脯氨酸的检测方法.docx
《脯氨酸的检测方法.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脯氨酸的检测方法.docx（12页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
脯氨酸的检测方法
脯氨酸的检测方法
1.原理
样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。
2.应用范围
本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。
本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。
3.试剂及仪器
3.1脯氨酸
3.23%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（0.3g茚三酮溶解于10ml2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）
3.32-甲氧基乙醇
3.4蚁酸（96%），即甲酸
3.5异丙醇（2-丙醇）水溶液：
水：
丙醇=1：
1
3.615ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）
3.7分光光度计，检测吸光度设定在520nm下
3.81cm玻璃比色皿
4.样品准备
4.1苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：
20的水进行
稀释。
其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L（见稀释表）。
浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。
蜂蜜的稀释，采用2.5g蜂蜜加50ml水。
将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。
4.2原果汁稀释表
稀释比例
颜色空白期望值样品类型
Apple苹果
1:
1
yes
Apricot杏
21:
1
yes
Aronia野樱莓
1:
1
yes
Banana香蕉
1:
1
yes
Blackberry黑莓
1:
1
yes
Cherry樱桃
1:
1
yes
Cranberry蔓越莓
1:
1
yes
Grape葡萄
16:
1
yes
Grapefruit柚子
21:
1
no
Guava番石榴
3:
1
yes
Kiwi泥猴桃
1:
1
yes
Lemon柠檬
21:
1
no
Lime酸橙
21:
1
no
Mandarin中国柑桔
21:
1
no
Mango芒果
1:
1
yes
Nectarine油桃
21:
1
no
Orange柑桔
21:
1
no
Papaya番木瓜
1:
1
yes
PassionFruit西番连
1:
1
yes
Peach桃
6:
1
yes
Pineapple菠萝
1:
1
yes
Plum李子
7:
1
yes
Prune西梅
16:
1
yes
Raspberry悬钩子（树梅）
5:
1
yes
Strawberry草莓
1:
1
yes
Tangerine橘子
21:
1
no
Tomato番茄
1:
1
yes
5.标准溶液的制备
5.1脯氨酸贮备液（500mg/L）:
0.0500g脯氨酸加水定容至100ml。
此贮备溶液冷藏存放，每月重新配置一次。
5.250mlg/L准工作溶液：
每天配置一次，取5ml脯氨酸贮备溶液，用水定容至50ml。
用该溶液作为分析用的标准溶液。
6.结果判定
6.1将离心管编号，并设计样品编号与离心管标号的对照表格。
按下表，向离心管内移取相应溶液：
样品
*颜色空白
标准
水
空白
茚三酮溶液
1.00mL
1.00mL
1.00mL
2-甲氧基乙醇
1.00mL
标准溶液
0.50mL
样品
0.50mL
0.50mL
水
0.50mL
蚁酸
0.25mL
0.25mL
0.25mL
0.25mL
6.2深颜色的果汁或者稀释度较低的果汁中的色素物质，将会对检测结果的判定产生影响。
为纠正因此产生的结果偏差，使用颜色空白对照实验。
对苹果汁、梨汁、浆果汁和蜂蜜采用颜色空白对照实验。
50mg/l标准溶液的水空白对照实验用于柑橘汁及其它高稀释倍数的果汁检测。
6.3盖紧离心管，充分摇匀（处理茚三酮时要戴乳胶手套）。
同时将所有离心管放入沸水
浴中加热15分钟。
将离心管放在室温水浴中冷却5分钟。
向每个离心管中加入5ml异丙醇
水溶液（1:
1）。
充分混匀后，用1cm比色皿，在520nm下测量每管溶液的吸光度（A520）
（对于有絮状物的样品，如芒果，将样品离心后，把上清液用移液管小心转移至比色皿中，
直接用离心管倾倒会将絮状物混到上清液中）。
每次测量之前，要先用待测溶液将比色皿润
洗一下，倒掉润洗液，然后再进行测量。
在35分钟的冷却时间，内将所有待测溶液的A520
检测完毕。
应戴乳胶手套，以避免茚三酮溶液滴溅到皮肤上，茚三酮溶液滴溅到皮肤上，会
产生深紫色的色斑。
7•计算
如果50mg/L标准溶液的A值＜0.600，结果需经实验室主管的核准，才能上报结果，否
则样品可能需要进行复测
脯氨酸（mg/L）=（A样品/A标准溶液）xC
C是标准溶液的浓度（通常为50mg/L）
对于脯氨酸含量的水果来说，结果必须要乘上稀释倍数（稀释后体积/原体积）对于浓缩
果汁和蜂蜜来说，结果必须乘以稀释倍数（稀释后体积ml/预案重量g）结果用mg/kg表
示
8.参考资料
AOAC官方分析方法
出版时间15thEd.（1990）
方法编号979.20
工作表
脯氨酸
样品编号#Date
样品类型Analyst
样品标准
稀释度（w/v）
稀释度（v/v）
离心管编号#
空白管号
A520吸光度
A520空白吸光度
A520
样品脯氨酸
mg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kg
PROLINE
Principle
Thepreparedsampleistreatedwithninhydrin.Prolineinthesamplereactstoformanorange
derivative.Absorbaneeismeasuredat520nmversusappropriatereagentblank.
