消毒剂消毒效果及有效期验证方案Word文档下载推荐.docx

消毒剂消毒效果及有效期验证方案Word文档下载推荐.docx

《消毒剂消毒效果及有效期验证方案Word文档下载推荐.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《消毒剂消毒效果及有效期验证方案Word文档下载推荐.docx（23页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

1.4.为了确认消毒剂的消毒效力，通过实验室考察部分和现场考察部分分别进行验证。

实验室考察部分，定量悬浮试验法适用于浸泡或液封方式的消毒方法；

表面实验法适用于擦拭或喷洒方式的消毒方法。

洁净区设施表面材质有不锈钢、镀锌板及玻璃三种，故表面试验法选用不锈钢载片、镀锌板及玻璃载片模拟洁净区设施表面进行验证试验。

现场考察试验部分选择冻干车间的配液间（C级洁净区）、灌装间（A/B级洁净区）、灌装间操作人员手部消毒前和消毒后分别进行取样，测定其微生物数量。

1.5.A/B级洁净区使用的消毒剂需经0.22μm除菌过滤。

2.验证范围

本验证方案适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手（手套）的消毒等。

3.验证目的

通过消毒剂消毒效果及有效期的确认，科学制订消毒程序，以保证各洁净级别的操作间及设备外表面、人员手部按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒防止污染的效果。

4.验证参考文件

《药品生产验证指南》（2003版）；

《医疗机构消毒技术规范》（2012年版）；

《中国药典》（2010年版）；

《药品GMP指南-无菌药品》、《现代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术》。

5.验证小组名单

组长

姓名

职务/职称

部门

***

经理

质量部

成员

车间主任

生产部

QC主管

QC

QA主管

6.验证小组职责

7.验证内容

7.1.验证前参与实施验证的人员必须已经接受本方案的培训且考核合格。

见附表1。

7.2.验证前准备

7.2.1.菌种

7.2.1.1.试验微生物以金黄色葡萄球菌作为细菌繁殖体中化脓性球菌的代表；

大肠杆菌作为细菌繁殖体中肠道菌的代表；

白色念珠菌作为致病性真菌的代表。

在上述规定的菌、毒株的基础上，根据消毒剂特定用途或试验特殊需要，还可增选其他菌、毒株。

7.2.1.2.75%乙醇、2%甲酚皂为中效消毒剂，0.1%新洁尔灭为低效消毒剂，均不具备杀灭细菌芽孢功能，根据上述内容，本次验证所用菌种见下表：

序列号

类别

金黄色葡萄球菌

CMCC（B）26003

细菌

大肠埃希菌

CMCC（B）44102

4

白色念珠菌

CMCC（F）98001

真菌

7.2.1.3.可接受标准：

标准菌种必须来源可靠、来源可溯、保存方法与条件合适。

使用的标准菌种不能超过第五代。

7.2.1.4.应确认菌种名称、来源、代数，见附表2。

7.2.2.试剂及培养基

7.2.2.1.选用培养基见下表：

备注

营养琼脂培养基

121℃，15min灭菌备用

玫瑰红钠琼脂培养基

胰酪胨大豆琼脂培养基

7.2.2.2.稀释液、冲洗液：

0.9%无菌氯化钠溶液、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

7.2.2.3.可接受标准：

所有试剂、培养基的规格、数量和保存条件满足要求，且在有效期内；

脱水培养基呈流动粉末状，无结块，无潮解，且在有效期内。

7.2.2.4.试剂/培养基检查确认记录见附表3。

7.3.消毒剂配制：

按《清洁剂、消毒剂的配制与使用标准操作程序》进行消毒剂配制。

7.4.定量悬浮试验

7.4.1.目的：

0.1%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液、2%甲酚皂溶液消毒效力的确认（定量悬浮试验法）。

7.4.2.菌液制备：

取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌接种于营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h即得，培养后微生物浓度应不少于105cfu/ml。

取白色念珠菌接种于改良马丁液体培养基中，于23～28℃培养24～48h即得，培养后微生物浓度应不少于105cfu/ml。

7.4.3.将配制好的0.1%新洁尔灭溶液（或75%乙醇溶液或2%甲酚皂溶液）按9ml/支分注于27支无菌具塞试管中，按照“5分钟组”、“10分钟组”和“15分钟组”共3组每组9支，进行分组编号。

7.4.4.取供试菌液（105cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液，105cfu/ml的大肠埃希菌菌液，105cfu/ml的白色念珠菌菌液）1ml按照下表，分别接入到盛有9ml0.1%新洁尔灭溶液（或75%乙醇溶液或2%甲酚皂溶液）的试管中（已进行10倍稀释），轻轻摇动，混合均匀，并立即开始计时。

