《生物化学》第三版课后习题答案详解上册.docx

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《生物化学》第三版课后习题答案详解上册

第三章  氨基酸

提要

α-氨基酸就是蛋白质得构件分子,当用酸、碱或蛋白酶水解蛋白质时可获得它们。

蛋白质中得氨基酸都就是L型得。

但碱水解得到得氨基酸就是D型与L型得消旋混合物。

参与蛋白质组成得基本氨基酸只有20种。

此外还有若干种氨基酸在某些蛋白质中存在,但它们都就是在蛋白质生物合成后由相应就是基本氨基酸（残基）经化学修饰而成。

除参与蛋白质组成得氨基酸外,还有很多种其她氨基酸存在与各种组织与细胞中,有得就是β-、γ-或δ-氨基酸,有些就是D型氨基酸。

氨基酸就是两性电解质。

当pH接近1时,氨基酸得可解离基团全部质子化,当pH在13左右时,则全部去质子化。

在这中间得某一pH（因不同氨基酸而异）,氨基酸以等电得兼性离子（H3N+CHRCOO-）状态存在。

某一氨基酸处于净电荷为零得兼性离子状态时得介质pH称为该氨基酸得等电点,用pI表示。

所有得α-氨基酸都能与茚三酮发生颜色反应。

α-NH2与2,4-二硝基氟苯（DNFB）作用产生相应得DNP-氨基酸（Sanger反应）;α-NH2与苯乙硫氰酸酯（PITC）作用形成相应氨基酸得苯胺基硫甲酰衍生物（Edman反应）。

胱氨酸中得二硫键可用氧化剂（如过甲酸）或还原剂（如巯基乙醇）断裂。

半胱氨酸得SH基在空气中氧化则成二硫键。

这几个反应在氨基酸荷蛋白质化学中占有重要地位。

除甘氨酸外α-氨基酸得α-碳就是一个手性碳原子,因此α-氨基酸具有光学活性。

比旋就是α-氨基酸得物理常数之一,它就是鉴别各种氨基酸得一种根据。

参与蛋白质组成得氨基酸中色氨酸、酪氨酸与苯丙氨酸在紫外区有光吸收,这就是紫外吸收法定量蛋白质得依据。

核磁共振（NMR）波谱技术在氨基酸与蛋白质得化学表征方面起重要作用。

氨基酸分析分离方法主要就是基于氨基酸得酸碱性质与极性大小。

常用方法有离子交换柱层析、高效液相层析（HPLC）等。

习题

1、写出下列氨基酸得单字母与三字母得缩写符号:

精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰氨、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸与酪氨酸。

[见表3-1]

表3-1  氨基酸得简写符号

名称      三字母符号      单字母符号      名称      三字母符号      单字母符号

丙氨酸（alanine）      Ala      A      亮氨酸（leucine）      Leu      L

精氨酸（arginine）      Arg      R      赖氨酸（lysine）      Lys      K

天冬酰氨（asparagines）      Asn      N      甲硫氨酸（蛋氨酸）（methionine）      Met      M

天冬氨酸（asparticacid）      Asp      D      苯丙氨酸（phenylalanine）      Phe      F

Asn与/或Asp      Asx      B                

半胱氨酸（cysteine）      Cys      C      脯氨酸（praline）      Pro      P

谷氨酰氨（glutamine）      Gln      Q      丝氨酸（serine）      Ser      S

谷氨酸（glutamicacid）      Glu      E      苏氨酸（threonine）      Thr      T

Gln与/或Glu      Gls      Z                

甘氨酸（glycine）      Gly      G      色氨酸（tryptophan）      Trp      W

组氨酸（histidine）      His      H      酪氨酸（tyrosine）      Tyr      Y

异亮氨酸（isoleucine）      Ile      I      缬氨酸（valine）      Val      V

2、计算赖氨酸得εα-NH3+20%被解离时得溶液PH。

[9、9]

解:

pH=pKa+lg20%  pKa=10、53（见表3-3,P133）

  pH=10、53+lg20%=9、83

3、计算谷氨酸得γ-COOH三分之二被解离时得溶液pH。

[4、6]

