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GB/T5009.37一2003食用植物油卫生标准的分析方法
1范围
本标准规定了食用植物油卫生指标的分析方法．
本标准适用于食用植物油卫生指标的分析。
本方法残留溶剂的检出限为0.10mg/kg，过氧化值第二法的检出限为0.003meq/kg。
2规范性引用文件
GB/T5009.11一2003食品中总砷及无机砷的测定
GB/T5009.22一2003食品中黄曲霉毒素B1的测定
GB/T5009.27一2003食品中苯并（a）花的测定
GB/T5009.138一2003食品中镍的测定
3感官检查
3.1色泽
3.1.1仪器
烧杯：
直径50mm，杯高100mm。
3.1.2分析步骤
将试样混匀并过滤于烧杯中，油层高度不得小于5mm，在室温下先对着自然光观察，然后再置于白色背景前借其反射光线观察并按下列词句描述：
白色、灰白色、柠檬色、淡黄色、黄色、橙色、棕黄色、棕色、棕红色、棕褐色等。
3.2气味及滋味
将试样倒人150mL烧杯中，置于水浴上，加热至50℃，以玻璃棒迅速搅拌．嗅其气味，并蘸取少许试样，辨尝其滋味，按正常、焦糊、酸败、苦辣等词句描述。
4理化检验
4.1酸价
4.1.1原理
植物油中的游离脂肪酸用氢氧化钾标准溶液滴定，每克植物油消耗氢氧化钾的毫克数，称为酸价。
4.1.2试剂
4.1.2.1乙醚一乙醇混合掖：
按乙醚一乙醇（2+1）混合。
用氢氧化钾溶液（3g/L）中和至酚酞指示液呈中性。
4.1.2.2氢氧化钾标准滴定溶液〔c（KOH）-0.050mol/L〕。
4.1.2.3酚酞指示液：
10g/L乙醇溶液。
4.1.3分析步骤
称取3.00g～5.00g混匀的试样，置于锥形瓶中，加人50mL中性乙醚-乙醇混合液，振摇使油溶解，必要时可置热水中，温热促其溶解。
冷至室温，加人酚酞指示液2滴～3滴，以氢氧化钾标准滴定溶液（0.050mol/L）滴定，至初现微红色，且0.5min内不褪色为终点。
4.1.4结果计算
试样的酸价按式（l）进行计算。
X＝
V1×c×56.11
………………………
（1）
m
式中：
X―试样的酸价（以氢氧化钾计），单位为毫克每克（mg/g）,
V―试样消耗氢氧化钾标准滴定溶液体积，单位为毫升（mL）;
c―氢氧化钾标准滴定的实际浓度，单位为摩尔每升（mol/L）;
m―试样质量，单位为克（g）;
56.11―与1.0mL氢氧化钾标准滴定溶液〔c（KOH）=1.000mol/L〕相当的氢氧化钾毫克数。
计算结果保留两位有效数字。
4.1.5精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
4.2过氧化值
4.2.1第一法滴定法
4.2.1.1原理
油脂氧化过程中产生过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘，以硫代硫酸钠溶液滴定，计算含量。
4.2.1.2试剂
4.2.1.2.1饱和碘化钾溶液：
称取14g碘化钾，加10mL水溶解，必要时微热使其溶解，冷却后贮于棕色瓶中。
4.2.1.2.2三氯甲烷一冰乙酸混合液：
量取40mL三氯甲烷，加60mL冰乙酸，混匀。
4.2.1.2.3硫代硫酸钠标准滴定溶液［c（Na2S203）=0.0020mol/L〕。
4.2.1.2.4淀粉指示剂（10g/L）：
称取可溶性淀粉0.50g，加少许水，调成糊状，倒人50mL沸水中调匀，煮沸。
临用时现配。
4.2.1.3分析步骤
称取2.00g～3.00g混匀（必要时过滤）的试样，置于250mL碘瓶中，加30mL三氯甲烷一冰乙酸混合液，使试样完全溶解。
加人1.00mL饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min。
取出加100mL水，摇匀，立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液（0.002Omol/L）滴定，至淡黄色时，加1mL淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失为终点，取相同量三氯甲烷一冰乙酸溶液、碘化钾溶液、水，按同一方法，做试剂空白试验。
4.2.1.4计算结果
