病理科工作流程.ppt

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病理科常规技术室工作流程及日常工作质量控制,2016年8月30日,病理科工作流程,接受标本（编号、登记）固定标本取材、记录脱水常规制片（包特殊染色埋、切片、染色）免疫组化|归档,目录,一、组织脱水、透明、浸蜡二、全密闭程序控制自动组织脱水机三、组织包埋制作技术四、石蜡组织切片制作技术五、苏木素-伊红染色技术六、程序控制的自动组织切片染色机七、全自动组织玻片封片机,一、组织脱水、透明、浸蜡,组织脱水1.脱水的目的和原则：

组织经固定后，含有大量水分，组织在透明浸蜡前必须进行脱水，就是用某些溶剂将组织内的水分逐渐置换出来，以利于透明剂和石蜡的渗入，这个过程称为脱水。

原则1.脱干净但又不过脱水；2.脱水剂自低浓度至高浓度进行。

2.常用脱水剂：

乙醇、丙酮3.常用脱水顺序是：

70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、无水乙醇。

一、组织脱水、透明、浸蜡,组织透明1.透明的目的和原则：

组织脱水后必须经过一种既能与乙醇相结合，又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用石蜡进入组织。

这种溶剂使组织呈现出不同程度的透明状态，这个过程称为透明。

2.常用透明剂：

二甲苯教材：

在进入二甲苯透明前，需要先经过无水乙醇和二甲苯的混合液30min。

二甲苯和二甲苯透明的总共试剂必须控制在1.5h以内。

一、组织脱水、透明、浸蜡,组织浸蜡1.组织浸蜡的目的：

组织经过脱水、透明后用的石蜡、火胶棉、明胶等支持剂浸入组织内，使组织变硬并将组织包裹在内，有利于切片，这个过程称为浸蜡。

2.组织浸蜡的方法：

经数次石蜡浸泡（一般为34个步骤，每步5060min）置换出组织内的透明剂，使纯净的石蜡浸入组织内。

浸蜡用的石蜡熔点一般为5860。

3.浸蜡剂的种类：

石蜡（最广泛应用）、火胶棉、明胶,二、全密闭程序控制自动组织脱水机,1、全密闭式程序控制自动组织脱水机的结构控制面板、处理槽、石蜡箱、试剂柜等2、全密闭式程序控制自动组织脱水机的功能可设定密码、延时功能、小标本当日完成、加温功能、报警功能等3、全密闭式程序控制自动组织脱水机程序的设置,二、全密闭程序控制自动组织脱水机,二、全密闭程序控制自动组织脱水机,4、全密闭式程序控制自动组织脱水机液体的更换规律及原则理论上讲每次更换液体应该将脱水机内的液体全部更换。

（1）一般固定液每周更换一次。

若组织块较多（每天200300块），固定液没三天更换一次。

（2）脱水剂梯度酒精每周更换一次（150块/天，如果每天处理300块左右，应该3天更换一次乙醇）。

方法是将第2缸的80%乙醇倒弃，95%乙醇及无水乙醇依次迁移。

（3）透明二甲苯1015天更换一次，二甲苯第一缸倒弃，第二缸前移。

（4）石蜡必须干净无杂质。

建议15002000块将第一缸石蜡废弃。

二、全密闭程序控制自动组织脱水机,5、全密闭式程序控制自动组织脱水机液体的操作方法从取材室与取材医师完成标本核对后，将组织拿至脱水机，此刻脱水机界面如下图所示,1.确认清洗程序完成，打开处理槽盖。

2.擦净槽盖面及槽内水气，槽内残渣。

3.将脱水栏按顺序平稳放好，盖紧槽盖、确认锁定。

4.选择层数（level）、选择并确认使用的程序（ProgressSelect），立即开始（ImmediateStart）处理组织。

5.脱水程序处理完成，按（drainallchamber）将处理槽内的石蜡排空。

6.打开处理槽盖，取出脱水栏，将槽内残蜡擦拭干净。

7.盖好处理槽盖，按（flushstart）清洗，整个处理程序完成。

二、全密闭程序控制自动组织脱水机,备注：

1.如果脱水过程中，有需要继续添加的组织，选择LidRelease键，然后将盖子打开，将组织放入脱水机，然后按屏幕上Restart所对应的按键即可2.每次脱水完成前、后都应擦拭反应缸，脱水完成后，取出组织，应将组织篮放入反应缸中运行冲洗程序，以脱去反应缸及其组织篮中的石蜡以方便取材。

