抗生素类药物质量控制研究的热点问题和新进展doc.docx

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抗生素类药物质量控制研究的热点问题和新进展

抗生素类药品是临床中最常用的药品之一，在治疗感染性疾病方面发挥着极其重要的作用，其质量的优劣直接关系着该类药品在临床上使用的安全和有效。

近年来，为保证抗生素类药物安全性和有效性，对其质量有了更高的要求，本文对国内外药典中近年来抗生素类药物质量控制的新进展和热点分析做了一个简单的介绍。

一、抗生素类药物中的高分子杂质检查

抗生素类药物是较易发生不良反应的药物之一，临床中抗菌药物较常见的一类不良反应是药物所致的过敏反应，β—内酰胺类抗生素、氨基糖苷类及喹诺酮类抗菌药均可引发不同类型的过敏反应，但以β—内酰胺类抗生素最为严重。

多年的研究证明，β－内酰胺类抗生素的过敏反应并非药物本身所致，而是与药物中所含的微量高分子杂质有关。

我国科研人员经过深入研究，已从头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、头孢他啶等四种第三代头孢菌素中分离收集到了能引发动物过敏反应的基本无抗菌活性的高聚物，利用动物口服主动过敏反应模型，确证了引发青霉素V钾、阿莫西林等口服青霉素过敏反应的主要过敏原是它们的高分子聚合物，胃肠道吸收并不改变其过敏性，而头孢菌素和青霉素本身并不引发过敏反应。

由此证实，β—内酰胺类抗生素过敏反应与产品质量有关。

（一）高分子杂质的特性

高分子杂质是药品中分子量大于药物本身的杂质的总称，其分子量一般在1000～5000道尔顿，个别可至约10000道尔顿。

引起过敏反应的高分子杂质有外源性和内源性两种，外源性过敏原主要来自β-内酰胺类抗生素在生物合成中引入的蛋白多肽类和青霉噻唑蛋白。

内源性过敏原为β-内酰胺环开环自身聚合，生成具有致敏性的高分子聚合物，聚合物既可来自生产过程，又可在贮存过程中形成，甚至在用药时由于使用不当而产生，如阿莫西林干糖浆，当用开水冲服时，高分子杂质可增加100倍。

随着现代生产工艺的不断改进和提高，目前产品中的外源性杂质日趋减少，因此对内源性杂质聚合物的控制是当前抗生素类药物高分子杂质的重点。

高分子杂质的基本特性可概括为如下几个方面。

1.高分子杂质具有高度的不均一性和不确定性。

β-内酰胺类抗生素发酵中产生的任何蛋白碎片均可带入产品中，相同的蛋白或蛋白碎片上可以结合不同数目的药物分子，形成青霉噻唑多肽类杂质。

其结构如图1所示。

另外，青霉素、头孢菌素不仅能形成聚合度不同的聚合物，许多样品还能同时发生不同机制的聚合反应。

如氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟钠等侧链具有活性氨基的抗菌药，可同时发生仅与侧链有关的聚合反应和仅与母核有关的聚合反应（图2），进而形成不同结构的聚合物。

形成的聚合物结构很不稳定，可发生不同程度的降解作用，如末端β-内酰胺键的水解（图3），使得聚合物结构更为复杂。

对于有不同异构体存在的样品，同聚和异聚反应可同时发生。

如羧苄西林，有L和D型两种异构体，二聚体中发现有L－L、D－D、L－D三种聚合物（图4）。

2.高分子杂质的种类、数量与生产工艺密切相关。

如氨苄西林溶媒结晶工艺与喷雾干燥工艺所得样品中的高分子杂质在引发豚鼠被动皮肤过敏（passivecutaneousanaphylaxis，PCA）反应时具有不同的特异性，两者的二聚物的含量也明显不同。