试样的过氧化值按式
（2）和式（3）进行计算。
X1＝
（V1-V2）×c×0.1269
×100……………
（2）
m
X2=X2×78.8…………………………………………………（3）
式中：
X1―试样的过氧化值，单位为克每百克（g/100g）;
X2―试样的过氧化值，单位为毫克当量每千克（meq/kg）;V1―试样消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体积，单位为毫升（mL）;
V2―试剂空白消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体积，单位为毫升（mL）;
c―硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）;
m―试样质量，单位为克（g）;
0.1269―与1.00mL硫代硫酸钠标准滴定溶液［c（Na2S203）=1.000mol/L〕相当的碘的质量，单位为克（g）;
78.8―换算因子。
计算结果保留两位有效数字。
4.2.1.5精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
4.2.2第二法比色法
4.2.2.1原理
试样用三氯甲烷一甲醇混合溶剂溶解，试样中的过氧化物将二价铁离子氧化成三价铁离子，三价铁离子与硫氰酸盐反应生成橙红色硫氰酸铁配合物，在波长500nm处测定吸光度，与标准系列比较定量。
4.2.2.2试剂
4.2.2.2.1盐酸溶液（10mol/L）：
准确量取83.3mL浓盐酸，加水稀释至100mL，混匀。
4.2.2.2.2过氧化氢（30%）。
4.2.2.2.3三氯甲烷十甲醇（7十3）混合溶剂：
量取70mL三氯甲烷和30mL甲醇混合。
4.2.2.2.4氯化亚铁溶液（3.5g/L）：
准确称取0.35g氯化亚铁（FeCI2·4H2O）于100mL棕色容量瓶中，加水溶解后，加2mL盐酸溶液（10mol/L），用水稀释至刻度（该溶液在10℃下冰箱内贮存可稳定1年以上）。
4.2.2.2.5硫氰酸钾溶液（300g/L）：
称取30g硫氰酸钾，加水溶解至100mL（该溶液在10℃下冰箱内贮存可稳定1年以上）。
4.2.2.2.6铁标准储备溶液（1.0g/L）：
称取0.1000g还原铁粉于100mL烧杯中，加10mL盐酸（10mol/L）、0.5mL～lmL过氧化氢（30%）溶解后，于电炉上煮沸5min以除去过量的过氧化氢．冷却至室温后移人100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.00mg铁。
4.2.2.2.7铁标准使用溶液（0.01g/L）：
用移液管吸取1.0mL铁标准储备溶液（1.O0mg/mL）于100mL容量瓶中，加三氯甲烷＋甲醇（7+3）混合溶剂稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于10.0ug铁。
4.2.2.3仪器
4.2.2.3.1分光光度计。
4.2.2.3.210mL具塞玻璃比色管。
4.2.2.4分析步骤
4.2.2.4.1试样溶液的制备
精密称取约0.01g～1.0g试样（准确至刻度0.0001g）于10mL容量瓶内，加三氯甲烷＋甲醇（7+3）混合溶剂溶解并稀释至刻度，混匀。
分别精密吸取铁标准使用溶液（10.0ug/mL）0，0.2,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL（各自相当于铁浓度0，2.0,5.0,10.0,20.0,30.0,40.0ug）于干燥的10mL比色管中，用三氯甲烷＋甲醇（7+3）棍合溶剂稀释至刻度，混匀。
加1滴〔约0.05mL）硫氰酸钾溶液（300g/L），混匀。
室温（10℃～35℃）下准确放置5min后，移入1cm比色皿中，以三氯甲烷＋甲醇（7+3）混合溶剂为参比，于波长500nm处测定吸光度，以标准各点吸光度减去零管吸光度后绘制标准曲线或计算直线回归方程。
4.2.2.4.2试样测定
精密吸取1.0mL试样溶液于干燥的10mL比色管内，加1滴（约0.05mL）氯化亚铁（3.5g/L）溶液，用三氯甲烷十甲醇（7+3）混合溶剂稀释至刻度，混匀。