3.应定期检测石蜡液面，正常情况下每周检测一次，如一段时间内标本过多或者过少，可以适当减少或者增加检测周期，防止出现石蜡液面不够的情况。

4.脱水机需要定期擦拭保养，并填写设备维护保养记录。

三、组织包埋制作技术,包埋的定义：

组织块经过固定、脱水、透明剂（石蜡、火胶棉、树脂、塑料等）浸透，用包埋剂（石蜡、火胶棉、树脂、塑料等）包成块的过程称为包埋。

常用包埋方法：

石蜡包埋法、火胶棉包埋法、树脂包埋法、塑料包埋法、快速包埋法、液体标本包埋法组织包埋的发展及现状：

手工包埋、半自动组织包埋熔蜡器、全自动组织包埋、冷台一体机最常用的包埋石蜡熔点为5658、5860,三、组织包埋制作技术,全自动组织包埋、冷台一体机三大组成部分：

1.石蜡缸及出蜡口；2.左右储存槽（100120块）；3.工作台面以及镊子加热孔功能：

温度调节（6570）、时钟调节（24h）、工作时间设定（每周的工作日期）、开关机时间设定（610：

30）、冷台装置（0-15）、流量控制。

维护与保养：

选择质量好的切片石蜡，注意定期清理熔蜡储槽，并加入少许二甲苯清洗管道，以保证石蜡流出畅通，并在每日工作完成后清洗机器外貌。

散热孔要经常清理。

三、组织包埋制作技术,石蜡包埋法及质量控制1.包埋时要核对组织块与标本盒的标记是否一致（黄盒x几）。

2.严禁污染及交叉污染（随时纱布擦拭台面）。

3.根据组织的大小选择不同的包埋模具。

4.根据组织的不同结构层次、特点、标记面，包埋时应加以注意，如食管黏膜或标注立埋的则需要立（垂直）埋。

5.皮肤组织包埋时应将组织块45倾斜放入石蜡中包埋，2块及以上组织并列倾斜包埋。

6.食管黏膜、胃肠类黏膜视黏膜组织大小、长短、厚薄，或90垂直包埋，或卷曲包埋。

7.肾、肝、前列腺、乳腺等穿刺标本视组织大小，包埋时平整的放入石蜡中，轻轻按平，切片时才能切全，用力过重会使组织破碎，过轻会使组织包埋不平，切片不完整。

三、组织包埋制作技术,8.对宫颈112点锥切标本应按组织的内膜面至浆膜面成90放入石蜡中包埋。

9.内镜下进行的食管早期肿瘤微创手术切除的黏膜标本，要按照一个方向的切面或特殊标记进行包埋。

组织包埋应注意的问题：

1.包埋注意核对内容；2.防止组织污染随时清洁工作台面，加热包埋镊，注意脱水盖有无组织存留；3.灌蜡适量，不可过多或过少，防止多余蜡边形成；4.修蜡块及包埋机的维护及保养,四、石蜡组织切片制作技术,病理组织经取材、固定、脱水处理，用石蜡包埋后制作成蜡块，用切片机制作切片的过程称作为石蜡组织切片。