3.聚合物均可以引发过敏反应，且聚合物的聚合度越高，引发过敏反应的能力越强。

动物实验已经证明，用各类β-内酰胺类药物蛋白结合物免疫动物，再用相应的聚合物作为多价半抗原进行攻击，均可引发速发型过敏反应：

如青霉素类抗菌药中的青霉素G钠（钾）、青霉素V钾、氨苄西林钠、阿莫西林、氟氯西林等；头孢菌素类的头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢哌酮钠和头孢他定等；酶抑制剂舒巴坦钠、克拉维酸钾。

过敏反应的能力与聚合物的聚合度是成正比的，以氨苄西林聚合物为例，其聚合反应如图5所示，利用离子交换色谱从氨苄西林钠溶液中分别分离出二聚、三聚、四聚和五聚体；再利用速发型过敏反应的动物模型－豚鼠PCA模型证明，五聚体引发过敏反应的能力最强，二聚体最弱；即聚合度越高，引发过敏反应的能力越强。

4.口服青霉素类聚合物仍可以引发过敏反应。

口服给药途径是否可以避免过敏反应的发生呢?

这主要由聚合物是否可经胃肠道被吸收，且经胃肠道吸收后聚合物的致敏性是否发生改变所决定。

有研究对临床中常用的口服青霉素制剂，青霉素V钾片、阿莫西林/克拉维酸钾片、氟氯西林胶囊及舒它西林片，利用建立的豚鼠口服主动过敏反应模型，对各类聚合物在口服给药过程中是否仍可引发过敏反应进行了评价。

HPLC分析表明，口服青霉素V聚合物，45min时豚鼠血清中可见聚合物。

说明聚合物可以经胃肠道被吸收。

豚鼠口服主动过敏反应结果表明，各类聚合物经胃肠道吸收后仍可引发过敏反应。

和静脉给药相比较，口服给药动物通常在给药后30～60min发生反应，而静脉给药动物通常在给药后的10min左右发生反应；对由阿莫西林/克拉维酸制剂致敏的动物，阿莫西林聚合物较克拉维酸聚合物具有更强的引发过敏反应的能力。

（二）高分子杂质的控制

近几十年来国内外对β－内酰胺抗生素中高分子聚合物的分离分析研究报道有许多，如用离子交换色谱法分离氨苄西林中的聚合物，用HPLC法分析氨苄西林中的聚合物、青霉素中的聚合物；用凝胶色谱法分离氨苄西林、青霉素中的聚合物；用凝胶分离—化学检测法分析青霉素中的致敏性高分子杂质，即传统的P值法；用免疫学反应检测氨苄西林中致敏性杂质的反相间接血凝法。

近年来又有利用毛细管电泳技术分析头孢菌素中聚合物的报道。

但除了氨苄西林中聚合物的HPLC分析方法外，上述的分离、分析方法因操作繁琐、实验误差大等原因，均不能满足药品质量控制的需要。

USPXXII中首次采用凝胶色谱法控制头孢他定中高聚物的含量，但由于高聚物标准品不能满足需要，该方法后来被取消。

概括上述分离分析手段，色谱法是主要的分离分析方法，分离模式主要有三类：

凝胶过滤色谱法、离子交换色谱法和反相色谱法。

由于结构不同的高分子杂质通常具有相似的生物学特性，因此在药品质量控制中一般只需控制药品中高分子杂质的总量而不必控制不同结构的杂质，因此根据样品分子量差异进行分离的凝胶色谱法具有明显的优势，这也是目前在中国药典中控制抗生素类高分子聚合物的主要方法。

我国根据β－内酰胺类抗生素在不同离子强度的介质中具有不同表现状态的性质，在国际上首次建立了凝胶色谱自身对照外标法定量测定β－内酰胺类抗生素中高聚物的检测方法。

该方法已被国内外β－内酰胺类抗生素生产厂家广泛使用。

1.凝胶色谱分离高分子杂质的原理和基本方法

凝胶色谱法也叫分子排阻色谱法，是根据分子大小进行分离的一种液相色谱技术，药物分子进入凝胶孔径内部，而高分子杂质则被排阻在外，在色谱过程中不被保留，最早被洗脱出来，保留时间较短，而药物被保留，保留时间较长。