菌种名称

5分钟组

10分钟组

15分钟组

1ml/支，共3支

7.4.5.试验方法

分别在5分钟、10分钟和15分钟取接种细菌的消毒液，倾入过滤杯滤过，然后各用0.9%无菌生理盐水50ml清洗滤膜，滤过，重复用50ml0.9%无菌生理盐水的洗涤共3次。

取下滤膜，含细菌的膜放入营养琼脂平板内，含真菌的膜放入玫瑰红钠琼脂平板内，含菌膜面向上。

细菌于30-35℃的生化培养箱内培养3天，真菌于23-28℃的霉菌培养箱内培养5天。

培养后在明亮处，对平板上的菌落数进行计数，记录计数结果。

7.4.6.阳性对照

分别将105cfu/ml金黄色葡萄球菌菌液、105cfu/ml大肠埃希菌菌液、105cfu/ml的白色念珠菌菌液逐级稀释至浓度为10～100cfu/ml，取稀释菌液1ml于平皿中，倾注冷却至45℃营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基混匀，待凝固后于细菌于30-35℃的生化培养箱内培养3天，真菌于23-28℃的霉菌培养箱内培养5天。

培养结束后对平板上的菌落数进行计数，记录计数结果。

0.1%新洁尔灭溶液消毒效力确认记录见附表4

75%乙醇溶液消毒效力确认记录见附表5

2%甲酚皂溶液消毒效力确认记录见附表6

7.5.表面实验

7.5.1.目的:

由于75%乙醇溶液、0.1%新洁尔灭溶液要通过擦拭消毒，故选用不锈钢载片及玻璃载片进行表面试验法，确定其消毒效力是否符合要求。

7.5.2.工作菌液制备同7.4.2.项下菌液制备。

7.5.3.染菌不锈钢载片制备：

将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌含菌量为1×

108~5×

108CFU/ml的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。

滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。

每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片；

染菌玻璃载片制备：

因培养皿的材质为玻璃，故用培养皿代替玻璃载片进行染菌试验。

进行菌液滴染前，用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积（50mm×

50mm），标注清晰。

菌液滴染操作同染菌不锈钢载片制备。

7.5.4.取样

7.5.4.1.试验组：

将消毒剂擦拭在制备好的染菌载片上，消毒剂作用时间分别为5min、10min、15min，不锈钢载片、镀锌载片及玻璃载片每个作用时间分别制备2个。

作用结束后，用接触碟取样（接触碟规格：

?

55mm，取样面积为25cm2）。

取金黄色葡萄球菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟；

取大肠埃希菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟；

取样白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟。

接触碟取样方法：

打开接触碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触10秒左右，盖上碟盖。

7.5.4.2.对照组：

对照组的活菌浓度同工作菌液的制备。

阴性对照：

用接触碟在已灭菌的载片上（未染菌片的载片）按压取样，操作同上。

每种载片及每种接触碟平行制备两份。

7.5.5.培养：

将取样金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的接触碟倒置于30～35℃培养3天计数；

取样白色念珠菌的接触碟倒置于23～28℃培养5天计数计数。

7.5.6.结果计算：

计算试验组和对照组的活菌浓度?

（CFU/ml），并换算为对数值（N），并按下式计算杀灭对数值：

杀灭对数值?

（KL）＝对照组平均活菌浓度的对数值（NO）－试验组活菌浓度对数值（NX）

7.5.7.可接受标准：

（KL）应不低于3个对数单位。

75%乙醇溶液、0.1%新洁尔灭溶液消毒效力确认（表面实验）见附表7。

7.6.消毒效力现场考察试验

7.6.1.目的：

确认消毒剂对相应设施的实际消毒效力。

7.6.2.操作：

生产车间岗位操作人员按照《洁净区操作间清洁标准操作程序》、《洁净区水池、地漏清洁标准操作程序》、《洁净区人员手部卫生清洁标准操作程序》、《洁净区清洁用具清洁标准操作程序》、《洁净区工作服清洁标准操作程序》进行清洁消毒。

