土壤微生物的分离培养鉴定及菌落数的测定.docx
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土壤微生物的分离培养鉴定及菌落数的测定
吉林化工学院
科技性论文
题目：
土壤微生物的分离、培养、鉴定及菌落数的测定
学号：
********
******
年级：
2012级
学院：
化工与生物技术学院
专业：
生物工程
指导教师：
谢莹，许崇利（讲师）
完成日期：
2014年3月20日
摘要
土壤是矿物质、有机质和活的有机体以及水分和空气等的混合体。
按重量计，矿物质占到固相部分（土壤干重）的90~95%或更多，有机质约占1~10%，可见土壤成分以矿物质为主。
土壤有机质就是土壤中以各种形态存在的有机化合物。
除此之外还有土壤溶液，它是土壤水分及其所含的溶解物质和悬浮物质的总称。
土壤溶液是植物和微生物从土壤中吸收营养物的媒介。
土壤微生物就是土壤中主要的有机生命体，土壤微生物是指生活在土壤中的细菌、真菌、放线菌、藻类的总称。
其个体微小，一般以微米或毫微米来计算，通常1克土壤中有106～109个，其种类和数量随成土环境及其土层深度的不同而变化。
它们在土壤中进行氧化、硝化、氨化、固氮、硫化等过程，促进土壤有机质的分解和养分的转化。
本次实验是研究土壤中细菌、真菌、放线菌的数目。
我们利用选择培养基，以便在土壤水溶液中选出目的菌种，在用分浓度梯度法在选择培养基上培养出但菌落，以便计数。
计数时可以根据不同菌种的不同形态学特征来分辨，如果出现与上述三种以外特性的菌种可以用革兰氏染色鉴别。
关键词：
土壤微生物选择培养计数
Abstract
Soilisamixtureofminerals,organicmatterandlivingorganismsaswellaswaterandair.Byweight,forsolidmineral（soildryweight）of90~95%ormore,organicmatteraccountedforabout1~10%,visibleinmineralsoilcomposition.Organiccompoundsinsoilorganicmatteristhesoilinvariousforms.Inadditiontothesoilsolution,itisthefloorboardofsoilmoistureandthecontaineddissolvedsubstancesandsuspendedsubstances.Soilsolutionistoabsorbthenutrientsinplantsandmicroorganismsinsoilmedium.Organiclifeisthemainsoilmicroorganism,soilmicrobialreferstoliveinsoilbacteria,fungi,actinomycetes,algae.Theindividualsmall,generalwithmicronornanometertocalculate,usually1gramsofsoilin106~109,itsspeciesandquantityassoilenvironmentandsoildepthvaries.Theyareoxidation,nitration,ammoniation,nitrogenfixation,curingprocessinthesoil,promotethetransformationofsoilorganicmatterdecompositionandnutrient.
Thisexperimentistostudythenumberofsoilbacteria,fungi,actinomycetes.Weusetheselectiveculturemedium,inordertochoosetobacteriainthesoilsolutionintheculturemedium,butcoloniesonselectionbydensitygradientmethod,inordertocount.Countingaccordingtothedifferentmorphologicalcharacteristicsofdifferentstrainstodistinguish,ifappearwiththethreekindsofcharacteristicsofbacteriacandifferentialstainingwithgram.
Keywords:
soilmicrobialculturecounting
前言·······························································6
1材料与方法·······················································7
1.1材料····························································7
1.1.1菌株来源·······················································7
1.1.2培养基·························································7
1.1.3相关试剂的配制·················································7
1.1.4主要的实验药品与仪器···········································8
1.2实验方法························································8
1.2.1细菌分离·······················································8
1.2.2放线菌分离·····················································9
1.2.3霉菌分离·······················································9
2结果与讨论·······················································9
3结论···························································10
致谢·······························································10
文献参考···························································11
声明·······························································11
前言
土壤中含有大量的微生物,不同深度,不同地点的微生物含量,种类也大不相同,本次实验使用的是来自于玉龙山的15厘米深度的腐殖土,土壤溶液较多,微生物的含量及健康状况良好,是优良的实验材料.本次实验要观察土壤中细菌、真菌、放线菌的数目,以实验要求我们使用牛肉膏蛋白胨培养基,高氏一号培养基,马丁氏培养基来选择培养相应菌种.
考虑到本实验计数的目的,所以所有培养基均是固体培养基,且为了方便计数,从相关网站查到有关土壤平均含菌信息,制定出合理的浓度梯度,使之能在涂布培养后出现完全的单菌落.
1材料与方法
1.1材料
1.1.1菌种来源
土壤中细菌、真菌、放线菌,均由实验前各实验组同学取至玉龙山表层15厘米深的腐殖土.