以下按4.2.2.4.1自“加1滴（约0.05mL）硫氰酸钾溶液〔300g/L）……”起依法操作。
试样吸光度减去零管吸光度后与曲线比较或代人回归方程求得含量。
4.2.2.5结果计算
试样中过氧化值的含量按式（4）进行计算。
X1＝
（V1-V2）×c×0.1269
……………（4）
m
（V1-V2）×c×0.1269
m
式中：
X―试样中过氧化值的含量，单位为毫克当量每千克（meq/kg）;
c―由标准曲线上查得试样中的铁的质量，单位为微克（ug）;
co―由标准曲线上查得零管铁的质量，单位为微克（ug）;
V1―试样稀释总体积，单位为毫升（mL）;
V2―测定时取样体积，单位为毫升（mL）;
m―试样质量，单位为克（g）;
55.84―Fe的原子量；
2―换算因子。
4.2.2.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
4.3羰基价
4.3.1原理
碳基化合物和2，4一二硝基苯肼的反应产物，在碱性溶液中形成褐红色或酒红色，在440nm下，测定吸光度，计算羰基价。
4.3.2试剂
4.3.2.1精制乙醇：
取1000mL无水乙醇，置于2000mL圆底烧瓶中，加人5g铝粉、10g氢氧化钾，接好标准磨口的回流冷凝管，水浴中加热回流lh，然后用全玻璃蒸馏装置，蒸馏收集馏液。
4.3.2.2精制苯：
取500mL苯，置于1000mL分液漏斗中，加入50mL硫酸，小心振摇5min，开始振摇时注意放气。
静置分层，弃除硫酸层，再加50mL硫酸重复处理一次，将苯层移入另一分液漏斗，用水洗涤三次，然后经无水硫酸钠脱水，用全玻璃蒸馏装置蒸馏收集馏液。
4.3.2.32,4一二硝基苯肼溶液：
称取50mg2,4一二硝基苯肼，溶于100mL精制苯中。
4.3.2.4三氯乙酸溶液：
称取4.3g固体三氯乙酸，加100mL精制苯溶解。
4.3.2.5氢氧化钾一乙醇溶液：
称取4g氢氧化钾，加100mL精制乙醇使其溶解，置冷暗处过夜，取上部澄清液使用。
溶液变黄褐色则应重新配制．
4.3.3仪器
分光光度计。
4.3.4分析步骤
精密称取约0.025g～0.5g试样，置于25mL容量瓶中，加苯溶解试样并稀释至刻度。
吸取5.0mL，置于25mL具塞试管中，加3mL三氯乙酸溶液及5mL2,4一二硝基苯肼溶液，仔细振摇混匀，在60℃水浴中加热30min，冷却后，沿试管壁慢慢加人10mL氢氧化钾一乙醇溶液，使成为二液层，塞好，剧烈振摇混匀，放置10min。
以1cm比色杯，用试剂空白调节零点，于波长440nm处测吸光度．
4.3.5结果计算
试样的拨基价按式（5）进行计算。
X＝
A
×1000………………（5）
854×m×V2/V1
式中：
X―试样的羰基价，单位为毫克当量每千克（meq/kg）;
A―测定时样液吸光度，
m2―试样质量，单位为克（g）;
V1―试样稀释后的总体积，单位为毫升（mL）;
V2―测定用试样稀释液的体积．单位为毫升（mL）;
854―各种醛的毫克当量吸光系数的平均值。
结果保留三位有效数字。
4.3.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5％。
4,4游离棉酚（本法适用于棉籽油）
4.4.1紫外分光光度法
4.4.1.1原理
试样中游离棉酚经用丙酮提取后，在378nm有最大吸收，其吸收值与棉酚量在一定范围内成正比，与标准系列比较定量。
4.4.1.2仪器
紫外分光光计。
4.4.1.3试剂
4.4.1.3.1丙酮（70%）：
将350mL丙酮加水稀释至500mL。
4.4.1.3.2棉酚标准溶液：
准确称取0.1000g棉酚，置于100mL容量瓶中，加丙酮（70%）溶解并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于1.0mg棉酚。
4.4.1.3.3棉酚标准使用液：
吸取棉酚标准溶液5.0mL，置于10omL容量瓶中，加丙酮（70%）稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于50.0ug棉酚．
4.4.1.4分析步骤
称取1.00g精制棉油或0.20g粗棉油，置于100mL具塞锥形瓶中，加人20.0mL丙酮（70%）,并加人玻璃珠3粒～5粒，在电动振荡器上振荡30min，然后在冰箱中放置过夜。
取此提取液之上清液，过滤。