分别选取如下试验现场：

7.6.2.1.冻干车间的配液间（C级洁净区）顶棚、墙面、地面、工作台面，地漏、水池；

7.6.2.2.冻干车间的灌装间（A/B级洁净区）顶棚、墙面、地面、工作台面、设备表面；

7.6.2.3.冻干车间灌装间（A/B级洁净区）操作人员手部；

7.6.2.4.冻干车间B级洁净区的工作鞋、清洁布、拖布。

7.6.3.取样检测

7.6.3.1.消毒15分钟后，由QC人员到试验现场，按照《冻干C线洁净区（室）表面微生物监测标准操作程序》进行洁净区表面微生物的取样检测；

7.6.3.2.用浸泡或液封方式（地漏、水池、工作鞋、洁净布、拖布）的采用无菌吸管取浸泡液或液封液1ml，于胰酪胨大豆琼脂培养基平板培养；

7.6.3.3.灌装间（A/B级洁净区）操作人员，采用75%乙醇进行手部消毒。

将配制好并经过0.22μm除菌过滤的75%乙醇盛装于喷壶中，灌装间操作人员在生产开始时进行手消毒，间隔5分钟、10分钟、15分钟、20分钟分别进行手指菌取样。

7.6.3.4.连续逐日测定，共测定3次。

记录测定结果。

7.6.4.可接受标准：

所监测的洁净区的微生物均符合各自的洁净级别要求。

洁净度级别

表面微生物

接触碟cfu/碟（设备、设施、工作服）

5指手套cfu/手套

A级

＜1

B级

5

C级

25

——

D级

50

75%乙醇溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表8

0.1%新洁尔灭溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表9

2%甲酚皂溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表10

75%乙醇用于手消毒效果实验记录见附表11

7.7.消毒剂储存有效期确认试验

7.7.1.目的：

通过该试验，确定消毒剂在有效期内是稳定的，并且消毒效力不会发生变化，符合要求。

7.7.2.程序：

7.7.2.1.在进行消毒剂有效期确认时，每天开启装消毒剂的容器（具塞磨口玻璃瓶、手消毒器、消毒液喷壶）不少于3次，其每次开启时间在1~2分钟，以模拟实际操作的最差条件。

7.7.2.2.分别在消毒剂储存的第3天、第5天、第7天、第10天进行取样，进行消毒剂消毒效力的确认。

7.7.2.3.结果计算：

7.7.2.4.可接受标准：

在消毒液有效期末，杀灭对数值?

消毒剂储存有效期确认记录见附表12

8.结论与评价

得出最终结论，并对此验证进行总评价。

9.再验证周期

验证小组负责依据消毒剂消毒效果及存放时限验证的情况，拟订消毒剂消毒效果及存放时限再验证周期，报验证委员会审批。

当出现以下情况是需立即重新进行验证：

9.1.消毒液浓度发生改变时。

9.2.增加新的消毒液时。

9.3.环境检测中发现新的污染菌，不属于实验中的代表菌属时。

9.4.消毒时间发生变化时。

附表1人员培训记录

日期

时间

培训内容

《消毒剂消毒效果及存放时限验证方案》

《清洁剂、消毒剂的配制与使用标准操作程序》

参与人员

考核结果

记录人

复核人

附表2标准菌种检查确认记录

菌种编号

来源

工作菌种代次

工作菌种保存条件

有效期至

可接受标准

1.标准菌种必须来源可靠、来源可溯、保存方法与条件合适。

2.使用的标准菌种不能超过第五代。

结论

检查人

附表3试剂/培养基检查确认记录

名称

规格

供应商名称

试剂批号

失效日期

玫瑰红钠琼脂

培养基

胰酪胨大豆

琼脂培养基

氯化钠

pH7.0氯化钠蛋白胨

缓冲液

95%乙醇

甲酚皂

新洁尔灭

附表40.1%新洁尔灭溶液消毒效力确认

与消毒剂作用时间

试验组菌落数（cfu/ml）

10-1

平均菌落数（cfu/ml）

杀菌率

5分钟

10分钟

15分钟

阳性对照

稀释级

10-3

10-4

10-5

确认结果评价：

操作人

日期

附表575%乙醇溶液消毒效力确认

附表62%甲酚皂溶液消毒效力确认

附表775%乙醇溶液、0.1%新洁尔灭溶液

消毒效力确认（表面实验）

消毒剂

工作菌液

杀灭对数平均值（KL）

不锈钢载（min）

玻璃载片（min）

镀锌载片（min）

10

15

金黄色

葡萄球菌

大肠

埃希菌

白色

念珠菌

阴性对照无菌生长；

附表875%乙醇溶液消毒后试验现场

表面微生物检测记录

监测区域

洁净

级别

平均菌落数

是否合格

第一次

第二次

第三次

配液间顶棚

25CFU/接触碟.（?

55mm）

口是口否

配液间墙面

配液间地面

配液间工作台面

灌装间顶棚

A/B级

A级：

＜1CFU/接触碟.

B级：

5CFU/接触碟.（?

灌装间墙面

灌装间地面

灌装间设备表面

灌装间工作台面

工作鞋

清洁布

拖布

操作人

附表90.1%新洁尔灭溶液消毒后试验现场

附表102%甲酚皂溶液消毒后试验现场

配液间水池

25CFU/碟.（?

配液间地漏

附表1175%乙醇用于手消毒效果实验记录

消毒液名称

配制批号

培养基名称

培养基批号

培养温度

实验日期

培养时间

手指菌测试结果

（cfu/手套）

实验人员

手指菌测试时间

0min

5min

10min

15min

20min

附表12消毒剂储存有效期确认记录

方法

消毒剂名称

杀灭对数平均值KL（天）

7

定量悬浮试验

（KL）应不低于3个对数单位

金黄色葡萄菌

2%甲酚皂溶液

表面试验