实验室质量手册.docx
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实验室质量手册
一、果汁感官检验
1、色泽、外观形态及杂质
取混合均匀的果汁50ml于100ml洁净透明的烧杯中，置于明亮处，用肉眼观察其色泽、外观形态，杂质检测须用蒸馏水稀释至原浆浓度。
2、香气及滋味：
取混合均匀用蒸馏水稀释到原果可溶性固形物（或规定）的果汁50ml于100ml洁净的烧杯中，在室温下（20℃）立即用嗅觉仔细鉴别其气味，用味觉品尝其滋味，检查有无异味。
注：
果汁可溶性固形物不足规定要求时以原果汁检测；品尝第二个样品前须用清水漱口。
二、理化检测
1、可溶性固形物标准：
GB/T10203
仪器：
A、手持糖量仪
分析步骤：
a.测定前用蒸馏水校准折射仪。
b.分开折射仪两面棱镜，用脱脂棉蘸乙醚或乙醇擦净。
c.用末端熔圆的玻璃棒蘸取试液2－3滴，滴于折射仪棱镜面中央（注意勿使玻璃棒触及镜面）。
d.迅速闭合棱镜，静置1min，使试液均匀无气泡，并充满视野。
e.对准光源，通过目镜观察接物镜，旋转调节手轮，选择和样液可溶性固形物相适宜的范围，观察视野中明暗分界线处读数。
f.从目镜百分数标尺读出可溶性固形物的百分含量。
B、数显阿贝折射仪：
分析步骤：
a.测定前用蒸馏水或标准试样校对折射仪。
b.打开折射仪两面棱镜，用脱脂棉蘸乙醇擦净。
c.将被测样放在折射棱镜的工作面上，盖上棱镜盖，对准光源通过目镜观察视均，旋转调节手轮，使明暗分界线落在交叉线视场中，调节色散校正手轮和聚光镜的位置，使明暗分界线对准交叉线的交点。
d.按“READ”显示键，显示窗内“00000”消失，显示“—”数秒后“—”消失，显示被测样品的折射率，再按“BX”键即显示被测样品未经温度修正的可溶性固形物含量；或按“BX—TC”键即显示被测样品经温度修正后可溶性固形物含量。
e.允许误差：
同一样品两次测定值之差，不应大于0.5％，取二次测定的平均值作为结果，精确到小数点后1位。
2、可滴定酸度：
按GB/T12456规定的方法。
电位滴定法
（1）仪器：
自动电位滴定计、PH计
（2）试剂：
0.1mol/L氢氧化钠标准溶液。
（3）被测样液的制备：
用100ml烧杯精确称取果汁1～5g，加50ml蒸馏水，充分摇匀供测定用。
（4）测定步骤
a.将自动电位滴定计接通电源，预热30min后，用pH6.86、pH9.18的缓冲溶液校正。
b.设定滴定终点为pH8.20。
c.加好氢氧化钠标准溶液，并调整滴定仪液位显示器为“00.00”。
将搅拌棒放入烧杯中，然后将烧杯置于电磁搅拦器上，电极插入烧杯内试样中适当位置（使玻璃电极泡浸入试样且不接触搅拌棒），
e.开动电磁搅拌器，然后按下“滴定鼠标”按钮，滴定开始；滴液快速滴下，在接近终点时，滴速减慢，当试样pH值到达终点13秒数值不变化，滴定即行告终。
f.滴定结束后记录消耗氢氧化钠标准溶液的毫升数。
（5）计算：
X可滴定酸%＝（V×M×K/m）×100
式中：
X——可滴定酸g/l00g
V——滴定耗用0.1mol/l氢氧化钠毫升数
M——氢氧化钠溶液的摩尔浓度
K——苹果酸的系数0.067，柠檬酸的系数0.064，酒石酸的系数0.075
m——被测样品克数
（6）连续滴定两次，误差不超过0.5%，取平均值，报告结果取小数点后两位。
3、PH值
（1）仪器：
pH计、磁力搅拌器
（2）样品处理：
取样品少许，用蒸馏水稀释至规定要求的可溶性固形物。
（3）测定：
将样品放入磁力搅拌器，将pH计电极插入样品溶液中，待数据稳定，读出pH值,结果取小数点后两位。
果汁浓度不足规定要求的可溶性固形物时以实数值检测。
4、透光率
（1）分光光度计
（2）样品处理：
取样品少许，用蒸馏水稀释至规定要求的可溶性固形物。
（3）测定：
用1cm比色皿，以蒸馏水调100%，在625nm波长处测定其透光度。
果汁浓度不足规定要求的可溶性固形物时以实数值检测。
5、色值
（1）分光光度计
（2）样品处理：
取样品少许，用蒸馏水稀释至规定要求的可溶性固形物。
（3）用1cm比色皿，以蒸馏水调100%，在440nm波长处测定其色值，结果取小数点后一位。
果汁浓度不足规定要求的可溶性固形物时以实数值检测。
6、浊度
（1）仪器浊度仪用2100N型浊度仪：
（2）样品处理：
将果汁用蒸馏水稀释至可溶性固形物为规定要求的可溶性固形物。
