高压灭菌锅的验证报告.docx
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高压灭菌锅的验证报告
立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75G仪器验证报告
验证报告审批表
程序审批
部门
签名
日期
起草
第三B组
2013.2.28
审核
班主任
2013.03.11
批准
系主任
--
立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75G仪器验证报告目录
1.概述
2.验证目的
3.验证依据及采用文件
4.验证内容
4.1.设计确认
4.2.安装确认
4.3.运行确认
4.4.性能确认
5.再验证周期
6.验证报告审批
1.概述
本消毒器是利用高压高温湿热蒸汽杀菌，用于微生物限度检查用培养基、器皿及污染物过期菌种等灭活，灭菌条件设定为121℃，15min。
2.验证目的
通过验证确认立式压力蒸汽灭菌器能达到设备性能指标，满足检验需求。
验证结果必须证明生产中采用的灭菌过程对经过灭菌的物品能够保证残存微生物污染的概率或可能性低于10-6
3.验证依据及采用文件
《药品生产验证指南》
《药品生产质量管理规范》
《中华人民共和国药典》2010年版二部
4.验证内容
4.1设计确认
容积：
75L
灭菌工作温度：
109℃~135℃
设定温度时间：
4~120分钟；设定干燥时间范围：
15~240；
电源：
220V±10V,50Hz；
灭菌加热功率：
3.5KW
干燥加热功率：
1KW
额定工作压力：
0.212Mpa；额定工作温度：
135℃；
工作坏境：
温度5℃~40℃;相对湿度：
≤80%RH;
设备安全类别：
I类；
毛重：
60kg（75L）
4.2安装确认
4.2.1资料档案
名称
存放处
使用说明书
实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）
备料清单
实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）
合格证
实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）
开箱验收记录
实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）
设备卡
实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）
检验人：
日期：
2013.2.28
复核人：
日期：
2013.2.28
4.2.2安装确认
序号
项目
标准
检测结果
是否符合要求
1
立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75G
YXQ-LS-75G
YYXQ-LS-75G
符合
2
出厂编号
有
有
符合
3
出厂日期
有
有
符合
4
数量
1台
1台
符合
5
装箱单
有
有
符合
6
合格证
有
有
符合
7
使用说明书
有
有
符合
8
第三方质量检验书
有
有
符合
9
保修卡
有
有
符合
10
设备完整性、牢固性
无缺陷、无松动
无缺陷、无松动
符合
11
表面裂痕、焊缝
无裂痕、打磨光滑
无裂痕、打磨光滑
符合
12
表面划痕
无划伤、碰痕
无划伤、碰痕
符合
13
各种零部件，备品备件
齐备
齐备
符合
14
破裂管线
无破裂、接口可靠
无破裂、接口可靠
符合
15
松脱电线
联接紧固、无松脱
联接紧固、无松脱
符合
16
电源
220V50HZ
220V50HZ
符合
17
环境温度
5℃～40℃；相对湿度≤80%RH
5℃～40℃；相对湿度≤80%RH
符合
18
安装的环境背景
化验室
化验室
符合
检验人：
日期：
2013.2.28
复核人：
日期：
2013.2.28
4.3运行确认
4.3.1仪表校正
1.校正的温度指示、传感器、温度记录仪的读数值与标准电偶指示值之间的误差应≦+0.5℃。
2.校正的时间记录仪与标准时间指示装置之间的误差应≦+1％.