滤液供测定用。
吸取0、0.10、0.20、0、40、0.80、1.6、2.4mL棉酚标准使用液（相当于0、5、10、20、40、80、120ug棉酚），分别置于10mL具塞试管中。
各加人丙酮（70%）至10mL，混匀，静置10min。
取试样滤液及标准液于1cm石英比色杯中，以丙酮（70%）调节零点于378nm波长处测吸光度，绘制标准曲线比较。
4.4.1.5结果计算
试样中游离棉酚的含量按式（6）进行计算。
X＝
m1
×100×2……………（6）
m2×1000×1000
式中：
X―试样中游离棉酚的含量，单位为克每百克（g/100g）;
m1―测定用样液中游离棉酚的质量，单位为微克（ug）;
m2―试样质量，单位为克（g）。
计算结果保留三位有效数字．
4.4.1.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
4.4.2苯胺法
4.4.2.1原理
试样中游离棉酚经提取后，在乙醇溶液中与苯胺形成黄色化合物，与标准系列比较定量。
4.4.2.2试剂
4.4.2.2.1丙酮（70%）：
量取70mL丙酮，加水至100mL。
4.4.2.2.2乙醇（95%）。
4.4.2.2..3苯胺：
应为无色或淡黄，若色深则重蒸馏，
4.4.2.2..4棉酚标准溶液：
同4.4.1.3.2和4.4.1.3.3。
4.4.2.3分析步骤
称取约1.00g试样，置于150mL具塞锥形瓶中，加人20.0mL丙酮（70%）、玻璃珠3粒～5粒，剧烈振摇lh，在冰箱中过夜，过滤，滤液备用。
在两支25mL具塞比色管中，各加人2.OmL上述滤液，以甲管为试样管，乙管为对照管。
另吸取0、0.10、0.20、0.40、0.80、1.00mL棉酚标准使用液（相当0、5.0、10.0、20.0、40.0、50.0ug棉酚）各两份，分别置于甲、乙两组25mL具塞比色管中，各管均加人丙酮（70%）至2mL，甲组标准管与试样管甲管各加人3mL苯胺，在80℃水浴中加热15min，取出冷至室温，各加人乙醇至25mL；乙组标准管与试样管乙管各加乙醇至25mL。
两组溶液在加乙醇后均放置15min，以甲组标准的零管为试剂空白，以乙组的零管为溶剂空白，用1cm比色杯，以各组标准零管调节零点，在波长445nm处，测定两组的吸光度，以两组对应的吸光度之差，以及相应标准浓度绘制标准曲线，以试样管甲管与乙管的吸光度之差从标准曲线查出棉酚含量。
4.4.2.4结果计算
试样中游离棉酚的含量按式（7）进行计算。
X＝
m1
×100……………（7）
m2×1000×1000×2/20
式中：
X―试样中游离棉酚的含量，单位为克每百克（g/100g）;
m1―测定用样液中游离棉酚的质量，单位为微克（ug）;
m2―试样质量，单位为克（g）。
计算结果保留三位有效数字。
4.4.2.5精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
4.5砷
按GB/T5009.ll操作。
4.6黄曲黔毒素B1
按GB/T5009.22操作。
4.7苯并（a）花
按GB/T5009.27操作。
4.8残留溶剂
4.8.1原理
将植物油试样放人密封的平衡瓶中，在一定温度下，使残留溶剂气化达到平衡时，取液上气体注人气相色谱中测定，与标准曲线比较定量。
4.8.2试剂
4.8.2.1N-N-二甲基乙酞胺（简称DMA）：
吸取1.0mL放入100mL～150mL，顶空瓶中，在50℃放置0.5h，取液上气0.10mL注入气相色谱仪在0min～4min内无干扰即可使用。
如有干扰可用超声波处理30min或通入氮气用曝气法蒸去干扰。
4.8.2.2六号溶剂标准溶液：
称取洗净干燥的具塞20mL～25mL气化瓶的质量为ml，瓶中放入比气化瓶体积少1mL的DMA密塞后称量为m2，用1mL的注射器取约0.5mL六号溶剂标准溶液通过塞注入瓶中（不要与溶液接触），混匀，准确称量为m3。
用式（8）计算六号溶剂油的浓度：
X＝
m3-m2
×1000……………（8）
（m2-m2）/0.935
式中：
X―六号溶剂的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）;
m1―瓶和塞的质量，单位为克（g）;
m2―瓶、塞和DMA的质量，单位为克（g）.