凝胶色谱的保留时间与分子大小成反比。

传统的凝胶色谱分离效能较低，为克服这一缺点，人们发展了一个以葡聚糖凝胶SephadexG-10为基础的凝胶色谱分析系统。

在SephadexG-10凝胶（排阻分子量在1000左右）色谱系统中，理论上β-内酰胺类抗生素三聚体以上的高分子杂质均集中在Kav（有效分配系数）＝0的色谱峰中，调节色谱条件，可使β-内酰胺类抗生素的寡聚物（如二聚物等）和其他高分子杂质分离，也可使二者合一，因此可用于不同的分析目的。

在凝胶色谱模式分离分析高聚物中流动相体系一般为含有盐的水溶液，流动相中可加入适量有机溶剂，但一般不应超过30%，流速不宜过快，一般为0.5%～1.0ml/min。

检测方法一般使用紫外检测。

SephadexG-10凝胶色谱系统可分为HPLC系统和简单测定系统两种。

1）简单测定系统此为《中国药典》收载的方法，该系统由恒流泵，紫外检测器，色谱工作站和色谱柱组成。

色谱柱为内径1.3－1.6cm，长30－40cm的玻璃柱，内填葡聚糖凝胶（Sephadex）G-10（40－120μm）。

2）HPLC系统通常以内填葡聚糖凝胶G-10（40－120μm）的不锈钢柱为分析柱。

2.系统适用性试验高分子杂质的检查方法通常重点考察系统适用性，系统适用性试验方法一般情况下同HPLC法。

但当某些药物分子的单体与二聚体不能达到基线分离时，其分离度的计算公式为：

除另有规定外，分离度应大于2.0。

实验发现不管是HPLC系统还是简单的测试系统，当符合下列两个条件时，高分子杂质含量平行测定结果的RSD可控制在+5%以内。

①蓝色葡聚糖在高分子杂质分离系统中的理论板数>2500/m，拖尾因子在0.75～1.5之间；②缔合峰峰面积的相对标准差（RSD）<5%。

因此为保证不同实验室间测定精度符合要求，规定上述两个条件作为SephadexG-10凝胶色谱系统自身对照外标法测定β-内酰胺类抗生素高分子杂质含量的系统适用性条件。

3.高分子杂质的定量控制法　高分子杂质的定量控制法有主成分自身对照法、面积归一化法、限量法及自身对照外标法。

虽然外标法和峰面积归一化法均可用于定量，但因内酰胺类抗生素的高分子杂质具有高度的不均一性和不确定性，无法制备对照品，使外标法在实际工作中难以实行；而且由于高分子杂质在样品中的含量通常较低，凝胶色谱柱的柱效较低，使药物峰与杂质峰相比显得十分宽大，用面积归一化法也很困难。

根据特定条件下β-内酰胺类抗生素可以缔合成表观分子量较大的缔合物，该缔合物在SephadexG-10凝胶色谱系统中和高分子杂质一样，都在Kav＝0处表现为单一的色谱峰这一特点，发展了一个新的定量方法，即自身对照外标法。

1）自身对照外标法的原理：

利用特定条件下β-内酰胺类抗生素可以缔合成与高分子杂质有相似色谱行为的缔合物，即在Kav＝0处表现为单一的色谱峰。

以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标，然后改变色谱条件，测定样品，记录样品色谱图中Kav＝0处高分子杂质峰的响应指标，按外标法计算，即得样品中高分子杂质相当于药物本身的相对含量。

2）缔合物形成条件：

在纯水环境下测定，各种β-内酰胺类抗生素均可缔合，表现为表观分子量增大，在SephadexG-10凝胶色谱系统中Kav<0.1，所以纯水可以作为缔合峰测定的基本洗脱液。