3.校正的压力表/真空表与标准表之间的误差应≦+10%。
4.3.2真空度试验
用特定的化学指示剂（试纸）检查，化学指示剂（试纸）在运行抽真空程序后，经134℃暴露3min，其化学指示剂（试纸）的颜色应呈现均匀一直的改变。
4.3.3真空状态下灭菌腔室内泄漏实验
泄漏率：
在10min内，腔室内压力变化应<130Pa/min（1mmHg/min）
4.3.4将灭菌器重加入纯化水等，准备工作做好后，设置为121℃,15分钟，启动设备，该设备应在121℃保温15分钟，连续运行3次，且用秒表计时。
编号
一次
二次
三次
秒表计时
15min20s
15min24s
15min23s
判断：
校正的事件记录仪与标准时间指示装置之间的误差应≤+1%
符合标准
检验人：
日期：
2013-03-01
复核人：
日期：
2013-03-03
4.3.5热分布测试
4.3.5.1空载热分布
取13支经过校验的留点温度计，其中2支的探头分别置于灭菌器的2个排气接口处，1支探头置于灭菌器检测接口处，1支探头置于灭菌器的温度传感器处，其余留点温度计均与分布在腔内各处。
开启灭菌器箱，按照标准操作程序进行，运行结束后记录各个点的温度，连续运行3次，检查其重现性。
以证明空载灭菌器腔室内个点的温度在每次灭菌程序运行过程中的差值≤+1℃。
运行结束后各点温度记录如下：
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
1次
119.7
120.0
124.0
119.8
119.2
120.3
122.0
119.7
119.9
117.0
120.0
124.3
2次
119.0
119.7
123.8
120.0
119.0
120.9
122.0
119.0
119.4
118.0
120.0
123.9
3次
118.0
120.0
122.9
119.0
118.0
120.0
121.0
119.0
119.0
116.0
120.0
124.0
（注：
2安全气阀处3排气口处3-7上层8-12下层）
测定结果：
检验人：
日期：
2013-03-03
复核人：
日期：
2013-03-04
4.3.5.2满载热分布
将灭菌器内装满洗后清洁且装满培养基的锥形瓶，自下而上摆放，取13支经过校验的留点温度计，其中2支的探头分别置于灭菌器的2个排气接口处，1支探头置于灭菌器检测接口处，1支探头置于灭菌器的温度传感器处，其余留点温度计均与分布在腔内各处。
开启灭菌器箱，按照标准操作程序进行，运行结束后记录各个点的温度，连续运行3次，检查其重现性。
运行结束后各点温度记录如下：
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
1次
123.0
118.0
122.1
121.9
120.2
122.0
121.3
119.9
118.5
119.5
121.5
119.2
2次
123.8
117.7
122.1
122.0
119.2
121.6
121.4
118.4
118.4
118.4
120.0
118.2
3次
112.2
119.8
119.4
118.8
118.8
120.0
120.2
117.6
118.0
117.0
119.0
118.2
（注：
1安全气阀处2排气口处3-7上层8-12下层）
运行结果：
检验人：
日期：
2013-03-02
复核人：
日期：
2013-03-04
4.3.6热穿透试验
4.3.6.1装载类型：
最大装载、装满
4.3.6.2器皿选择：
500ml锥形瓶，90ml培养皿
灭菌程序：
121℃，15分钟
4.3.6.3测试过程
在最大装载情况下，取13支经过校验的留点温度计，其中2支的探头分别置于灭菌器的2个排气接口处的待灭菌瓶内，1支探头置于灭菌器检测接口处处的待灭菌瓶内，其余留点温度计置于其余待灭菌瓶中。
开启灭菌器箱，按照标准操作程序进行，运行结束后记录各个点的温度，连续运行3次，检查其重现性。
最大负载状态下，热穿透实验的结果达到最冷点灭菌物品的暴露时间为121℃≧15min，即F0≧15.
最小负载状态下，热穿透实验的结果达到最冷点灭菌物品的暴露时间为121℃≧15min，即F0≧15.
=t*10（T1-T2）/Z
-温度最低点的相应灭菌时间
T-某实际灭菌时间所持续的时间
T1-实际灭菌温度
T2-理论灭菌温度
Z-各温度下的微生物灭菌速率常数
15.3*10（117.8-121）/10=45.9
运行结束后各点温度记录如下：