Applicability
Thismethodisapplicabletothedeterminationofprolineinhoney,fruitjuicesandconcentrates.Otherapplicationsofthismethodmustbeindividuallyvalidated.
ReagentsandEquipment
Proline脯氨酸
3%ninhydrinin2-methoxyethanol（0.3gofninhydrindissolvedin10mL2-methoxyethanolissatisfactory;makeupfreshdaily）
3%的茚三酮在2-甲氧基乙醇（0.3g茚三酮溶解在10mL2-甲氧基乙醇；每天补充新的）2-methoxyethanol2-甲氧基乙醇
formicacid（96%）蚁酸（96%）（甲酸）
aqueousisopropanol（2-Propanol）-diluted1+1水：
异丙醇1：
1
15mLscrewcapglasscentrifugetubes（besurethattherearenochipsontherimofthetube;disposeofchippedtubes）15mL的带螺帽的玻璃离心管（确定管子的边没
有破损；除掉有破损的瓶子）spectrophotometersettomeasureabsorbanceat520nm520nm测定吸光度
1cmglasscuvettes
1cm的玻璃小管
SamplePreparation
Apple,pearandmostberryjuicesarerunsinglestrength.苹果，梨和多数浆果类的汁液是直接做。
Citrusjuicesarediluted1+20withwater.柑橘类的汁液要用水稀释1：
20。
Otherfruit
juicesshouldbedilutedappropriatelysuchthattheprolineconcentrationinthedilutedsampleislessthan50mg/L（seedilutiontable）.其它水果汁液也应该适当的稀释使脯氨酸的浓度在稀释后达到小于50mg/L。
Fruitjuiceconcentratesaredilutedtosinglestrengthwithwater,andthenfurtherdilutedappropriately.浓缩果汁用水稀释到原来的浓度，然后再适当的稀释。
Honeyisdiluted2.5gto50mLwithwater.蜂蜜取2.5g用50mL的水稀释。
Centifuge
turbidsamplesforapproximately5minutespriortoanalysistoremovesuspendedmaterial;useclearsupernatantforanalysis.浑浊的样品，在分析前5分钟离心，移去悬浮物，用清亮的浮在表面的去测。
DilutionTableforSingleStrengthJuice
DilutionfromColor
SampleType
SingleStrengthBlank
Apple
1
1
yes
Apricot
21:
1
yes
Aronia
1
1
yes
Banana
1
1
yes
Blackberry
1
1
yes
Cherry
1
1
yes
Cranberry
1
1
yes
Grape
16:
1
yes
Grapefruit
21:
1
no
Guava
3:
1
yes
Kiwi
1
1
yes
Lemon
21:
1
no
Lime
21:
1
no
Mandarin
21:
1
no
Mango
1
1
yes
Nectarine
21:
1
no
Orange
21:
1
no
Papaya
1
1
yes
PassionFruit
1
1
yes
Peach
6:
1
yes
Pineapple
1
1
yes
Plum
7:
1
yes
Prune
16:
1
yes
Raspberry
5:
1
yes
Strawberry
1
1
yes
Tangerine
21:
1
no
Tomato
1
1
yes
StandardPreparation
Prepareaprolinestocksolution（500mg/L）bydissolving0.0500gprolineinwaterandmakingupto100mL.Thissolutionshouldbestoredrefrigeratedandpreparedfreshmonthly.
准备脯氨酸标准储备溶液（500mg/L）:
用水溶解0.0500g脯氨酸至100mL,溶液保存到冰箱，
每月配制新的标品。
Preparefreshdailya50mg/Lworkingstandardsolutionbydiluting5mLprolinestocksolutionto
50mLwithwater.Usethisstandardfortheanalysis.