一般切片的厚度为35um。

捞片机内置蒸馏水，水温设置在45左右，有利于石蜡切片蜡带的铺平、伸展。

捞片位置要适当，组织面要放在载玻片下2/3的交界处，注意整齐美观。

切片机的保养及维护。

五、苏木精伊红染色技术,苏木精、伊红染色原理及配制方法实用现代病理学技术P63-65苏木精伊红染色的分化控制与返蓝一、分化的目的与控制：

分化就是用某些试剂（1%的盐酸酒精液）促使色素与组织解离，将细胞核中结合过多的染料、细胞质中吸附的染料及不需要着色的部位除掉，以利于伊红的染色。

不论使用手工控制或用机染控制，均要根据分化液的新鲜程度来决定分化时间。

（新鲜配制的时间短一些；苏木精染色时间久分化的时间要长一些。

）显微镜检测下控制分化，分化不可过度，适宜后迅速入自来水冲洗去除酸后中止分化。

五、苏木精伊红染色技术,二、返蓝的目的与控制：

苏木精染色后经1%盐酸酒精液分化；切片是在酸性环境中，这时颜色是红褐色。

切片进入弱碱性自来水冲洗或用返蓝液（0.5%氢氧化氨水溶液）在碱性环境中就会由红褐色变成蓝色。

三、分化液、返蓝液的配制：

1.分化液浓盐酸1ml，70%乙醇99ml。

2.返蓝液：

氢氧化氨0.5ml，蒸馏水99.5ml。

五、苏木精伊红染色技术,苏木精伊红染色手工操作程序及注意事项染色程序：

二甲苯（脱蜡）二甲苯（脱蜡）3min3min无水乙醇无水乙醇自来水冲洗苏木素1min1min3-5min自来水冲洗1%盐酸酒精分化自来水冲洗（去分3s左右5-10min化）伊红（醇溶）自来水冲洗85%乙醇（脱水）20s10s95%乙醇（脱水）无水乙醇（脱水）无水乙醇（脱水）10s1min1min二甲苯（透明）二甲苯（透明）二甲苯（脱蜡）1min1min1min,五、苏木精伊红染色技术,染色的注意事项：

1.脱蜡要彻底。

透明状，与温度、时间、二甲苯使用的时间及脱蜡片数有关。

2.二甲苯的容器要密闭，严禁液体外溢。

必须在通风橱柜中进行操作。

3.苏木精-伊红的染色时间应根据组织不同、固定液不同、固定时间、环境温度、染色液新旧、切片厚薄及染片数量来决定。

4.苏木精染色后不宜在水中停留时间过长，防止染色质变蓝后不易分化；伊红染色后水洗时间要短，否则易脱色。

整个过程要在显微镜下观察控制染色效果（理论）。

五、苏木精伊红染色技术,5.HE染色成败关键在于盐酸酒精分化及返蓝，一定要在镜下控制，严格掌握时间。

肉眼观察：

切片由原来的深蓝色变成红色至粉红色时即恰到好处，再冲水返蓝6.切片脱水时在低浓度酒精中的时间不宜过长，因其对伊红有分色及褪色作用。

7.在无水乙醇中脱水时间应稍长，保证最后一步酒精要纯，防止将水分带入二甲苯。

8.二甲苯后两步宜慢，以利于无水乙醇彻底脱净。

封片后若切片成云雾状，说明最后一步二甲苯不纯。

六、程序控制的自动组织切片染色机,徕卡-AUTOStainerXL型自动染色机一、结构与功能1.带有全透明的机盖，可随时观察染色机的工作情况；2.设有干燥加热装置。

对切片再一次烘烤，去除切片残余水分；切片带有热量进入二甲苯脱蜡速度快；能保持染色机内温度恒定，染色效果好。

3.带有多个试剂槽，可移动，可变换，密封效果好；4.具有装载、下载的通道；5.设有水洗缸，可进行水流控制；6.机械手臂可横向及纵向运动，带有抖动功能，幅度可调。

7.内置软件，精确的孵育时间；,六、程序控制的自动组织切片染色机,二、操作程序1.染色前检查染色缸中的染色液量是否充足，染色缸的位置排列是否正常，确认进水开关开启；2.打开主电源插座的电源开关及仪器的总开关；3.显示屏上显示出主菜单，按stain键，机械手移动到每个染色缸的部位进行自检，仪器进入工作状态；4.将装载切片的染色栏放入染色机，按load键；5.自动染色机对每一个染色架染色结束后，停留在退出位置，蜂鸣提示染色程序完成，按Exit键；6.染色程序全部结束后，关闭仪器电源，将染色机内的染色缸盖好。

六、程序控制的自动组织切片染色机,三、试剂质控1.建立档案详细记录每天的染色数量，及时更换液体。

（160-180张切片轮转脱水酒精，1400-1600张切片轮转脱蜡二甲苯及透明二甲苯，1400-1600张更换脱二甲苯的酒精、苏木素、盐酸酒精及伊红）2.苏木精染色液每天要过滤后使用。

（氧化膜）3.根据工作量，经常添加或更换脱蜡用二甲苯，切片从干燥加热后进入二甲苯，促使液体挥发快，造成液体的不足或含蜡过高，会造成脱蜡不干净。

4.保持液体的纯净度。

四、维护与保养,七、全自动组织玻片封片机,注意事项及维护保养：

1.在更换中性树胶后，及时进行封片前的测试；2.调节胶量的和适度，以保证封片后载玻片上的清洁；3.及时检查盖玻片的质量，去除不合格、质量差的盖玻片；4.封片前要仔细的将载玻片放置在篮筐架上，以保证封片质量；5.检查最后一个透明二甲苯的液位，保证载玻片在封片前处于湿润状态，以驱除气泡；6.定期清洁传送装置，保证传送装置上无中性树胶的污染。

制作人：

许艳华,谢谢,