（3）测量步骤：
将试样倒入浊度仪测量杯，放入浊度仪，待数据稳定后读数。
（4）结果取三位有效数字
7、果胶
（1）试剂:
乙醇95％（加1%的浓盐酸）
（2）分析步骤：
将果汁用蒸馏水稀释至可溶性固形物为规定要求的可溶性固形物后，取果汁与95％乙醇按1:
1之比例混合，轻微摇动，以免破坏胶体的形成，如在15～30min内有絮状物出现，则果汁有果胶；没有絮状物出现，则果汁中不含果胶。
8、淀粉
（1）试剂:
碘溶液0.005mol/L
称取碘（GB625）0.65g及碘化钾（GB1272）1.75g于100ml烧杯中，加少量蒸馏水使其溶解，并用蒸馏水稀释至500ml摇匀，保存于具塞棕色瓶中。
（2）分析步骤：
将果汁用蒸馏水稀释至可溶性固形物为规定要求的可溶性固形物后，取20ml于50ml烧杯中，加热至70℃，冷却后加入0.005mol/L碘溶液1ml，摇匀，并观察其显色反应，如显黄色，则无淀粉，显蓝色，则有淀粉，显棕色，则有少量淀粉。
9、氨基态氮
标准：
浓缩果清汁中氨基态氮的测定方法——甲醛值法GB12413.2
（1）试剂：
a.0.1mol/l氢氧化钠标准溶液
b.中性甲醛溶液：
量取200ml甲醛溶液于400ml烧杯中，置于电磁搅拌器上，边搅拌边用氢氧化钠溶液调至pH8.10。
c.30%过氧化氢。
d.pH6.86缓冲液：
按GB604中缓冲溶液的制备配制。
（2）仪器设备：
a.自动电滴定计，测量范围0-14pH，精确±0.1pH。
b.玻璃电极和甘汞电极。
（3）试样的制备：
准确称取5g（精确至0.001g）浓缩果汁至烧杯中，加50ml蒸馏蒸馏水，充分摇匀供测定用。
（4）测定步骤：
a.将自动电位滴定接通电源，预热30min后，用pH6.8的缓冲溶液校正。
b.将烧杯置于电磁搅拌器上，电极插烧杯内试样中适当位置（使玻璃电极泡浸入试样且不接触搅拌棒），如需要加适量蒸馏水。
c.开动电磁搅拌器，用0.1000mol/l氢氧化钠溶液漫漫中和试样中的有机酸，滴定pH8.20，并保持1min不变。
然后慢慢加入10～15ml中性甲醛溶液。
1min后用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH8.10，记录消耗氢氧化钠标准溶液的毫升数。
（5）计算
X＝（C×V×14/M）×100
式中：
X—每100g试样中氨基态氮的毫克数，mg/100g。
C—氢氧化钠标准滴定溶液的浓度mol/L。
V—加入中性甲醛溶液后，滴定试样耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，ml。
M—试样的质量，g
（6）结果取三位有效数字
10、灰分的检测
（1）取大小适宜瓷坩埚置马弗炉中，在600℃下灼烧0.5h，冷却至200℃以后，取出放入干燥器中冷至室温，精密称量，并重复灼烧至恒重。
（2）取试样约10g（准确至0.1mg）于坩锅中（W0），称重（W1），然后先在沸水浴上蒸干，再放在电炉上加热，直至碳化。
将坩锅移至马弗炉中，在525±25℃下灼烧灰化至碳微粒消失，样品呈灰白色为止，冷却至200℃后，用坩锅钳取出坩锅放入干燥器中冷却至室温，精确称重（W2），并重复灼烧至恒重（两次之差不超过0.5mg）,按下式计算灰分含量：
灰分%=（W2-W0/W1-W0）×100%
式中：
W0——坩锅重量（g）
W1——样品重量和坩锅重量之和
W2——灰分重量和坩锅重量之和
11、果汁槽果汁检测
（1）从果汁槽取100ml果汁。
（2）摇匀后，分别装入离心管，3000r/min，离心10分钟,读取下面沉淀物的体积,算出悬浮物含量，并观察有无果实籽壳存在。
12、悬浮物含量
（1）从卧螺分离机、离心机后取100ml搅匀的果汁。
将果汁置入两个10ml刻度离心管，对称放入离心机，3000r/min，10分钟。
（2）取出离心管，读取沉淀物的体积，取其平均值为悬浮物含量。
（3）从卧螺分离机、离心机开始至结束每60分钟取样一次。
（4）以时间为横坐标，悬浮物含量为纵坐标作图。
13、铜
按GB5009.13规定的方法，二乙胺基二硫代甲酸钠法。
14、铅：
按GB5009.12规定的方法测定双硫腙比色法。
15、砷：
GB5009.11规定的方法测定砷斑法
16、单宁的检测
（一）试剂
（1）1M醋酸锌（分析纯）溶液（需以标定后的EDTA-2N溶液标定浓度）。
