色谱柱的分类及特点.docx
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色谱柱的分类及特点
3-1柱的结构
1、堵棒（或导管）2、接头 3、接头 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、过滤片
3-2柱的分类：
根据所有的担体材料分为三种：
a.硅胶型：
机械强度高，易制成小颗粒，理论塔板数高。
b.聚全物型：
在广泛的PH值范围内稳定
c.羟基磷灰石型：
对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。
根据分离方式分类：
a.硅胶型
1）正相：
SIL－－磷脂、NH－－糖、维生素E，CN－－甾类激素。
2）反相：
ODS（C18）、（C8CNTMSPheny1）低分子量化全物。
3）离子交换：
WAX（弱碱阴离子交换）－－核苷酸、蛋白质
WCX（弱酸阳离子交换）－－蛋白质
SAX（强碱阴离子交换）－－核苷酸
SCX（强酸阳离子交换）－－儿茶酚胶
4）凝胶过滤：
Diol－－蛋白质GF－－蛋白质
b.聚合物型：
1）反相：
ODP－－50－－肽，蛋白质，低分化合物。
2）离子交换：
ISC－－氨基酸，胍类化合物，ISA－－糖，IC－－无机离子，PA－－蛋白质，ES－－蛋白质。
3）配位交换：
SCR（磺化聚苯乙烯）－－糖。
4）离子排阻：
SCR-101H102H－－有机酸
5）凝胶过滤：
ION－－多糖GS－－水溶性分子
6）凝胶渗透色谱（GPC）：
GPD－－合成分子、橡胶。
7）羟基磷灰石型：
HPC－－蛋白质、核苷酸
按尺寸分类：
1.制备：
30mm50mm内径，半制备：
20mm内径。
2.分析：
标准型柱：
4_8mm内径。
快速色谱柱：
3mm内径、5cm长、4.6mm内径。
小孔径柱：
2.5mm内径，微孔径柱1mm内径。
3-3柱的技术指标
*耐压：
不小于40Mpa。
*渗透性：
反相－－流动相甲醇1ml/min，压力3Mpa。
正相－－正乙烷1ml/min,压力3Mpa.
*柱效：
理论塔板极数>3x103。
*对称柱：
葸峰不对称因子AS在0.8~2.0范围内。
*外观：
光洁、标牌、尺寸、填充剂、流动相方向、日期等。
ODS柱
ODS（C18）色谱柱是将十八烷基键合在担体的表面，然后填充的柱，在HPLC中应用广。
在HPLC中反相色谱的引用占70%，其中极大部分使用的是ODS（C18）。
本公司所附的柱也是ODS（C18）柱，内径4.6mm,长度150mm。
一般反相色谱系统，流动相为极性溶剂，如水、甲醇、乙腈，非极性固定相，如十八烷基。
反相系统简单，重复性好，柱子能长期稳定工作，能完成分离、分析任务的60-80%，所以分析工作者使用得最多的是反相柱。
柱的使用和维护
由于柱的质量直接影响到样品组分得分离情况，组分的定性，定量分析，所以在操作时必须十分注意。
通常柱子损坏表现为：
柱压升高，柱效下降，保留值改变，峰形崎变等。
以反相为列，它要求填料处于甲醇或乙腈中，不使柱子干枯，并注意下列事项：
*勿使柱子受较强振动
*较长时间不用时，应在柱中充满甲醇，并把两头封死，尽量不使干枯。
*当用水和甲醇（或乙腈）混合液体溶剂时，工作结束后必须用纯甲醇冲洗30分钟至1个小时，使柱子处于甲醇中，因水 易繁殖微生物，使柱子堵塞，并降低柱效。
*当使用KH2PO4等缓冲液时，盐的浓度宜低，否则盐容易析出，柱效降低，柱压升高，使用后 必须用水冲洗（绝不能用甲醇冲洗）使缓冲液全部溶于水排出，然后再用甲醇冲洗。
*硅基固定相不宜在PH>8时使用，此时容易产生絮状物析出，堵塞柱子。
*当流动相呈酸性时，使用后必须用水冲洗，因酸使柱效降低，后再用甲醇冲洗。
*流动相最好经过过滤处理。
*样品最好也经过过滤处理。
*样品有时能复盖填料得活性点，使柱压升高，保留时间下降，防止方法是样品经过过滤。
*样品组分的不可逆吸附，使柱压升高，柱效降低（通常易被吸附的有蛋白质、糖）防止方法是加保护柱和溶剂反冲， 最常用的是四氢呋喃。
*当流动相从A换到B时，A、B不相溶，必须选择一能同A、B互溶剂C，先换成C再把C换成B，最常用的中间液是异丙醇。
*由于长期使用，在较大的压力下，担体破裂而流失在柱前端形成一段空隙，使柱效下降，峰形畸变。
维护方法：
卸下 接头，用甲醇把填料调成糊状，填入柱内，同时将过滤片用超声波清洗机清洗一次。
各种柱特点
HypersilSilica
作为大多数键合相的基质HypersilSilica（Hypersil硅胶）在使用过程中极具耐久性及重现性.未经键合的硅胶（SiO2,Silica）色谱柱对于非极性和中性有机物的正相色谱分析非常有效。
HypersilODS（C18）
HypersilODS（C18）是硅胶基质上键合了C18为官能团的色谱柱填料,是典型的高效液相色谱柱用
填料,适合于分析非极性和中性样品,包括酸性,中性及亲脂性化合物。
HypersilMOS和MOS2（C8）
HypersilMOS和MOS-2（C8）在硅胶的表面键合单层C8烷基链,所得的色谱填料效率高、重现性好,其中MOS-2对硅胶表面作了二次衍生反应即封尾（End-capping）。
MOS和MOS-2的选择性与ODS相似,但保留时间短,这有利于实现快速分析,尤其是对强疏水性分析物。
HypersilPhenyl（C6H5）
HypersilPhenyl（C6H5）色谱填料适用于反相色谱,对芳香族和中性化合物的分析具有独特的选择性,其保留行为与HypersilMOS相似,但选择性相反,尤其是对芳香烃和稠环烃.HypersilPhe-nyl-2是进行过封尾处理的填料.