解:

pH=pKa+lg2/3%  pKa=4、25

  pH=4、25+0、176=4、426

4、计算下列物质0、3mol/L溶液得pH:

（a）亮氨酸盐酸盐;（b）亮氨酸钠盐;（c）等电亮氨酸。

[（a）约1、46,（b）约11、5,（c）约6、05]

5、根据表3-3中氨基酸得pKa值,计算下列氨基酸得pI值:

丙氨酸、半胱氨酸、谷氨酸与精氨酸。

[pI:

6、02;5、02;3、22;10、76]

解:

pI=1/2（pKa1+pKa2）

  pI（Ala）=1/2（2、34+9、69）=6、02

  pI（Cys）=1/2（1、71+10、78）=5、02

  pI（Glu）=1/2（2、19+4、25）=3、22

  pI（Ala）=1/2（9、04+12、48）=10、76

6、向1L1mol/L得处于等电点得甘氨酸溶液加入0、3molHCl,问所得溶液得pH就是多少？

如果加入0、3molNaOH以代替HCl时,pH将就是多少？

[pH:

2、71;9、23]

7、将丙氨酸溶液（400ml）调节到pH8、0,然后向该溶液中加入过量得甲醛,当所得溶液用碱反滴定至Ph8、0时,消耗0、2mol/LNaOH溶液250ml。

问起始溶液中丙氨酸得含量为多少克？

[4.45g]

8、计算0、25mol/L得组氨酸溶液在pH6、4时各种离子形式得浓度（mol/L）。

[His2+为1、78×10-4,His+为0、071,His0为2、8×10-4]

9、说明用含一个结晶水得固体组氨酸盐酸盐（相对分子质量=209、6;咪唑基pKa=6、0）与1mol/LKOH配制1LpH6、5得0、2mol/L组氨酸盐缓冲液得方法[取组氨酸盐酸盐41.92g（0、2mol）,加入352ml1mol/LKOH,用水稀释至1L]

10、为什么氨基酸得茚三酮反映液能用测压法定量氨基酸？

解:

茚三酮在弱酸性溶液中与α-氨基酸共热,引起氨基酸氧化脱氨脱羧反映,（其反应化学式见P139）,其中,定量释放得CO2可用测压法测量,从而计算出参加反应得氨基酸量。

11、L-亮氨酸溶液（3.0g/50ml6mol/LHCl）在20cm旋光管中测得得旋光度为+1、81º。

计算L-亮氨酸在6mol/LHCl中得比旋（[a]）。

[[a]=+15、1º]

12、标出异亮氨酸得4个光学异构体得（R,S）构型名称。

[参考图3-15]

13、甘氨酸在溶剂A中得溶解度为在溶剂B中得4倍,苯丙氨酸在溶剂A中得溶解度为溶剂B中得两倍。

利用在溶剂A与B之间得逆流分溶方法将甘氨酸与苯丙氨酸分开。

在起始溶液中甘氨酸含量为100mg,苯丙氨酸为81mg,试回答下列问题:

（1）利用由4个分溶管组成得逆流分溶系统时,甘氨酸与苯丙氨酸各在哪一号分溶管中含量最高？

（2）在这样得管中每种氨基酸各为多少毫克？

[

（1）第4管与第3管;

（2）51、2mgGly+24mgPhe与38、4mgGly+36mgPhe]

解:

根据逆流分溶原理,可得:

对于Gly:

Kd=CA/CB=4=q（动相）/p（静相）  p+q=1=（1/5+4/5）

      4个分溶管分溶3次:

（1/5+4/5）3=1/125+2/125+48/125+64/125

对于Phe:

Kd=CA/CB=2=q（动相）/p（静相）  p+q=1=（1/3+2/3）

      4个分溶管分溶3次:

（1/3+2/3）3=1/27+6/27+12/27+8/27

故利用4个分溶管组成得分溶系统中,甘氨酸与苯丙氨酸各在4管与第3管中含量最高,其中:

第4管:

Gly:

64/125×100=51、2mg  Phe:

8/27×81=24mg

第3管:

Gly:

48/125×100=38、4mg  Phe:

12/27×81=36mg

14、指出在正丁醇:

醋酸:

水得系统中进行纸层析时,下列混合物中氨基酸得相对迁移率（假定水相得pH为4、5）:

（1）Ile,  Lys;

（2）Phe,Ser（3）Ala,Val,Leu;（4）Pro,Val  （5）Glu,Asp;（6）Tyr,Ala,Ser,His、

[Ile>lys;Phe,>Ser;Leu>Val>Ala,;Val>Pro;Glu>Asp;Tyr>Ala>Ser≌His]

解:

根据P151图3-25可得结果。

15.将含有天冬氨酸（pI=2、98）、甘氨酸（pI=5、97）、亮氨酸（pI=6、53）与赖氨酸（pI=5、98）得柠檬酸缓冲液,加到预先同样缓冲液平衡过得强阳离交换树脂中,随后用爱缓冲液析脱此柱,并分别收集洗出液,这5种氨基酸将按什么次序洗脱下来？

[Asp,Thr,Gly,Leu,Lys]

解:

在pH3左右,氨基酸与阳离子交换树脂之间得静电吸引得大小次序就是减刑氨基酸（A2+）>中性氨基酸（A+）>酸性氨基酸（A0）。

因此氨基酸得洗出顺序大体上就是酸性氨基酸、中性氨基酸,最后就是碱性氨基酸,由于氨基酸与树脂之间还存在疏水相互作用,所以其洗脱顺序为:

Asp,Thr,Gly,Leu,Lys。

第四章  蛋白质得共价结构

提要

蛋白质分子就是由一条或多条肽链构成得生物大分子。

多肽链就是由氨基酸通过肽键共价连接而成得,各种多肽链都有自己特定得氨基酸序列。

蛋白质得相对分子质量介于6000到1000000或更高。

蛋白质分为两大类:

单纯蛋白质与缀合蛋白质。

根据分子形状可分为纤维状蛋白质、球状蛋白质与膜蛋白质。

此外还可按蛋白质得生物学功能分类。

为了表示蛋白质结构得不同组织层次,经常使用一级结构、二级结构、三级结构与四级结构这样一些专门术语。

一级结构就就是共价主链得氨基酸序列,有时也称化学结构。

二、三与四级结构又称空间结构（即三维结构）或高级结构。

蛋白质得生物功能决定于它得高级结构,高级结构就是由一级结构即氨基酸序列决定得,二氨基酸序列就是由遗传物质DNA得核苷酸序列规定得。

肽键（CO—NH）就是连接多肽链主链中氨基酸残缺得共价键,二硫键就是使多肽链之间交联或使多肽链成环得共价键。

多肽链或蛋白质当发生部分水解时,可形成长短不一得肽段。

除部分水解可以产生小肽之外,生物界还存在许多游离得小肽,如谷胱甘肽等。

小肽晶体得熔点都很高,这说明短肽得晶体就是离子晶格、在水溶液中也就是以偶极离子存在得。

测定蛋白质一级结构得策略就是:

（1）测定蛋白质分子中多肽链数目;

（2）拆分蛋白质分子得多肽链;（3）断开多肽链内得二硫桥;（4）分析每一多肽链得氨基酸组成;（5）鉴定多肽链得N-末端与C-末端残基;（6）断裂多肽链成较小得肽段,并将它们分离开来;（7）测定各肽段得氨基酸序列;（8）利用重叠肽重建完整多肽链得一级结构;（9）确定半胱氨酸残基形成得S-S交联桥得位置。

序列分析中得重要方法与技术有:

测定N-末端基得苯异硫氰酸酯（PITC）法,分析C-末端基得羧肽酶法,用于多肽链局部断裂得酶裂解与CNBr化学裂解,断裂二硫桥得巯基乙醇处理,测定肽段氨基酸序列得Edman化学降解与电喷射串联质谱技术,重建多肽链一级序列得重叠肽拼凑法以及用于二硫桥定位得对角线电泳等。