（2）0.05MEDTA2Na溶液：
取EDTA2Na2H2O（分析纯）约18.6g加蒸馏水溶解成1000ml，以标准锌溶液（0.02M）标定其实际浓度。
（3）PH=10缓冲溶液（NH4CL-NH4OH）。
（4）铬黑T指示剂。
（5）鞣质水溶液（单宁水溶液）1%100ml或用4g干皮粉于水蒸汽抽提器内抽提，抽提液用水稀成100ml。
（二）、实验
（1）精密吸取1MZnAc2（醋酸锌）溶液20ml于500ml容量瓶中，加饱和氨水14ml，测其PH是否为11.0，摇匀使白色沉淀溶解。
（2）将鞣质水溶液（含单宁1%）100ml加蒸馏水稀释至400ml，于水浴上温热至35+-2，然后定量的缓缓注入
（1）的容量瓶中，并不断摇动，加毕后继续振摇1分钟，置原水浴内放置30分钟（间歇振摇数次），冷至室温，加蒸馏水调至刻度，摇匀，过滤（用定量滤纸过滤），收集滤液（滤液需澄清），于干燥的三角烧瓶中（初滤出部分弃去）。
精密吸取滤液20ml（或25ml）于三角瓶中，加蒸馏水300ml，PH=10的缓冲溶液25ml，铬黑T指示剂1—2滴（或1ml-颜色淡时），然后以0.05MEDTA2Na溶液滴定，溶液由红色变为蓝色即为终点。
（三）、计算
单宁含量%=（0.1556*V*100）/W
式中V=20*MZn-（25或20）*ME*Q
MZn——ZnAC2溶液的摩尔浓度；
ME—EDTA2Na溶液的摩尔浓度；
Q—EDTA2Na溶液滴定消耗的毫升数；
0.1556—1ml1MZnZnAC2可络合0.1556单宁（鞣质）；
W—样品重量（质量）（g）；
25为系数—20ml或25ml相当于500ml的20或25分之一。
（四）、附：
试剂的配制及标定：
1、氨水缓冲溶液（PH=10.5）的配制：
称取67g氯化铵，溶于200ml水中，加570ml氨水，混合以水稀至1000ml。
2、铬黑T指示剂0.6%：
称取0.6g铬黑T，溶于100ml三乙醇胺中，加入4g盐酸羟搅拌溶解之。
3、EDTA（乙二胺四乙酸二钠）分子量=372.24，如果要配制0.008915MEDTA标准溶液，即称取3.319gEDTA溶于水稀至1000ml；如要配置0.00446MEDTA标准溶液，即称取1.6595gEDTA溶于水中稀至1000ml。
4、EDTA标准溶液的标定：
吸取10ml（如0.02M）锌标准液，加60ml水，10ml氨性缓冲溶液，1-2滴铬黑T指示剂，用EDTA滴定，溶液由红色变为纯兰色为终点。
EDTA摩尔浓度（mol/l或克分子浓度）按下式计算：
M=（10*0.02）/V
式中：
V—滴定时消耗EDTA溶液的毫升数
5、锌标准液0.02M的配制：
准确称取1.3074g纯锌，用20ml（1+1）盐酸溶液溶解，至锌全部溶解后，将溶液移入1000ml容量瓶中，以水稀释至刻度。
注：
锌的毫克当量=0.0653
锌的克当量=65.37
17、果汁中Vc的测定
（一）仪器及材料
精度0.0001g分析天平、刻度0.1ml的50ml酸式滴定管、1000ml棕色容量瓶、10ml移液管、50ml烧杯、升华碘、可溶性淀粉、柠檬酸、分析纯Vc
（二）操作
（1）溶液制备
a.0.1N碘储存液：
将20g的KI溶于20～40ml的蒸馏水中，加入16.25g升华碘，使之溶解并转移至1000ml的容量瓶中，稀释至刻度。
此溶液储存在避光带盖的低酸性玻璃瓶中，可储存3～4周。
b.0.01N碘液：
移取100ml0.1N碘液至1000ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，在每班使用前用标准Vc溶液标定此溶液。
c.淀粉指示剂：
在10ml冷水中加入2g可溶性淀粉，慢慢向100ml沸水中到此浆液并煮沸1分钟，冷却后移入指示剂瓶中。
d.10%柠檬酸溶液：
用1000ml蒸馏水溶解100g柠檬酸。
d.Vc标准溶液：
精确称取0.250gVc，用10%柠檬酸溶液溶解，并定容至250ml，此溶液极不稳定，应立即使用。
e.0.01N碘液的标定：
移取10ml标准液于150ml烧杯中，加入约90ml10%柠檬酸溶液，用碘液滴定至终点（兰色），记录所用碘液毫升数（V），碘值=10/V。
（2）样液滴定
用移液管取待测果汁样品10ml入50ml烧杯中，加入2～3滴淀粉指示剂，用0.01N碘液滴定至溶液显兰色，且30s内不褪色即为终点，记录所用碘液体积V2。