1.2.2培养基
牛肉膏蛋白胨培养基:
牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、NaCl0.5g、琼脂1.5g、水100ml、pH7.2—7.4
高氏一号培养基:
可溶性淀粉20g，KNO31g，K2HPO40.5g，MgSO40.5g，NaCl0.5g，FeSO40.01g，琼脂20g，水1000ml,pH=7.2-7.4
马丁氏培养基：
KH2PO41g，MgSO40．5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，琼脂16g，水1000ml，链霉素溶液（10000U/ml）3.3ml（临用前加入）
1.1.3相关试剂的配制
牛肉膏蛋白胨培养基:
分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2/3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏至于另一小烧杯中，进行称量。
然后加入少量蒸馏水至于小烧杯中，加热融化，倒入上述烧杯中。
将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
加所需的琼脂与三角瓶中，再将定容好的培养基倒入三角瓶中，待溶液冷却后，用1mol/LNaOH溶液调pH=7.2-7.4。
然后分装，加塞，包装。
高压蒸汽灭菌20分钟。
高氏一号培养基:
称取可溶性淀粉，置于烧杯中，加入少量的蒸馏水；加热使其溶化，再分别量取KNO3，K2HPO4，MgSO4，NaCl。
然后加入上述烧杯中。
将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
加所需的琼脂与三角瓶中，再将定容好的培养基倒入三角瓶中，待溶液冷却后，用1mol/LNaOH溶液调pH=7.2-7.4。
然后分装，加塞，包装。
高压蒸汽灭菌20分钟。
马丁氏培养基：
分别称取培养基各组分所需，加入所需水量的2/3左右的蒸馏水于烧杯中；再将培养基营养物质加入其中，溶解。
将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。
加所需的琼脂与三角瓶中，再将定容好的培养基倒入三角瓶中，待溶液冷却后，用1mol/LNaOH溶液调pH=7.2-7.4。
然后分装，加塞，包装。
高压蒸汽灭菌20分钟。
临用前加热培养基至60度，按3.3ml/L加入链霉素溶液，迅速混匀。
1.1.4主要的实验药品与仪器
（1）实验药品:
牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/LNaOH，1mol/LHCl,可溶性淀粉，KNO3,K2HPO4,MgSO4，FeSO4，KH2PO4，葡萄糖
（2）实验仪器:
试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
1.2实验方法
1.2.1细菌分离：
取土样1g，加入99ml无菌水中，震荡10min，制成10-2土壤稀释液，再取0.5ml10-2土壤稀释液加入4.5ml无菌水中，制成10-3土壤稀释液，以此类推······。
取10-5，10-6，10-7土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。
在30度恒温培养箱中培养24h后观察结果。
1.2.2放线菌分离：
取土样1g，加入99ml无菌水中，震荡5min，制成10-2土壤稀释液，再取0.5ml10-2土壤稀释液加入4.5ml无菌水中，制成10-3土壤稀释液，以此类推······。
取10-3，10-4，10-5土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。
在28度恒温培养箱中培养5~7d后观察结果。
1.2.3霉菌分离：
取土样5g，加入95ml无菌水中，震荡5min，制成10-2土壤稀释液，再取0.5ml10-2土壤稀释液加入4.5ml无菌水中，制成10-3土壤稀释液，以此类推······。
将以灭菌的培养基融化，加入链霉素溶液，但培养基凝固后，取10-2，10-3，10-4土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。
在28度恒温培养箱中培养3~5d后观察结果。
2结果与讨论
当培养结束后，观察培养基上的菌落，由于本次试验的各种经济，效果，作用等等方面的原因，培养基并不能完全分离土壤中的各种菌类，例如，土壤中除了细菌，霉菌，放线菌外还有大量的杂菌，如：
酵母菌、真菌、藻类等，微生物，如：
各种寄生虫（卵）等，所以我们要根据细菌，放线菌，霉菌的宏观物理特性来分别。
当进行显微观察时，霉菌不用染色，放线菌、细菌要进行简单的染色，然后再显微镜下观察菌体形态。
菌落基本特征表
菌落特征
名称
形状
颜色
质地
表面光泽
与培养基结合程度
菌体形态
细菌
圆形
粉/白
硬
有
与培养基结合紧密
链状
支状
放线菌
边缘规则
黄/白
软
有
与培养基结合不紧密
杆状
霉菌
棉絮状
多种颜色
软
无
与培养基结合不紧密
纤维状
3结论
通过本次试验我们成功在土壤中分离出细菌，放线菌和霉菌，并成功从宏观物理状态分离出各个菌种，在显微观察后，使我们更了解这三种菌体在自然界中的状态，对我们今后的微生物学，生物学的学习有很大的帮助。
各种实验操作同样对今后的考研、学习、工作有不可磨灭的作用。
总的来说这次试验非常成功，受益良多。
致谢
衷心的感谢谢莹，许崇利老师在试验过程中及论文撰写过程中的精心指导，老师们的认真实验精神、对科研的热爱精神以及对学生的呵护指导都深深鼓舞着我。
在此我特向老师表示由衷的感谢！
参考文献
1.校园内部实验资料·····················吉林化工学院
2.XX书库···························
3.XX问问···························
4.校园图书馆···························吉林化工学院
5.校园电子图士馆·······················吉林化工学院
声明
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