在不同生物体中行使相同或相似功能得蛋白质称同源蛋白质。

同源蛋白质具有明显得序列相似性（称序列同源）,两个物种得同源蛋白质,其序列间得氨基酸差异数目与这些物种间得系统发生差异就是成比例得。

并根据同源蛋白质得氨基酸序列资料建立起进化树。

同源蛋白质具有共同得进化起源。

在生物体内有些蛋白质常以前体形试合成,只有按一定方式裂解除去部分肽链之后才出现生物活性,这一现象称蛋白质得激活。

血液凝固就是涉及氨基酸序列断裂得一系列酶原被激活得结果,酶促激活得级联放大,使血凝块迅速形成成为可能。

凝血酶原与血清蛋白原就是两个最重要得血凝因子。

血纤蛋白蛋白原在凝血酶得作用下转变为血清蛋白凝块（血块得主要成分）。

我国在20世纪60年代首次在世界上人工合成了蛋白质——结晶牛胰岛素。

近二、三十年发展起来得固相肽合成就是控制合成技术上得一个巨大进步,它对分子生物学与基因工程也就具有重要影响与意义。

至今利用Merrifield固相肽合成仪已成功地合成了许多肽与蛋白质。

习题

1、如果一个相对分子质量为12000得蛋白质,含10种氨基酸,并假设每种氨基酸在该蛋白质分子中得数目相等,问这种蛋白质有多少种可能得排列顺序？

[10100]

解:

1012000/120=10100

2、有一个A肽,经酸解分析得知为Lys、His、Asp、Glu2、Ala以及Val、Tyr忽然两个NH3分子组成。

当A肽与FDNB试剂反应后得DNP-Asp;当用羧肽酶处理后得游离缬氨酸。

如果我们在实验中将A肽用胰蛋白酶降解时,得到两种肽,其中一种（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）在pH6、4时,净电荷为零,另一种（His、Glu以及Val）可给除DNP-His,在pH6、4时,带正电荷。

此外,A肽用糜蛋白酶降解时,也得到两种肽,其中一种（Asp、Ala、Tyr）在pH6、4时全中性,另一种（Lys、His、Glu2以及Val）在pH6、4时带正电荷。

问A肽得氨基酸序列如何？

[Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val]

解:

1、N-末端分析:

FDNB法得:

Asp-;

  2、C-末端分析:

羧肽酶法得:

-Val;

  3、胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基得羧基形成得肽键,得到得就是以Arg与Lys为C-末端残基得肽断。

酸水解使Asn→Asp+NH4+,由已知条件（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）可得:

Asn-（  ）-（  ）-（  ）-Lys-（  ）-（  ）-Val;

  4、FDNB法分析N-末端得DNP-His,酸水解使Gln→Glu+NH4+由已知条件（His、Glu、Val）可得:

Asn-（  ）-（  ）-（  ）-Lys-His-Gln-Val;

  5、糜蛋白酶断裂Phe、Trp与Tyr等疏水氨基酸残基得羧基端肽键。

由题,得到得一条肽（Asp、Ala、Tyr）结合（3）、（4）可得该肽得氨基酸序列为:

Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val

3、某多肽得氨基酸序列如下:

Glu-Val-Lys-Asn-Cys-Phe-Arg-Trp-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Glu-Ala-Thr-Cys-Arg-His-Met-Asp-Gln-Cys-Tyr-Pro-Gly-Glu_Glu-Lys。

（1）如用胰蛋白酶处理,此多肽将产生几个肽？

并解释原因（假设没有二硫键存在）;

（2）在pH7、5时,此多肽得净电荷就是多少单位？

说明理由（假设pKa值:

α-COOH4、0;α-NH3+6、0;Glu与Asp侧链基4、0;Lys与Arg侧链基11、0;His侧链基7、5;Cys侧链基9、0;Tyr侧链基11、0）;（3）如何判断此多肽就是否含有二硫键？