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
1次
122.3
121.5
121.0
★
122.5
120.5
119.8
118.2
2次
122.0
122.0
120.0
★
121.0
121.0
120.0
118.0
3次
120.2
119.0
117.8
★
118.0
118.4
119.0
117.8
（注：
上层1-4下层5-8★水银柱断裂）
运行结果：
因水银柱断裂，放弃第4组数据，继续试验，出现此情况，需重新验证。
检验人：
日期：
复核人：
日期：
4.4性能确认
4.4．1生物指示剂纸上活菌数和活芽孢数的确认
（1）无菌打开5个生物指示剂小瓶（美国3M公司Aiiesi生物指示剂，No．1262），将5条
芽孢纸片转移至一个无菌研钵中，加入0.5ml生理盐水，研碎纸片，制成芽孢悬液。
（2）分别吸取lml芽孢悬液加入已有9ml盐水的试管中，将试管标明1号和2号。
（3）将1号试管80℃水浴中放置15min，作为热处理。
（4）用盐水分别将上述两管作连续10倍稀释（10－1，10*2，10－3）。
（5）分别吸取热处理组（1号）和未处理组（2号）后两个稀释度（10－2，10－3）悬液lml，各加
入两个无菌平皿中，然后倒入15～20ml冷却至50℃左右的TSA（胰蛋白胨大豆琼脂）培养基，
混合后待冷却。
（6）倒置平皿，在56℃下培养48h。
（7）培养结束后，计数每个平皿碟上的菌落数，计算处理组和未处理组各稀释液中的平均
菌落数，然后算出生物指示剂纸片上平均实际活菌数和活芽孢数。
（8）如果每条纸片上的平均活菌数不小于制造商标明的平均数的95％，同时，纸片上
的活芽孢数也不小于活菌数的一半，则该生物指示剂可以使用。
（9）将结果记录在“生物指示剂的活性确认表”上。
（10）每批购买的生物指示剂均需进行本项检查。
2．根据验证需要，将适量的生物指示剂小瓶送往制剂或合成车间，或者用于实验室高压
灭菌柜。
3．生物指示剂法确认灭菌效果检查可与热穿透试验同时进行，也可单独进行，每次检查应至少使用5个生物指示剂，在生物指示剂上标明灭菌器名称，指示剂放置位置，编号及使用日期等。
4．将各生物指示剂尽可能置于热电偶旁。
5．按照相应的高压灭菌柜验证规程或原位灭菌验证规程运行一个灭菌周期。
6．灭菌结束后，待灭菌柜冷却，打开柜门，立即取出所有生物指示剂送微生物实验室培
养。
7．压碎生物指示剂中的安瓿瓶，同时用一个未经灭菌处理的生物指示剂作为阳性对照
（也压碎内部的安瓿瓶），一同于56℃下培养48h。
二、结果观察及分析
1。
分别在培养24h后及48h后检查生物指示剂是否有颜色变化，如果呈黄色（阳性显
示）则表明有细菌生长，如果没有颜色变化，则表明已进行了充足的灭菌循环。
2．阳性对照生物指示剂必须在24h内出现颜色变化。
3．将结果记录在“生物指示剂检查表”上，将该表放入蒸汽灭菌工艺的验证文件中。
4．所有阳性的生物指示剂必须在121℃下高压灭菌30min。
项目
第一次
第二次
第三次
稀释倍数
10-2
10-3
10-2
10-3
10-2
10-3
未经热处理
——
——
——
——
——
——
经热处理
——
——
——
——
——
——
备注
——表未出结果
判断：
实验结果不可用
4.4.2嗜热脂肪杆菌D值测定法
1材料及仪器（表4－15）
2方法步骤
2．1将菌膜或孢子悬浮液分别放入注射用水或磷酸缓冲液PBS中，用VF－1振动使溶解。
制备浓度约为108
个/ml的悬浮液，然后在沸水中加热l0min以杀灭可能存在的芽孢繁殖体。
2．2将上述BStK3l悬浮液分别用微量注射器注入16～18根毛细管（必要时可采用离心法去
除气泡），使每支管的菌量约为106
个孢子。
用酒精灯封口。
每次进样前后，进样器必须用1：
1酒精丙酮以及蒸馏水交替淋洗，以提高接种准确度。
表4－15嗜热脂肪杆菌D值测定的材料及仪器
BStK31孢子悬浮液浓度约在4．5×108个/ml
BStK31菌膜每片含量约在1．3×106个至1．6×106个
培养基TSA/胰蛋白大豆琼脂及TSB/胰蛋白大豆肉汤
振动器VF-12500次/min
可调式恒温油浴型号000-9601，精度±0．1℃，调温范围20～220℃
毛细管Φ0．8～1．1mm×90mm
微量进样器（图4—55）500μl，针头长90mm
2．3将校验过的油浴设在121℃下工作。
2．4分别将每组的14～16支毛细管放入毛细管架，迅速放入油浴
曝热，并计时。
每隔1～3min从毛细管架同时取出两支毛细管，迅
速放入冰水浴中冷却3～5min。
取出，首先用清洁剂除去油滴再用?
