完整word版Agilent1260安捷伦高效液相色谱仪使用清洁及维护保养操作规程.docx

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完整word版Agilent1260安捷伦高效液相色谱仪使用清洁及维护保养操作规程

Agilent1260（四元泵）高效液相色谱仪

使用、清洁及维护保养操作规程

Agilent1260（四元泵）高效液相色谱仪

使用、清洁及维护保养操作规程

1目的

建立1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程，规范人员操作。

2适用范围

适用于Agilent（四元泵）高效液相色谱仪的使用与维护。

3责任与监督

检验人员负责执行本规程，部门负责人监督本规程的实施。

4规程细则

4.1仪器原理

高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.2仪器操作

4.2.1系统组成：

本系统由四元梯度泵、VWD检测器、自动进样器、柱温箱及OpenlabChemstation工作站和台式电脑等组成。

4.2.2操作前准备：

4.2.2.1流动相的选择

分类：

组成分——单组分和多组分

极性-极性、弱极性、非极性

常用溶剂：

甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等。

（溶剂最好为HPLC级，水为纯化水）

其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相，通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效果。

4.2.2.2流动相的选择

为了除去流动相中的杂质，保护系统和色谱柱，在流动相使用完，装入新的溶剂前应使用抽滤瓶对溶剂进行过滤。

4.2.2.3流动相的超声与脱气

为了除去溶解在流动相中的气泡，降低基线噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声10-15min左右。

对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。

4.2.2.4流动相冷却

流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中的溶剂也会被加热。

加热后的流动相进入液相系统和色谱柱后，会影响基线噪声的增加，使平稳时间延长。

4.2.3开机与关机

4.2.3.11260HPLC及化学工作站开机使用与关机

4.2.3.2Agilent1260HPLC化学工作站开机步骤

Ø打开计算机

Ø打开主机各模块电源（不分先后），再双击仪器联机图标，进入Agilent1260LC化学工作站；

Ø旋开泵上的排气阀（逆时针），将工作站中的泵流量设到5ml/ml（右键点击泵，选择方法），溶剂设到100%，单击“确定”，排除管线中气体约5min。

Ø若是使用多元泵，则依次切换到B,C,D溶剂分别排气；

Ø关闭排气阀，检查柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀滤芯/过滤白头；

Ø将工作站中的泵流量设到1ml/min，再设定溶剂比例，如：

A=20%,B=80%，冲洗色谱柱30min左右至基线平稳；

Ø单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）并勾选“操作项”中的两个对话框，单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。

Ø待柱前压力基本稳定后，打开柱温箱，检测器灯（右键点击DAD图标选择控制，打开氘灯）；

Ø右键点击VWD图标，点击方法，设置VWD信号，设定波长（例如254nm）；

Ø点击视图/在线信号/信号窗口1，打开监视窗口，观察基线情况；

4.2.4数据采集

4.2.4.1采集方法编辑

Ø编辑完整方法：

从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”进入下一画面。

Ø方法信息：

在“方法注释”栏中加入（如方法的用途等），单击“确定”进入下一画面。

Ø泵参数设定：

在“流速”处输入方法所需流量（如1ml/min）；默认为A为100%，如需二元高压，在“溶剂B”处输入所需比例，则溶剂A=100-B，也可“插入”一行“时间表”编辑二元梯度；在“压力限”处输入柱子的最大耐高压（建议设定200bar）以保护柱子，单击“确定”进入下一画面。

ØVWD检测器参数设定：

在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm；在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间（如>0.1min（2s））；如有特殊要求，也可在“时间表”中可以“插入”一行输入随时间切换的波长（如1min波长=300nm），点击“确定”。

Ø在“运行时选项表”中选中“数据采集”选项，单击“确定”。

Ø单击“方法”菜单选中“方法另存为”输入方法名（如：

阿替洛尔有关物质），单击“确定”。

Ø进样器参数设定：

在进样模式中输入“进样量”xxμl，默认为20μl。

“标准进针”只能输入进样体积，此方式无洗针功能。

“针清洗后进样”可以输入进样体积和洗瓶位置为xx，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶（洗瓶中的溶剂建议用流动性或溶解能力更好的溶解）中洗一下针的外壁，然后进样。