m3-m2加六号溶剂的质量，单位为克（g）;
0.935―为DMA在20℃时密度，单位为克每毫升（g/mL）。
4.8.3仪器
4.8.3.1气化瓶（顶空瓶）：
体积为100mL～150mL具塞。
气密性试验：
把1mL己烷放人瓶中，密塞后放入60℃热水中30min（密封处无气泡外漏）。
4.8.3.2气相色谱仪：
带氢火焰离子化检测器。
4.8.4分析步骤
4.8.4.1气相色谱参考条件
4.8.4.1.1色谱柱：
不锈钢柱，内径3mm，长3m,内装涂有5%DEGS的白色担体102（60～80）目．
4.8.4.1.2检测器：
氢火焰离子化检测器。
4.8.4.1.3柱温：
60℃。
4.8.4.1.4汽化室温度：
140℃。
4.8.4.1.5载气（N2）:
30mL/min。
4.8.4.1.6氢气：
50mL/min。
4.8.4.1.7空气：
500mL/min。
4.8.4.2测定
称取25.00g的食用油样，密塞后于50℃恒温箱中加热30min，取出后立即用微量注射器或注射器吸取0.10mL～0．15mL液上气体（与标准曲线进样体积一致）注人气相色谱，记录单组分或多组分（用归一化法）测量峰高或峰面积，与标准曲线比较，求出液上气体六号溶剂的含量。
1―铝盖，2―橡胶塞；3―输液瓶；4―试样。
图1气化装置
4.8.4.3标准曲线的绘制
取预先在气相色谱仪上测试管六号溶剂量较低的油为曲线制备的体底油（或经70℃开放式赶掉大部分残留溶剂的食用油或压榨油），分别称取25.00g放人6支气化瓶中，密塞。
通过塞子注人六号溶剂标准液（4.8.2.2）0、20、40、60、80、100uL（含量分别为0,0.02xX，……，0.10xXug，其中X为六号溶剂的浓度）。
放人50℃烘箱中，平衡30min，分别取液上气体注人色谱，各响应值扣除空白值后，绘制标准曲线（多个色谱峰用归一化法计算）。
4.8.5结果计算
油样中六号溶剂的含量按式（9）进行计算。
X＝
m1×1000
……………（9）
m2×1000
式中：
X―油样中六号溶剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）;
m1―测定气化瓶中六号溶剂的质量，单位为微克（ug）,
m2―试样质量，单位为克（g）.
计算结果保留三位有效数字。
4.8.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15％。
4.9镍（适用于人造奶油）
按GB/T5009.138操作．
4.10油中非食用油的鉴别
对常见的三类非食用油进行定性鉴别。
4.10.1桐油
4.10.1.1三氯化锑一三氯甲烷界面法：
取油样1mL移人试管中，沿试管壁加1mL三氯化锑一三氯甲烷溶液（10g/L），使试管内溶液分成两层，然后在水浴中加热约10min。
如有桐油存在，则溶液两层分界面上出现紫红色至深咖啡色环。
4.10.1.2亚硝酸法：
适用于豆油、棉油等深色油中桐油的检出，但不适用于梓油或芝麻油中桐油的检出。
取试样5滴～10滴于试管中，加2mL石油醚，使油溶解，有沉淀物时，过滤一次，然后加人结晶亚硝酸钠少许，并加人1mL硫酸（l+l）摇匀，静置，如有桐油存在，油液混浊，并有絮状沉淀物，开始呈白色，放置后变黄色。
4.10.1.3硫酸法：
取试样数滴，置白瓷板之上，加硫酸1滴～2滴，如有桐油存在，则出现深红色并且凝成固体，颜色渐加深，最后成炭黑色。
4.10.2矿物油
取1mL试样，置于锥形瓶中，加人1ml，氢氧化钾溶液（600g/L）及25mL乙醇，接空气冷凝管回流皂化约5min，皂化时应振摇使加热均匀。
皂化后加25mL沸水，摇匀，如浑浊或有油状物析出，表示有不能皂化的矿物油存在。
4.10.3大麻油
取试样和对照大麻油各10uL，点样于硅胶G薄层板，此薄层板厚0.25mm～0.3mm,105℃下活化30min。
油太粘稠则用5倍苯稀释，再进行点样，点样量稍多一点约10uL～20uL。
展开剂用苯，显色剂为牢固蓝盐B溶液（l.5g/L）（临用配制）。
当斑点和对照颜色及比移值相当时表示有大麻油。
胡麻油、芝麻油和牢固蓝盐B也呈红色，但在薄层板上比移值较小。
4.11黄曲霉毒素
GB/T5009.22操作。
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