5
％酒精棉花消毒毛细管表面，然后分别放入一个装有5ml无菌TSB
的试管。
用无菌玻璃棒捣碎毛细管。
定量稀释，制成30～300CFU
／ml菌液。
在52～60℃用TSA培养24h，计数。
未经曝热的毛细管，
也应用同样的方法理并进行培养计数。
3结果
4讨论
4．1D值的确定及影响因素
孢子在蒸汽灭菌过程中，其死亡的规律可以用下式表示：
lgNt＝lgN0+kt
式中N0——零点孢子的浓度；
Nt——曝热t时间（min）后孢子的浓度；
t——曝热时间，min；
k——斜率。
D＝－1/k
4.4.3细菌生物指示剂验证
将一定量的耐热菌放入待灭菌的产品中，在设定的灭菌条件下进行灭菌，以验证设定的灭菌工艺是否确实赋予产品必须的灭菌值（FH）。
验证菌选择：
嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂（3M中国有限公司），含量1x106CFU/支。
验证方法
取嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂，均匀分布于灭菌锅的隔层位置，其中三支置于热穿透试验的最冷点，按照SOP进行灭菌操作，温度121℃，灭菌时间15分钟。
经过一个灭菌周期后，取出生物指示剂，挤破内含的安培瓶，在60℃培养24-48小时，同时取1支未灭菌的指示剂做阳性对照。
连续试验三次。
（培养后，指示管不变色呈紫色，表示灭菌通过；培养后，指示管变红，呈黄色表示灭菌不通过。
同时培养的对照管应为阳性呈黄色。
）（必须及时查出灭菌失败原因）。
生物指示剂培养结果记录如下：
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
阳性对照
1次
-
-
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
+
2次
-
-
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
3次
-
-
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
备注
+表示未通过-表示通过—未做
结果判断及评价：
符合标准
检验人：
日期：
2013-03-06
复核人：
日期：
2013-03-11
4.4.2灭菌后培养基质量验证
按照《中华人民共和国药典》2010年版附录ⅪJ规定的检查方法，从消毒后的营养琼脂和玫瑰红钠培养基中每次取10瓶（注意分别从消毒器中不同位置）分别放皿。
并同时做空白。
在30-35℃和23-28℃下培养细菌培养3天，霉菌和酵母菌培养5天，记录菌落生长情况。
最大负载、最小负载状态下，微生物标的物试验的结果可以保证微生物存活概率≦10-6
细菌培养记录：
编号
天数
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1次
第一天
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
第二天
0
0
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
3
0
0
0
0
0
第三天
0
0
1
5
0
0
0
0
0
2
0
0
0
0
3
0
0
0
0
0
2次
第一天
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
第二天
0
0
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
3
0
0
0
0
0
第三天
0
0
2
5
0
0
0
0
0
0
0
1
7
0
3
0
0
0
0
0
3次
第一天
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
第二天
0
0
1
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
第三天
0
0
2
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
0
0
0
0
0
霉菌培养记录：
编号
天数
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1次
第一天
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
第二天
1
0
2
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
第三天
1
0
6
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
4
第四天
3
1
7
1
2
0
0
5
0
5
0
0
2
0
4
0
0
5
0
9
第五天
3
1
16
2
3
0
0
6
0
8
0
10
2
0
6
0
0
8
0
14
2次
第一天
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
第二天
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
第三天
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
第四天
0
0
2
0
0
0
2
0
2
0
1
0
0
0
2
4
1
2
1
2
第五天
6
1
2
0
0
0
2
0
6
0
1
0
1
0
3
4
1
21
2
2
3次
第一天
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
第二天
0
0
0
0
9
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
第三天
0
1
0
3
13
0
8
0
4
0
5
2
3
0
5
0
3
25
2
5
第四天
1
6
0
29
28
1
9
0
9
0
6
2
3
0
5
0
3
25
2
6
第五天
1
6
0
29
28
1
9
0
9
0
6
2
3
0
5
0
3
25
2
6
验证结果及评价：
检验人：
复核人：
日期：
2013年03月11日
5再验证周期
5.1常规再验证周期一年。
5.2重新安装后必须再验证。
5.3设备经大修后必须再验证。
5.4再验证项目包括：
性能确认中的各项内容。
6验证报告审批
验证报告审批表
验证项目：
立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75G验证报告
验证起止日期：
验证工作
第三B组
设计确认
安装确认
运行确认
性能确认
参加人员
验证结果概要
由于各种原因，实验结果准确性不高。
结论：
需在验证.
验证小组负责人签名：
2013年3月10日
验证小组成员会签
导师意见
负责人签名：
年月日
辅导员意见
负责人签名：
年月日
系主任意见
签名：
年月日
备注
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