（3）结果计算：
Vc（mg/100ml）=碘值*V2*10
三、微生物检测
1、细菌总数按GB4789.2规定的方法测定
菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
每种细菌都有它一定的生理特性。
培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。
但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法去作细菌菌落总的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。
（1）设备和材料
·温箱:
36箱±1℃。
·冰箱:
0～4℃。
·恒温水浴:
46±1℃。
·天平。
·电炉:
可调式。
·吸管:
容量为1ml和10ml，标有0.1ml单位的刻度。
·三角烧瓶:
容量为500ml。
·玻璃珠:
直径为5mm
·平皿:
皿底直径为9cm。
·试管:
18×200mm。
·酒精灯。
·均质器或乳钵。
·试管架。
·灭菌刀或剪刀。
·灭菌镊子。
·酒精棉球。
·登记簿。
·玻璃蜡笔。
（2）培养基和试剂
·营养琼脂培养基:
GB4789.28-84《食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂》3.7条。
·75%乙醇。
·生理盐水稀释液:
定量分装于试管内，灭菌。
（3）检验过程
菌落总数的检验程序如下:
每皿内加入适量琼脂
作成几个适当倍数的稀释液
报告
菌落计数
48±2h
36±1℃
（4）操作步骤
1）检样稀释及培养
a.以无菌操作，将检样10ml放于含有90ml灭菌生理盐水稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠），经充分振摇作成1:
10的均匀稀释液。
用1ml灭菌吸管吸取1:
10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，作成1:
100的稀释液。
b.另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
c.根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴保温）注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
d.待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得毫升样品所含菌落总数。
2）菌落计数方法
作平板菌落计数时，可肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。
3）菌落计数报告
a.平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很匀匀，即可计算半个平板后乘2代表全皿菌落数。
b.稀释度的选择
·应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表例1）。
·若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字（见表例2及3）。
·若所有稀释度的平均产菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例4）。
·若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落乘以稀释倍数报告之（见表例5）。
·若所有稀释度均无菌落生长，则以小于（<）1乘以最低稀释
倍数报告之（见表例6）。
·若所有稀释度的平均菌落数均在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例7）。
c.菌落数的报告
菌落数在100以内时按其实有数报告;大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。
为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示（见表“报告方式”栏）.