但以纯水为流动相时，溶质和葡聚糖凝胶间也存在着一定的相互作用，导致缔合峰严重拖尾。

故需在流动相中加入适当的抑制剂，以改善峰拖尾。

经研究，采用一定浓度的葡萄糖溶液或甘氨酸溶液作为流动相，可明显改善峰拖尾现象。

这是因为葡萄糖与葡聚糖凝胶有相同的化学性质，葡萄糖与缔合物的相互作用抑制了缔合物与葡聚糖凝胶间的相互作用；而甘氨酸分子中含有氨基和羧基，可封闭葡聚糖凝胶中羟基等急性作用点，从而抑制了缔合物与葡聚糖凝胶间的相互作用。

（三）高分子杂质质量控制研究中存在的问题和注意事项

目前β－内酰胺类抗生素高分子杂质质量控制研究中存在的主要问题有：

①仍有部分β－内酰胺类抗生素未进行聚合物的控制，主要是因为某些β－内酰胺类抗生素在特定条件下不能完全缔合，无法采用自身对照外标法定量。

②一些系统适用性试验不符合要求。

例如，对照溶液与蓝色葡聚糖2000峰的保留时间不一致，对照溶液峰不能重叠或峰面积的相对标准偏差大于5.0%，分离度不符合要求等。

由于β－内酰胺类抗生素高分子杂质的含量与制备工艺、贮藏条件和使用方法有关，因此在质量控制研究过程中需注意以下几个方面。

1.首先要从产品的制备工艺和分子结构特点分析可能产生的高分子杂质，并研究温度、光照、水分及溶液pH值等对高分子杂质含量的影响，以明确高分子杂质产生的影响因素，用于指导优化制备工艺、选择适宜的贮藏条件，制订有效的质量控制指标和限度，以及确定合适的临床使用方法。

2．高分子杂质的检查方法重点考察系统适用性，并要对方法进行验证。

包括理论塔板数、拖尾因子、分离度、对照溶液的线性、对照溶液的精密度（RSD）、最低检测限与定量限、聚合物测定结果的重现性等。

这一点对新药尤为重要。

3.对照品的制备：

如果某些β－内酰胺类抗生素在特定条件下不能完全缔合无法采用自身对照外标法定量时，可以用结构与研制产品类似、能够完全缔合的其他药物制备对照品，进行自身对照外标法定量，但要注意计算结果时应考虑二者分子量的差异。

例如，硫酸头孢噻利在特定条件下不能完全缔合，可以选择结构与头孢噻利类似的头孢曲松制备对照品进行定量；硫酸头孢匹罗可以采用头孢他啶制备对照品进行定量。

4.高分子杂质检查项目的制订：

中国药典2005年版中供注射用头孢类抗生素原料药和注射剂大都订入了聚合物检查项，青霉素类抗生素口服原料药和制剂也订入了聚合物检查项。

因β－内酰胺类抗生素高分子杂质的含量与生产工艺直接相关，同一产品采用不同的生产工艺，其聚合物的含量也不同，且高分子杂质的含量直接影响过敏反应的发生率，故在质量标准中控制高分子杂质的含量是控制产品质量，降低过敏反应发生率，保障临床用药安全的有效措施，通常在进行β－内酰胺类抗生素的新药研究时，应考虑将高分子杂质检查订入质量标准，并制订合理的限度，或作为企业内控质量标准的检查项目。

高分子杂质的限度与其他杂质一样同样要有安全性研究结果的支持。

二、氨基糖苷类抗生素的组分分析及含量测定进展

（一）氨基糖苷类抗生素的组分分析

氨基糖苷类抗生素是由氨基环醇与氨基糖（单糖或双糖）形成的碱性苷，多组分是本类抗生素的特性之一。

各组分的效价、毒性各不相同，为保证药品的质量，必须控制各组分的相对含量。

例如庆大霉素是一种多组分的抗生素，主要组分为C1、C2、C1α及C2α，另外，小组分C2b（小诺霉素主要组分）在其产品中也常出现。

由于发酵工艺或精制过程工艺的不同，导致庆大霉素C组分的比例不完全一致，这一差异对微生物的活性无明显影响，但毒副作用和耐药性有所不同，从而影响产品的效价和临床疗效。