每天准备新的脯氨酸标准溶液（50mg/L），将5mL脯氨酸标准储备溶液（500mg/L）用水稀释到50mL。
用这个浓度做分析。
Determination
Numberaseriesofscrewcapcentrifugetubes,andprepareatablecorrelatingsamplenumberstotubenumbers.Pipetthefollowingintotubes:
给一系列的带有螺帽的离心管编号，准备相关于管子编号的表，将下面的物质用移液管移到
管子里：
color*water*
sample
blank
std
blank
ninhydrinsolution
1.00mL
1.00mL
1.00mL
2-methoxyethanol
1.00mL
standardsolution
0.50mL
preparedsample
0.50mL
0.50mL
water
0.50mL
formicacid
0.25mL
0.25mL
0.25mL
0.25mL
*Intenslycoloredfruitjuicesorjuiceswithverylittledilutionmaycontainpigmentsthatwillinterferewiththedetermination.Tocorrectforthis,useacolorblank.Runcolorblanksforapple,pear,berryjuicesandhoney
颜色深的果汁如果不稀释可能含有色素会干扰检测。
校正使用颜色空白，用于苹果、梨等浆
果类和蜂蜜。
Thewaterblankfor50mg/Lstandardwillbesuficienttocorrectforthebackgroundincitrusandotherhighlydilutedfruitjuices.
水空白为50mg/L的标准溶液用于校正柑橘类等高稀释度的果汁。
Captubestightlyandshakewell（wearlatexgloveswhilehandlingninhydrinsolutions）.盖紧盖
子充分振摇（当操作茚三酮溶液时戴上乳胶手套）。
Simultaneouslyplacealltubesinaboiling
waterbathforexactly15minutes.同时放置所有的管子到沸水浴中15分钟。
Cooltubesfor5
minutesinaroomtemperaturewaterbath.在室温的水浴中冷却管子5分钟。
Add5mL
aqueousisopropanol（1+1）intoeachtube.力口5mL水：
异丙醇（1:
1）溶液到每个管子中。
Mixwellandmeasuretheabsorbaneeat520nm（A520）ofthesolutionineachtubeina1cmglasscuvette充分混合后在520nm处测量吸光度。
（forsamplesthathavesomefloc,suchas
mango,centrifugethetubeandcarefullytransfertheclearlayerintothecuvettewithadisposablepipet,tippingthetubemayresuspendthefloc）.（有絮状物的样品，例如芒果，离心此管子，小心的用移液管将清液移到比色皿中，倾倒管子可能重新悬浮絮状物）Rinsethecuvettewiththesolutiononceanddiscardbeforetakingeachmeasurement.用溶液漂洗比色皿一次并且在测量前丢弃这些漂洗液。
MeasureA520ofallofthesolutionswithin35minutesofcooling.
在35分钟之内将所有溶液测量520nm处吸光度。
Avoidspillsofninhydrinsolutionontheskin
bywearinglatexgloves;adeeppurplediscolorationwillresultfromexposureoftheskintoninhydrinsolution.戴上乳胶手套避免给皮肤上溅上茚三酮溶液，如果给皮肤上溅上茚三酮溶液，皮肤上会有深紫色的污点。
Calculations
A=A520-A520blank
iftheAvaluefora50mg/Lstandardis<0.600,theresultsshouldbeapprovedbyasupervisorbeforetheyaredistributedtotheactivefolder,samplesmayneedtobererun如果A（50mg/L的标准溶液）<0.600，在分发前应该经过主管审核，样品可能需要复检。
Proline（mg/L）=（Asample/Astandard）xC
WhereCistheconcentrationofthestandard（typically50mg/L）.
C是指标准溶液的浓度（50mg/L）
Forhighprolinefruitssuchascitrusandgrape,theresultsmustbemultipliedbythevolumedilutionfactor:
（dilutedvolume/aliquotvolume）象柑橘和葡萄等高脯氨酸含量的结果应该乘以体积稀释因子
Forfruitjuiceconcentratesandhoney,theresultsmustbemultipliedbythedilutionfactor:
（dilutedvolumemL/aliquotweightg）;theresultisthenexpressedinmg/kg.
象浓缩果汁和蜂蜜，结果应该乘以稀释因子，然后以mg/kg表示。
Reference
OfficialMethodsofAnalysisoftheAOAC
15thEd.（1990）
Method979.20
Worksheet
PROLINE
Sample#Date
SampleType
Analyst
SampleStandard
Dilution（w/v）
Dilution（v/v）
Tube#
BlankTube#
A520
A520blank
A520aAvaluefora50gm/Lstandardof<0.600shouldbeapprovedbyasupervisor
SampleProline
mg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kgmg/Lormg/kg
以上资
以上为精心整理的精品资料，可供您在工作中参考使用，以便于节省您的工作时间。
料仅供个人使用，不得用于商用。
以上为精心整理的精品资料，可供您在工作中参考使用,料仅供个人使用，不得用于商用。
以便于节省您的工作时间。
以上资
以上为精心整理的精品资料，可供您在工作中参考使用，以便于节省您的工作时间。
料仅供个人使用，不得用于商用。
以上资
以上为精心整理的精品资料，可供您在工作中参考使用,料仅供个人使用，不得用于商用。
以便于节省您的工作时间。
以上资
以上为精心整理的精品资料，可供您在工作中参考使用，以便于节省您的工作时间。
料仅供个人使用，不得用于商用。
以上资
升级会员 