P120ctn在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义.docx

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P120ctn在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义

P120ctn在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义

吴颖，刘文励，孙汉英，徐惠珍

【摘要】为了探讨连环蛋白P120（P120catenin，P120ctn）在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的表达及意义，采纳免疫组织化学染色的方式对照分析了40例NHL和10例反映性增生（RH）淋巴结的外科活检石蜡包埋组织切片中P120ctn的表达情形。

结果显示，在反映性增生淋巴结组织中未检测到P120ctn的表达；而在NHL中P120ctn的阳性检出率为55%（22/40），其中低度恶性及中高度恶性NHL组中的阳性检出率别离为％（2/12）、％（20/28），两组之间比较存在显著性不同（P＜）。

另外，在肿瘤血管内皮细胞上也发觉了p120ctn的阳性表达。

结论：

P120ctn的表达与NHL的恶性程度紧密相关，提示P120ctn在淋巴瘤的恶性增殖进程中可能发挥着重要作用，这对淋巴瘤的诊断和医治可能具有必然的意义。

【关键词】非霍奇金淋巴瘤

　　ExpressionofP120ctninNon-Hodgkin’sLymphomaandIts

Significance

　AbstractToevaluatetheexpressionofP120ctninnon-Hodgkin’slymphoma（NHL）andtoexploreitsclinicalsignificance，immunohistochemistrystainmethodwasappliedtocomparativelyinvestigatetheproteinexpressionofP120ctninparaffin-embeddedlymphnodetissueslicesfrom40casesofNHLand10casesofreactivehyperplasiaoflymphnode.TheresultsshowedthatP120ctnwasnotdetectedinreactivehyperplasiaoflymphnode，butwasdetectedin55%（22/40）casesofNHL.P120ctnexpressionincreasedwiththetumormalignancyofNHL，therewasasignificantdifferencebetweentheexpressionratesofP120ctninlowgrade%，2/12）andintermediatetohighgrademalignant%，20/28）NHL（P<.Moreover，P120ctnwasalsodetectedinvascularendothelialcellsofNHL.ItisconcludedthatthelevelofP120ctnexpressioniscloselyrelatedtothemalignantgradeofNHL，itsuggeststhatP120ctnpossiblyplaysanimportantroleinthemalignantproliferationoflymphomawithacertainsignificanceindiagnosisandtherapyoflymphoma.

　　Keywordsnon-Hodgkin’slymphoma;P120ctn;

immunohistochemistry

　　连环蛋白（catenin）是一组细胞内糖蛋白，包括α、β、γ和P1204大类。

它们的分子中均具有重复的armadillo样结构，并通过那个结构与钙粘蛋白的胞内段结合，形成钙粘蛋白－连环蛋白复合体（cadherin-catenincomplex，CCC），CCC对维持细胞的正常信号转导和粘附功能是必需的。

当细胞发生癌变时，这些分子在细胞内的表达和散布发生异样，即发生转位［1］。

P120ctn是新近发觉的连环蛋白成员，它的一端与E-cadherin的胞内段近膜区结合，而另一端可能与Kaiso转录因子结合，对基因转录起调控作用［2］，可是二者在基因转录中的详细作用机制未明。

P120ctn对E-cadherin介导的细胞内信号转导和细胞黏附起调剂作用［3，4］，这些信号分子与肿瘤的发生、进展及转移有紧密的关系。

咱们采纳免疫组织化学SP法研究了P120ctn在NHL淋巴结病理组织中的表达情形，并以反映性增生淋巴结作为对照，初步探讨P120ctn在NHL中的可能作用及意义。

　　材料和方式

　　标本搜集

　　搜集2001年9月-2005年3月同济医院病理科的NHL存档蜡块共40例，所有标本常常规染色和免疫表型研究后确诊，其中男18例，女22例，年龄12-68岁，中位年龄42岁。

依照2000年淋巴组织肿瘤WHO分类标准及分类中各类型侵袭性划分标准进行病理分型，其中低度恶性组12例为惰性淋巴瘤，中高度恶性组28例为侵袭性淋巴瘤。

免疫组织化学证明25例为B细胞性NHL，15例为T细胞性NHL。

另取同期保留的10例反映性增生淋巴结作为对照。

　　P120ctn蛋白的免疫组织化学染色

　　石蜡包埋组织持续切片，厚3-5μm。

采纳链霉素抗生物素蛋白－过氧化酶SP法，一抗为鼠抗人P120ctn单克隆抗体（SantaCruz公司），工作浓度为1∶20，SP试剂盒及DAB显色剂均购于北京中山生物技术。

切片脱蜡至水；微波煮沸抗原修复2次各5分钟；3%H2O2甲醇溶液阻断内源性过氧化物酶，37℃孵育30分钟；非免疫动物血清室温封锁30分钟；滴加一抗，4℃留宿；滴加二抗，37℃孵育30分钟；滴加酶结合物，37℃孵育30分钟，DAB显色，苏木素复染、分化、促蓝、透明、封片。

将已知阳性的乳腺癌切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗，作为阴性对照。

　　免疫着色评估

　　P120ctn蛋白阳性染色定位于胞浆，可伴有胞核着色。

每张切片选取5个有代表性的高倍镜视野（400×），每一个视野随机计数300个肿瘤细胞，计算1500个肿瘤细胞中P120ctn阳性细胞百分率，对滤泡性淋巴瘤只计数滤泡内肿瘤细胞，按阳性细胞百分率分为：