稀释度选择及菌落数报告方式
例次
稀释液及菌落数
两稀释液之比
菌落总数
（个/g或个/ml）
报告方式
（个/g或个/ml）
10-1
10-2
10-3
1
多不可计
164
20
-
16400
16000或1.6*104
2
多不可计
295
46
1.6
37750
38000或3.8*104
3
多不可计
271
60
2.2
27100
27000或2.7*104
4
多不可计
多不可计
313
-
313000
310000或3.1*104
5
27
11
5
-
270
270或2.7*105
6
0
0
0
-
<1*10
<10
7
多不可计
305
12
-
30500
31000或3.1*104
2、大肠菌群GB4789.3
大肠菌群系指一群在37℃24小时能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。
食品中大肠菌群数系以每100ml（g）检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。
（１）设备和材料
·温箱:
36±1℃。
·水浴:
44±0.5℃。
仪器与材料
天平、显微镜。
均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、吸管、载玻片。
（２）培养基及试剂
·乳糖胆盐发酵管:
GB4789.28-84《食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂》中3.9。
·伊红美蓝琼脂:
GB4789.28--84中3.23。
·乳糖发酵管:
GB4789.28--84中3.10。
·蛋白胨水:
GB4789.28--84中2.13。
·靛基质试剂:
GB4789.28--84中2.13。
·革兰氏染色液:
GB4789.28--84中1.2。
（３）检验程序
检样
大肠菌群检验程序如下：
稀释
大肠菌群阴性
产气
伊红美蓝琼脂平板36±1℃24±2h
报告
乳糖发酵管
36±1℃24±2h
革兰氏染色
革兰氏阴性
无芽胞杆菌
革兰氏阳性
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阴性
报告
大肠菌群阳性
报告
报告
（4）操作步骤
1）检样稀释
∙以无菌操作将检样10ml放于含有90ml灭菌生理盐水稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠），经充分振摇成1:
10的均匀稀释液。
∙用1ml灭菌吸管吸取1:
10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水稀释液的试管内，振摇试管，混匀，作成1:
100的稀释液。
∙另取1ml灭菌吸管，按上项操作依次作10倍递增稀释液，每递增稀释一次，
换用1支1ml灭菌吸管。
∙根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个
稀释度接种3管。
2）乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。
每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。
3）分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。
4）证实试验
在上述平板上，挑取可疑的大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
5）报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）大肠菌群的最可能数。
（5）粪大肠菌落
1）检样稀释见（4）中1）条。
2）44℃乳糖发酵试验
将检样以无菌操作接种于乳糖胆盐发酵管内（1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，可用单料乳糖胆盐发酵管），置44±0.5℃水浴内，培养24±2h，经培养后，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为阴性。
如有产气者，则按下列程序进行。
3）证实试验
将所有产气发酵管，分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，并同时接种蛋白胨水，置44±0.5℃培养24h。
经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长，并做革兰氏染色镜检。
在蛋白胨水内加靛基质试剂约0.5ml，观察靛基质反应。
4）结果评定
凡靛基质阳性，平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。
5）报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）粪大肠菌群的最可能数。
（６）大肠菌群测定方法——滤膜法
1）培养基
∙品红亚硫酸钠培养基：
称取39g营养琼脂，3.5gK2HPO4、5g无水亚硫酸钠，加20ml5%碱性品红乙醇溶液，1000ml蒸馏水，加热溶解，于高压蒸气灭菌器内，经0.15Mpa压力下灭菌20min，倒入ф15mm平皿内20～30ml摇匀，冷后放入冰箱保存。
∙乳糖蛋白胨培养液
称取10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖、5gNaCl，加1000ml蒸馏水加热溶解，调整pH=7.2～7.4，1ml1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀后分装于装有导管的ф15mm试管中，灭菌备用。
2）步骤
∙以无菌操作将检样10ml放于含有90ml灭菌生理盐水稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠），经充分振摇成1:
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