为保证药品质量，各国药典对庆大霉素C组分比例均有明确规定，且多采用高效液相色谱法规定控制庆大霉素C各组分的相对百分含量，但各国药典采用的检测方法各不相同。

如USP（30）采用柱前衍生化－HPLC法测定庆大霉素C组分。

因庆大霉素无紫外吸收，故需在上柱之前，利用C组分结构中的氨基同邻苯二甲醛（ophthaldehyde，OPA）反应后，生成在330nm波长处有强吸收的1-烷基-2-烷基硫代异吲哚衍生物再进行测定。

中国药典则从1995年版起采用OPA柱前衍生化-高效液相色谱法，2005年版修订为高效液相色谱一蒸发光散射检测法（evaporativelight-scatteringdetector，ELSD）。

该方法基于氨基糖苷类抗生素在ELSD中的响应因子具有一致性的事实，采用小诺霉素为对照品，用归一化法计算庆大霉素C1，C1a，C2，和C2a的含量。

Ch.P（2005）的HPLC－ELSD方法较OPA衍生化－HPLC法在庆大霉素C组分分析方面有以下优点：

①不需要衍生化，减少了样品前处理所耗的时间和精力，而且减少了衍生化反应带来的误差，提高了分析精度。

②庆大霉素不同组分在蒸发光散射检测器中的响应因子基本一致，消除了由衍生化产物吸收系数间差异带来的误差。

③分离效果好，庆大霉素中各C组分及其它一些未知杂质间的分离度均大于1.5，减少了由杂质峰干扰带来的误差。

英国药典从1993年版开始用OPA柱前衍生化一HPLC法取代了NMR法，2005年版又与Eur.Ph（5.0）一起修订为高效液相色谱-脉冲电化学检测法测定庆大霉素C组分，以硫酸庆大霉素标准品为对照，采用归一化法计算庆大霉素C1，C1a，C2，C2a和C2b的含量。

（二）氨基糖苷类抗生素的含量测定

1.微生物检定法

微生物检定法检测成本相对低廉，适于推广使用，目前仍然是各国药典测定该类抗生素含量的主要方法之一，微生物检定法主要有琼脂扩散法（或管碟法）和浊度法，各国药典均已收载。

管蝶法的特点是，结果较为稳定，基本操作和设计适用于各种抗生素，并适用于多批样品的测定，但由于样品和标准品必须同质，且受扩散因素的影响，另外试验时间长（第二天才能得到结果），手工操作，影响因素多，误差较大；相比之下，浊度法具有快速、易操作、不受扩散因素的影响，且可用仪器自动测量，试验的灵敏度和精密度均优于管蝶法。

随着国产仪器质量的提高，中国药典2005年版附录首次收载了浊度法，在抗生素正文中，庆大霉素采用了浊度法测定效价，不仅解决了管碟法测定庆大霉素效价误差大的问题，而且为解决多组分抗生素效价测定的困难开拓了新的思路。

微生物法测定法的局限是其测定的是总效价，不能区分主成分和相关组分或有关物质的量，不能准确反应氨基糖苷类抗生素的内在质量。

有报道称，国内硫酸阿米卡星注射液不同生产厂家产品间杂质A的含量可在0.5%～13%不等，但杂质A具有抗菌活性，所以微生物效价测定时反映不出产品间的质量差别。

因此对于含有抗菌活性的杂质或多组分的抗生素，应辅以控制组分及杂质的方法，以弥补效价法测定含量专属性不强的缺点。

2.高效液相色谱法

用HPLC法测定氨基糖苷类抗生素含量时，由于分子结构中不含特征紫外基团，因而无紫外吸收、不能直接用紫外检测器或荧光检测器，故该类药物的HPLC法分为衍生化与非衍生化法二类。