4.2.4.2运行方法

Ø单针进样

●选择“单针进样”图标

●从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入“操作者名称”，数据存储目录路径中的子目录，子目录即为数据图谱存储的文件夹，输入后，鼠标点击其他地方，会自动弹出“E：

\——不存在，要创建它吗？

”，单击“确定”。

“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。

（区别：

“手动”--每次做样之前必须给出新名字，否则仪器会将上次的数据覆盖掉；“前缀/计数器”在“前缀”框中输入前缀，如20120505，在“计数器”框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名如20120505000001、20120505000002等等。

）“样品位置”填写进样瓶的位置。

●点击画面中的“开始”运行方法，中间停止采样点“结束”。

Ø序列进样

●点击“视图”下“首选项”设定数据存储路径，然后点击“序列”下“序列参数”，选择所需的数据存储路径和（或）子目录。

●“序列”下选择“序列表”，在表格中可进行“插入”、“剪切”“复制”“粘贴”“追加行”等操作，表格中必须填写“样品瓶”“样品名称”“方法名称”“进样次数”“数据文件”“进样量”等信息，其他信息可选择编辑。

编辑完成后，单击“确定”。

在“序列菜单中选择”“序列模板另存为”为新建序列命名（如：

阿替洛尔有关物质-长期6月）。

●在“仪器”菜单中选择“运行序列”运行当前序列。

停止采集数据选择“仪器”菜单中“停止运行/进样/序列”。

或者同单针进样的方法。

4.2.5数据处理

4.2.5.1从“视图”菜单中单击“数据分析”进入数据分析画面。

4.2.5.2从“文件”菜单选择“调用信号”选中所做的数据文件，单击“确定”，也可直接双击打开。

4.2.5.3做谱图优化：

从“图形”菜单中选择“信号选项”，再从“范围”中选择“自动量程”及合适的显示时间单击“确定”或选择“自定义量程”调整，反复进行直到图的比例合适为止。

4.2.5.4积分优化

Ø从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，再从菜单中选“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”、“峰宽”、“最小峰面积”、“最小峰高”。

Ø从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。

Ø如积分结果还不理想，则修改相应的积分参数直到满意为止。

Ø单击左边“保存并退出”图标将积分参数存入当前方法中。

4.2.6报告打印

4.2.6.1从“报告”菜单选择“设定报告”选项。

4.2.6.2单击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角选中所采用的的报告方法（如面积外标法等），单击“确定”。

4.2.6.3从“报告”菜单中选择“打印”则报告打印结果将显示在屏幕上，如想输出到打印机，则单击“报告”底部的“打印”钮即可。

4.2.7关机

4.2.7.1关机前，用10%甲醇水（或10%乙腈水）冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.5-l.0ml/min，再用90%甲醇水（或90%乙腈水）冲0.5小时，然后关闭系统。

4.2.7.2退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。

4.2.7.3关掉主机电源开关。

4.2.8注意事项

4.2.8.1氘灯是易耗品，分析前应最后开灯，不分析样品时应及时关闭氘灯。

4.2.8.2流动相不要使用多日存放的蒸馏水，一般不易超过三天（易长菌），影响基线平衡。

4.2.8.3仪器使用后，应用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量1.0ml/min，再用100%有机相（甲醇）冲洗0.5小时。

4.2.8.4开机时，打开排气阀。

设置流动相比例为100%，泵流速为5.0ml/min，若此时显示压力＞10bar，则应该更换排气阀里的过滤白头。

。

4.2.8.5流速突然变大或突然变小会导致柱压力的突然改变，时间久了柱子填料会塌陷或松动，最终柱压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变流速。

4.2.8.6纯盐相不要隔夜使用，要当日配当日用，且最好盛放在棕色的流动相瓶（可以在一定程度上已知菌类的生长速度）中。

5修订历史

6附图与附表

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7附件

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8参考或引用文件

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