<5%为阴性，≥5%为阳性。

　　统计学分析

　　运用SPSS统计分析软件进行χ2查验，查验水准α设为。

　　结果

　　良性淋巴结组织中P120ctn的表达情形

　　在反映性增生淋巴结组织中，P120ctn的阳性检出率为0％（0/10）（图1）。

　　NHL肿瘤细胞中P120ctn的表达情形及与临床病理特点的关系

　　在NHL病理组织标本中，淋巴结的正常结构被破坏，P120ctn要紧在肿瘤细胞中表达，阳性染色定位于胞浆，可伴有胞核着色（图2）。

在肿瘤血管内皮细胞上也显现了P120ctn的阳性表达（图3）。

P120ctn在NHL中的阳性检出率为55％（22/40），随着NHL恶性程度的增加，P120ctn的表达水平增高，在低度恶性组中的阳性表达率（%，2/12）明显低于中高度恶性组的阳性表达率％，20/28），两组之间比较有显著性不同（P＜）。

不同免疫分型（Ｔ细胞性和Ｂ细胞性）、首发部位（结内和结外）、性别及年龄之间表达水平不同无统计学意义（P>，见附表。

Table.ExpressionofP120ctninNHLandtherelationwithclinicalpathologicalfeature（略）　　讨论

　　P120ctn最初是作为src癌蛋白的底物而被发觉的，现被以为是一种与癌细胞侵润和转移有关的连环蛋白。

已证明连环蛋白是细胞信号转导分子和黏附分子，参与由上皮型钙黏着蛋白（E-cadherin）介导的细胞内信号转导，在细胞黏附、增殖和细胞运动进程中起重要作用。

在细胞内，4种连环蛋白（α、β、γ和P120）均能与E-cadherin的胞内肽段结合，β和γ连环蛋白呈互斥方式与E-cadherin结合，它们的另一端与α连环蛋白结合，后者与肌动蛋白细胞骨架结合，如此就形成了钙黏着蛋白－连环蛋白复合体。

P120ctn在细胞内也能与E-cadherin结合，但不同于β和γ连环蛋白，它的结合位点在E-cadherin高度保守的近膜区（JMD），而其另一端并非与α连环蛋白或抑癌蛋白APC（adenomatouspolyposiscoli）结合。

P120ctn的缺失并无明显阻碍E-cadherin的合成率，却增进了E-cadherin的降解［5］，它是E-cadherin稳固停留在细胞膜上所必需的［6］。

E-cadherin表达及功能的调剂在肿瘤的形成和转移中起着重要作用［7］。

P120ctn可能与β连环蛋白一样，作为一种癌基因阻碍着基因转录；也可能以抑癌基因样作用干与E-cadherin介导的细胞黏附和信号转导活动［8，9］。

P120ctn可因不同的剪接方式而具有32种同工蛋白之多，它普遍表达于上皮组织、内皮组织、心肌细胞和神经系统中［10］，并存在组织特异性。

最近几年来，国外已有很多文献报导了在多种恶性肿瘤中均发觉了P120ctn的异样表达，但对它在恶性淋巴瘤中的研究却很少。

本研究应用免疫组织化学染色方式对40例不同恶性程度NHL的P120ctn进行检测，结果显示P120ctn的表达与NHL免疫分型和患者的临床病理特点如性别、年龄、首发部位等无明显相关性。

P120ctn在低度恶性组的表达率明显低于中高度恶性组，提示P120ctn在淋巴瘤的侵袭浸润及进展中可能起到重要作用，可作为判定淋巴瘤恶性程度高低的参考指标之一。

在正常淋巴组织中，P120ctn不表达，此结果与Mo等［11］的研究结果大体相符，由于P120ctn特异性表达于淋巴瘤组织而在正常淋巴组织不表达的特点，可能成为淋巴瘤医治的新靶标。

但P120ctn对NHL预后判定的意义，还有待尔后进一步结合临床观看和随访证明。

实验中还发觉P120ctn在肿瘤血管内皮细胞中也有表达，提示P120ctn在血管形成中可能具有必然作用。

Xiao等人［12］研究发觉，P120ctn能调剂VE-cadherin在血管内皮细胞中的表达和功能，从而成为血管内皮细胞黏附的调剂因子，但这是不是是P120ctn在肿瘤血管形成中的作用还有待进一步研究。

在正常上皮组织中，P120ctn表达以细胞膜尤其是细胞－细胞连接处为主，胞浆表达微弱，胞核不表达，而在其癌组织和癌细胞中那么表现为胞浆或（和）胞核表达，胞膜表达减弱或消失，说明癌细胞中信号分子已显现转位或从头散布，即失去正常的信号传递和黏附功能，可能会表现出转移行为。

而这一机制并非能完全说明P120ctn在恶性淋巴瘤中的作用机制。

在咱们的研究中，能够以为P120ctn是肿瘤转移的增进因子，但其作用机制并非清楚。

至于表达缺失P120ctn的癌细胞，这些分子是如何消失的或如何“跑到”别的部位如胞核的，尚有待尔后进一步探讨。

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