（1）衍生化法　衍生化方法可分为柱前衍生和柱后衍生两种，采用的衍生化试剂有邻苯二醛（OPA）、2，4－二硝基氟苯（DNFB）、2，4，－二硝基苯磺酸（TNBS）和异氰酸苯酯（PIC）等。

利用氨基糖苷类抗生素结构中的活泼基团（如氨基、羰基）与衍生化试剂形成紫外区有吸收或有荧光的物质，以便于紫外检测或荧光检测。

柱前衍生化方法较简单，不需要特殊的设备；柱后衍生化采用在线技术，可便于自动化测定，但需要有特殊的衍生化反应装置，因此柱前衍生化方法较多被采用。

由于衍生化法供试品制备步骤繁琐；色谱条件多选用含盐较多的流动相，必要时需加入离子对试剂，长期应用有损色谱柱及进样器的使用寿命；同时影响试验结果因素较多，重现性差；因此，非衍生化方法的开发更具有实用价值。

（2）非衍生化法　氨基糖苷类抗生素的非衍生化分析通常采用了新的检测技术：

如示差折光检测法、UV末端吸收法、间接测定法、脉冲电化学检测器法、质谱检测法和蒸发光散射检测法等。

新型检测器的使用扩大了HPLC非衍生化方法在氨糖类抗生素中的应用。

各类检测技术各有特点，示差折光检测器受温度和流动相组成影响大，色谱系统平衡需较长时间，已较少采用；UV末端吸收法对仪器及试剂色谱纯度要求高；间接测定法要选用适宜的有紫外吸收或荧光的物质作检测剂，方法不易建立；脉冲电化学检测器灵敏度较高，但采用的多为聚苯乙烯二乙烯苯色谱柱，实验条件苛刻，通用性差；质谱检测器灵敏度高，但仪器昂贵。

近年来，在药学领域中广泛应用的蒸发光散射检测器（ELSD）是一种通用型质量检测器，对任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，并且在一定条件下物理性质相似的物质其响应因子基本一致，在氨基糖苷类抗生素质量分析中已越来越广泛地应用。

如Ch.P（2005）采用HPLC-蒸发散射法（ELSD）测定硫酸卡那霉素、硫酸依替米星含量。

USP（30）采用离子交换色谱-电化学检测法测定硫酸卡那霉素、硫酸阿米卡星、硫酸链霉素的含量，离子对色谱法测定奈替米星含量；BP（2009）采用衍生化法测定阿米卡星、HPLC-脉冲安培检测法测定妥布霉素含量。

三、大环内酯类抗生素质量控制研究的进展

（一）大环内酯类抗生素特殊杂质检查及组分分析

大环内酯类抗生素的有关物质主要来源于生物发酵过程及复杂的合成过程中，其有关物质较为复杂且种类较多，各国药典均广泛采用HPLC及TLC法对大环内酯类抗生素的有关物质进行检查。

如现行中国药典用HPLC法检查克拉霉素中有关物质，用供试液的自身稀释液做对照，规定供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照品主峰面积的1/2（2.5%）；各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液的1.2倍（6.0%）。

但中国药典的方法只笼统地控制了单个未知杂质和总杂质的量，欧洲药典对克拉霉素有关物质的研究较为深入，列出了A，B，C，D，E，F，G，H，I，J，K，L，M，N，O，P等16个杂质的结构，采用梯度洗脱的方法进行有关物质的检查。

