PCR荧光定量检测记录.docx

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PCR荧光定量检测记录

PCR荧光定量检测记录

编号：

RE-ZL-TY-082NO:

1、样本信息

样本编号

姓名

住院号

年龄

血液状态（良好√；异常×）

备注

备注

血清提取仪器：

SC-3610低速离心机

乙型肝炎病毒（HBV）检测

使用仪器

PCR仪器：

；高速离心机：

；

恒温金属浴：

；5-50μL移液枪：

；

20-200μL移液枪：

；100-1000μL移液枪：

；

试剂盒来源：

中山大学达安基因股份有限公司；批号：

；

将待测样本与阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV临界阳性质控品、阳性定量参考品进行同步处理。

在1.5ml的无菌离心管内加入200µl样品；再加入450µlDNA提取液，盖紧管盖，漩涡振荡15秒以充分混匀，瞬时离心数秒，100℃10±1分钟恒温处理。

取出后12000转离心5分钟；离心管内即为病毒核酸溶液，吸取样本及阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV临界阳性质控品、阳性定量参考品核酸溶液各20µl加入到PCR反应管中，盖紧管盖，8,000rpm离心数秒后转移至扩增区检测，以循环扩增条件：

93℃2分钟；93℃45秒→55℃60秒，10个循环；93℃30秒→55℃45秒（收集荧光），30个循环进行扩增。

扩增曲线

标准曲线

孔位号

样本名称

样本ID

样本类型

标准浓度

计算浓度

Ct值

结论

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HBV标准

2.00e+03

HBV标准

2.00e+04

HBV标准

2.00e+05

HBV标准

2.00e+06

备注

样本DNA浓度＜500UI/ml则低于检测下限；浓度≥500UI/ml则高于检测下限

检验人：

复核人：

检验日期：

复核日期：

丙型肝炎病毒（HCV）检测

使用仪器

PCR仪器：

；高速离心机：

；

恒温金属浴：

；5-50μL移液枪：

；

20-200μL移液枪：

；100-1000μL移液枪：

；

试剂盒来源：

中山大学达安基因股份有限公司；批号：

；

将待测样本与阴性质控品、HCV强阳性质控品、HCV临界阳性质控品进行同步处理。

在1.5ml的无菌离心管内加入50µl的蛋白酶K；取样本200µl加入离心管中；再加入200µl的裂解工作液（即已含CarrierRNA的病毒裂解液），盖紧管盖，漩涡振荡15秒以充分混匀，高速离心10秒（防止温育时产生气泡），72℃10分钟。

同时可将洗脱液置于72℃预热；再加入250µl无水乙醇，盖紧管盖，振荡15秒；将混合液全部吸至离心柱，室温下12,000rpm离心1分钟，将离心柱装至新的收集管；将500µl的抑制物去除液加入离心柱，室温下12,000rpm离心1分钟，将离心柱装至新的收集管；将500µl的去离子液加入离心柱，室温下12,000rpm离心1分钟，将离心柱装至新的收集管；再次将500µl的去离子液加入离心柱，室温下12,000rpm离心1分钟，将离心柱装至新的收集管；将离心柱-收集管于室温下14,000rpm离心3分钟以除去残余的乙醇；将离心柱取出，放置于新的1.5ml离心管。

打开离心柱盖子，72℃放置2分钟（使用干式恒温器，不能使用水浴锅）；在离心柱的膜的正上方小心加入72℃预热的洗脱液35µl，盖紧离心柱管盖,室温静置1分钟后，14,000rpm离心1分钟，离心管内即为病毒核酸溶液，吸取核酸溶液及HCV阳性定量参考品各20µl加入到PCR反应管中，盖紧管盖，8,000rpm离心数秒后转移至扩增区检测。

，以循环扩增条件：

50℃15分钟，1个循环；95℃15分钟，1个循环；94℃15秒→55℃45秒（收集荧光），45个循环进行扩增。

扩增曲线

标准曲线

孔位号

样本名称

样本ID

样本类型

标准浓度

计算浓度

Ct值

结论

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HCV标准

1.00e+04

HCV标准

1.00e+05

HCV标准

1.00e+06

HCV标准

1.00e+07

备注

样本RNA浓度＜80UI/ml则低于检测下限；浓度≥80UI/ml则高于检测下限

检验人：

复核人：

检验日期：

复核日期：

人类免疫缺陷病毒病毒（HIV）检测

使用仪器

PCR仪器：

；高速离心机：

；

恒温金属浴：

；5-50μL移液枪：

；

20-200μL移液枪：

；100-1000μL移液枪：

；

试剂盒来源：

中山大学达安基因股份有限公司；批号：

；

将待测样本与阴性质控品、HIV强阳性质控品、HIV临界阳性质控品进行同步处理。

在1.5ml的无菌离心管内加入50µl的蛋白酶K；取样本200µl加入离心管中；再加入200µl的裂解工作液（即已含CarrierRNA的病毒裂解液），盖紧管盖，漩涡振荡15秒以充分混匀，高速离心10秒（防止温育时产生气泡），72℃10分钟。

同时可将洗脱液置于72℃预热；再加入250µl无水乙醇，盖紧管盖，振荡15秒；将混合液全部吸至离心柱，室温下12,000rpm离心1分钟，将离心柱装至新的收集管；将500µl的抑制物去除液加入离心柱，室温下12,000rpm离心1分钟，将离心柱装至新的收集管；将500µl的去离子液加入离心柱，室温下12,000rpm离心1分钟，将离心柱装至新的收集管；再次将500µl的去离子液加入离心柱，室温下12,000rpm离心1分钟，将离心柱装至新的收集管；将离心柱-收集管于室温下14,000rpm离心3分钟以除去残余的乙醇；将离心柱取出，放置于新的1.5ml离心管。

打开离心柱盖子，72℃放置2分钟（使用干式恒温器，不能使用水浴锅）；在离心柱的膜的正上方小心加入72℃预热的洗脱液50µl，盖紧离心柱管盖,室温静置1分钟后，14,000rpm离心1分钟，离心管内即为病毒核酸溶液，吸取核酸溶液及HIV阳性定量参考品各20µl加入到PCR反应管中，盖紧管盖，8,000rpm离心数秒后转移至扩增区检测。

，以循环扩增条件：

50℃15分钟，1个循环；95℃15分钟，1个循环；94℃15秒→55℃45秒（收集荧光），45个循环进行扩增。

PCR扩增曲线

标准曲线

孔位号

样本名称

样本ID

样本类型

标准浓度

计算浓度

Ct值

结论

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV

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□低于检测下限

□高于检测下限

HIV标准

1.00e+04

HIV标准

1.00e+05

HIV标准

1.00e+06

HIV标准

1.00e+07

备注

样本RNA浓度＜500UI/ml则低于检测下限；浓度≥500UI/ml则高于检测下限

检验人：

复核人：

检验日期：

复核日期：