胞常常是先移行至分隔的免疫特权器官，例如脑和外周神经，在此短暂停留，监控各类组织，然后返回至血液循环。

这些研究能为中和作用和从外周神经中清除RV提供部份解释。

许多病毒的中和和从CNS的清除都需要QD4+和CD8+T细胞的协同作用,其中CD8+T细胞直接提供穿孔素和3FN-Y介导的抗病毒活性。

以往已有研究部份地证明，减毒活疫苗激活的免疫应答可中和RV,即便病毒已经在有限程度上进入CNS（经肌肉进行解决后再脑内免疫接种）。

咱们的研究也发觉，接种一

剂减毒的ERAG333就可以够激活免疫应答，增进清除已侵入腰部和胸部脊髄的

RVo但是，若是在暴露后6天才接种减毒活疫苗ERAG333,现在RV已经复制并播散到脑部，该疫苗就不能足够快速地激活有效的免疫应答。

虽然将RV从CNS中清除也可能发生，但咱们的实验明确显示，当RV在CNS增殖和播散超过必然阈值，无论是什么程度或是何等强烈的免疫应答，都不能完全中和和清除病毒，并同时能维持神经细胞的完整性和保证宿主的存活。

到目前为止，所有的实验医治临床狂犬病的尝试方式包括鞘膜内注射特异性2G、输入细胞因于或趋化因于、接种减毒的SAG2减毒活疫苗和利用各类抗病毒药物，或联合应用这些方式，结果除一例外，全都失败了。

总结：

与其他报导不同，在暴露后24小时内接种经丫射线灭活的ERAG333疫苗也能够诱导免疫应答，并保护大部份（60%）的实验动物。

这说明复制并非是诱导上述免疫应答所绝对必需的。

减毒的病毒疫苗诱导相关免疫反映的潜力及其从CNS中清除RV的能力还需要在完善的动物模型中进一步研究。

在动物PEP中，虽然接种了5剂灭活的商用疫苗，但没有同时注射免疫球蛋白，结果发觉如此并非能保护感染的实验动物对抗严峻的实验性病毒解决；而联合注射免疫球蛋白和2-5剂疫苗（若是在暴露后很早就开始）就可以够提供有效的保护，没必要誇虑利用的疫苗剂量的绝对数量。

在獗猴模型中,PEP采用灭活疫苗而不同时注射免疫球蛋白，结果出乎预料,除一只徹猴外其他的都存活下来。

这说明，物种特异的彼此作用（天然的敏感性/抵抗力）在专门大程度上决定于RV的致病性和宿主的免疫反映。

在很多迸展中国家都存在免疫球蛋白欠缺，于是常常采用仅利用疫苗的PEP方案，这可能会致使死亡率增加，尤其是对于那些头部严峻暴露的病例。

与其它研究不同的是，在咱们的只接种疫苗的实验中，未观察到明显的“早死”现象。

这可能与所选择的RV毒株、距离时刻和其他因素有关。

迄今为止，虽然在狂犬病疫苗和RV致病性的研究方面取得了专门大进展，可是狂犬病的症状一旦出现仍无法医治。

所以，当前的应用研究和公共卫生政策应该着重增