与《中国药典》检查方法相比，欧洲药典的方法能更有效地控制有关物质的限量。

再如琥乙红霉素是以红霉素为原料合成的琥珀酸乙酯衍生物，其组分和有关物质与红霉素原料中的组分和有关物质及厂家的生产工艺密切相关。

有关物质主要为脱水红霉素A，还有少量的其它有关物质为：

红霉素A烯醇醚、N-去甲基红霉素A等。

USP30版和欧洲药典5.0版采用HPLC法进行测定；Ch.P（2005）则采用薄层色谱法测定有关物质。

大环内酯类抗生素在微生物合成过程中往往产生结构近似、理化性质相近的多种成分，不同组分之间的活性和毒副作用往往有较大差异，需通过组分分析来控制产品的质量。

目前在国内外药典中普遍采用HPLC法进行大环内酯类抗生素的组分分析。

如：

乙酰螺旋霉素中单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ和双乙酰螺旋霉素Ⅲ四种组分的分析；红霉素中红霉素A、红霉素B和红霉素C组分的分析；麦白霉素中麦迪霉素A1及吉他霉素A6的分析。

（二）大环内酯类抗生素效价或含量测定

1.大环内酯类抗生素效价测定中水解时间的研究　　

有些大环内酯类抗生素，如依托红霉素、琥乙红霉素等，本身无抗菌活性，水解后才能表现出抗菌活性。

现行《中国药典》采用微生物检定法，将其水解为红霉素后，再测定其含量。

由于依托红霉素和琥乙红霉素的效价是以其水解成的红霉素的效价单位来表示的，因此，水解的完全程度直接影响测定结果的准确性。

如影响依托红霉素水解的主要因素有样品的溶剂、水解的温度与时间等。

供试品无论采用甲醇还是乙醇溶解，对测定影响不大；依托红霉素在室温放置12小时以上时，可保证水解完全，而30℃时则需5小时，40℃需2.5小时，50℃需1小时，60℃需0.5小时，70℃或70℃以上时，供试品会降解。

故适宜的水浴条件是采用50℃两小时以上。

琥乙红霉素的情况也类似。

2.HPLC法测定大环内酯类抗生素的含量

USP、BP及日抗基中均采用HPLC法测定大环内酯类抗生素的含量，而中国药典对该类抗生素的含量测定仍主要以微生物效价法为主。

大环内酯类抗生素大多为多组分抗生素，虽然效价的测定结果是表示产品总的活力水平，但由于各组分的生物反应性常有较大差异，组分比例不同，生物效价也有明显的差别，且生产菌株不同，各厂产品的组分比例也不同。

这时用同一种比例组分的标准品测定不同厂家不同比例组分的样品就会有误差，此时效价就不足以完全正确反映药品有效组分的含量，因此用微生物效价法来达到监测药品质量的目的是远远不够的。

另外，微生物检定法操作步骤繁琐，实验时间长，要求技术熟练，操作细致，在实际工作中很难满足半成品分析及快速分析的需要，它被HPLC法逐渐替代是发展趋势。

在2005年版中国药典中，对原来用微生物效价测定效价的二个半合成的大环内酯类抗生素克拉霉素和罗红霉素已修订为高效液相色谱法。

3.大环内酯类抗生素溶出度测定的进展

大环内酯类固体口服制剂溶出度检查仍继续采用自身对照法，即用10个包装单位的样品混合物来代替对照品，来衡量供试品的溶出速度和程度。

与对照法和吸收系数法相比，自身对照法有以下优点：

第一，针对性强。

采用自身对照法，造成溶出度不合格的主要原因是辅料处方及生产过程中的制备和生产工艺等因素；而采用对照法和吸收系数法，溶出度不合格的原因除上述因素外，还可能是主药含量低。

第二，消除误差，多组分抗生素由于生产工艺不同，会造成组分比例差异，用某一特定组分比例的对照品测定千差万别的产品易造成系统误差；而自身对照法可消除这方面的误差。

第三，减少辅料和杂质对测定结果的干扰。

但自身对照法也有不足之处，如同品种不同处方的溶出度需制备各自的自身对照液；当主药含量很低时，大量辅料可能会影响溶出度的测定。

四、细菌内毒素替代热原检查法的进展

注射剂的热原检查是保证输注药品安全的重要检验项目之一。

1942年美国率先将家兔热原检查法载入了第12版《美国药典》，世界各国均相继将其作为检查药品注射剂中污