HypersilSAS（C1）
HypersilSAS（C1）是采用短烷基链（C1）为官能团的硅胶键合固定相,因而在Hypersil烷基键合相中保留时间最短.HypersilSAS对极性分析物和多官能团化合物具有独特选择性,已成功地应用于离子对色谱的分离。
HypersilCPS（CN）
HypersilCPS（CN）为氰丙基官能团硅胶键合填料,该色谱柱可应用于正相和反相色谱.Hypersil,CPS-2为封尾固定相.正相色谱模式时,HypersilCPS色谱柱与HypersilSilica和HypersilAPS的选择性相反,并且平衡速度快,不会被少量的水钝化;反相色谱模式时,氰基柱的选择性可补偿烷基I键合相和低疏水性。
HypersilAPS2（NH2）
HypersilAPS-2（NH2）是可以进行多种色谱模式的氨丙基官能团硅胶色谱填料，在弱阴离子交换、正相及反相色谱中均表现出很好的色谱性能。
用HypersilAPS-2作弱离子交换分析阴离子和有机酸时,可以使用普通缓冲液和有机改性剂,而正相色谱模式时,HypersilAPS-2与硅胶（SiO2Silica）色谱柱的选择性相反.HypersilAPS-2柱尤其适于糖类样品的反相色谱分析。
HypersilSAX
HypersilSAX是高度稳定的强阴离子交 换的硅胶为基质材料的色谱填料，专门为使用含水和低pH值流动相时设计,适合分析小分子的有机酸。
HypersilSCX
HypersilSCX是可靠的强阳离子交换的硅胶为基质材料的色谱填料，适合分析小分子的有机碱。
象其它的Hypersil固定相一样，HypersilSAX和HypersilSCX也进行了严格的质量监控以确保具有良好的重现性。
Hypersil100
为了分析保留时间较长的物质，Hypersil公司专门设计并生产了Hypersil100,其特征是扩大了硅胶表面积和孔容.随着硅胶表面积的增大,色谱柱的分离能力也随之增大,同时使保留时间相近的谱峰得到分离,尤其是对高浓度的样品.Hypersil100选择性与HypersilBDS相似的技术,但更加适合于分析保留时间更长的样品.Hypersil100键合固定相含碳量高、稳定、耐用,采用均匀的窄孔球型填料,具有效率高、重现性好、操作压力低及柱寿命长等优点。
Hypersil100色谱柱是分析许多化合物的理想选择,包括有机酸、维生素和碱性化合物;同时Hypersil100填料也适合摩尔质量达5000道尔顿的肽和多肽的分析。
Hypersil100担体范围广泛,包括硅胶、C18、C8、C4、氨基、氰基和苯基。
对于制备性分离，Hypersil100可直接放大到HyperPrepHS。
HypersilGreenENV
HypersilGreenENV色谱柱专门用于分析工业和农业残留的极性污染物。
即使在分析物浓度很低的条件下,HypersilGreenENV对苯酚、邻苯二甲酸酯及除草剂都有极好的选择性和重现性。
HypersilGreenPAH
HypersilGreenPAH色谱柱采用高碳量填料专门用来PAH污染物的分离。
填料的粒度有3和5um两种，设计多种柱型以优化分离速度、分离度和灵
敏度。
使用HypersilGreenPAH色谱柱对EPA610MIX在4分钟内可达完全分离。
HypersilGreenCarbamate
HypersilGreenCarbamate色谱柱专门用于氨基甲酸类农药混合物的分离,可采用等度或梯度洗脱,采取柱前衍生化方法,并用荧光检测器检测可提高柱的灵敏性。
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