假如有二硫键存在,请设计实验确定5,17与23位上得Cys哪两个参与形成？

[

（1）4个肽;

（2）-2、5单位;（3）如果多肽中无二硫键存在,经胰蛋白酶水解后应得4个肽段;如果存在一个二硫键应得3个肽段并且个肽段所带电荷不同,因此可用离子交换层析、电泳等方法将肽段分开,鉴定出含二硫键得肽段,测定其氨基酸顺序,便可确定二硫键得位置]

4、今有一个七肽,经分析它得氨基酸组成就是:

Lys、Pro、Arg、Phe、Ala、Tyr与Ser。

此肽未经糜蛋白酶处理时,与FDNB反应不产生α-DNP-氨基酸。

经糜蛋白酶作用后,此肽断裂城两个肽段,其氨基酸组成分别为Ala、Tyr、Ser与Pro、Phe、Lys、Arg。

这两个肽段分别与FDNB反应,可分别产生DNP-Ser与DNP-Lys。

此肽与胰蛋白酶反应能生成两个肽段,它们得氨基酸组成分别就是Arg、Pro与Phe、Tyr、Lys、Ser、Ala。

试问此七肽得一级结构怎样？

[它就是一个环肽,序列为:

-Phe-Ser-Ala-Tyr-Lys-Pro-Arg-]

解:

（1）此肽未经糜蛋白酶处理时,与FDNB反应不产生α-DNP-氨基酸,说明此肽不含游离末端NH2,即此肽为一环肽;

（2）糜蛋白酶断裂Phe、Trp与Tyr等疏水氨基酸残基得羧基端肽键,由已知两肽段氨基酸组成（Ala、Tyr、Ser与Pro、Phe、Lys、Arg）可得:

-（  ）-（  ）-Tyr-与-（  ）-（  ）-（  ）-Phe-;

  （3）由

（2）得得两肽段分别与FDNB反应,分别产生DNP-Ser与DNP-Lys可知该两肽段得N-末端分别为-Ser-与-Lys-,结合

（2）可得:

-Ser-Ala-Tyr-与-Lys-（  ）-（  ）-Phe-;

  （4）胰蛋白酶专一断裂Arg或Lys残基得羧基参与形成得肽键,由题生成得两肽段氨基酸组成（Arg、Pro与Phe、Tyr、Lys、Ser、Ala）可得:

-Pro-Arg-与-（  ）-（  ）-（  ）-（  ）-Lys;

  综合

（2）、（3）、（4）可得此肽一级结构为:

-Lys-Pro-Arg-Phe-Ser-Ala-Tyr-

5、三肽Lys-Lys-Lys得pI值必定大于它得任何一个个别基团得pKa值,这种说法就是否正确？

为什么？

[正确,因为此三肽处于等电点时,七解离集团所处得状态就是C-末端COO-（pKa=3、0）,N末端NH2（pKa≌8、0）,3个侧链3（1/3ε-NH3+）（pKa=10、53）（pKa=10、53）,因此pI>最大得pKa值（10、53）]

6、一个多肽可还原为两个肽段,它们得序列如下:

链1为Ala-Cys-Phe-Pro-Lys-Arg-Trp-Cys-Arg-Arg-

Val-Cys;链2为Cys-Tyr-Cys-Phe-Cys。

当用嗜热菌蛋白酶消化原多肽（具有完整得二硫键）时可用下列各肽:

（1）（Ala、Cys2、Val）;

（2）（Arg、Lys、Phe、Pro）;（3）（Arg2、Cys2、Trp、Tyr）;（4）（Cys2、Phe）。

试指出在该天然多肽中二硫键得位置。

（结构如下图）

          S-S

Ala-Cys-Phe-Pro-Lys-Arg-Trp-Cys-Arg-Arg-Val_Cys

                  S

                  S

            Cys-Tyr-Cys-Phe-Cys

解:

嗜热菌蛋白酶作用专一性较差,根据题中已知条件:

（1）消化原多肽得到（Ala、Cys2、Val）,说明链1在2位Cys后及11位Val前发生断裂,2位Cys与12位Cys之间有二硫键;

（2）由链1序列可得该肽段序列为:

-Phe-Pro-Lys-Arg-;

  （3）由

（1）

（2）可知该肽段（Arg2、Cys2、Trp、Tyr）中必有一Cys来自链2,另一Cys为链1中8位Cys,即链1中8位Cys与链2中得一个Cys有二硫键;

（4）嗜热菌蛋白酶能水解Tyr、Phe等疏水氨基酸残基,故此肽（Cys2、Phe）来自链2,结合（3）中含Tyr,可知（3）中形成得二硫键为链18位Cys与链2中3位Cys与链2中3位Cys之间;（4）中（Cys2、Phe）说明链2中1位Cys与5位Cys中有二硫键。

综合

（1）、

（2）、（3）、（4）可得结果。

7、一个十肽得氨基酸分析表明其水解液中存在下列产物:

NH4+  Asp  Glu    Tyr    Arg

Met    Pro    Lys    Ser    Phe

并观察下列事实:

（1）用羧肽酶A与B处理该十肽无效;

（2）胰蛋白酶处理产生两各四肽与游离得Lys;（3）梭菌蛋白酶处理产生一个四肽与一个六肽;（4）溴化氢处理产生一个八肽与一个二肽,用单字母符号表示其序列位NP;（5）胰凝乳蛋白酶处理产生两个三肽与一个四肽,N-末端得胰凝乳蛋白酶水解肽段在中性pH时携带-1净电荷,在pH12时携带-3净电荷;（6）一轮Edman降解给出下面得PTH衍生物:

（图略）写出该十肽得氨基酸序列。

[Ser-Glu-Tyr-Arg-Lys-Lys-Phe-Met-Asn-Pro]

解:

（1）用羧肽酶A与B处理十肽无效说明该十肽C-末端残基为-Pro;

（2）胰蛋白酶专一断裂Lys或Arg残基得羧基参与形成得肽键,该十肽在胰蛋白酶处理后产生了两个四肽与有利得Lys,说明十肽中含Lys-…或-Arg-…-Lys-Lys-…或-Arg-Lys-…-Lys-…Arg-Lys-…四种可能得肽段,且水解位置在4与5、5与6或4与5、8与9、9与10之间;

  （3）梭菌蛋白酶专一裂解Arg残基得羧基端肽键,处理该十肽后,产生一个四肽与一个六肽,则可知该十肽第四位为-Arg-;

  （4）溴化氰只断裂由Met残基得羧基参加形成得肽键,处理该十肽后产生一个八肽与一个二肽,说明该十肽第八位或第二位为-Met-;用单字母表示二肽为NP,即-Asn-Pro-,故该十肽第八位为-Met-;

  （5）胰凝乳蛋白酶断裂Phe、Trp与Tyr等疏水氨基酸残基得羧基端肽键,处理该十肽后,产生两个三肽与一个四肽,说明该十肽第三位、第六位或第七位为Trp或Phe;

  （6）一轮Edman降解分析N-末端,根据其反应规律,可得N-末端氨基酸残疾结构式为:

-NH-CH（-CH2OH）-C（=O）-,还原为-NH-CH（-CH2OH）-COOH-,可知此为Ser;

  结合

（1）、

（2）、（3）、（4）、（5）、（6）可知该十肽得氨基酸序列为:

Ser-Glu-Tyr-Arg-Lys-Lys-Phe-Met-Asn-Pro

8、一个四肽,经胰蛋白酶水解得两个片段,一个片段在280nm附近有强得光吸收,并且Pauly反应与坂口反应（检测胍基得）呈阳性。

另一片段用溴化氰处理释放出一个与茚三酮反应呈黄色得氨基酸。

写出此四肽得氨基酸序列。

[YRMP]

解:

胰蛋白酶酶专一水解Lys与Arg残基得羧基参与形成得肽键,故该四肽中含Lys或Arg;一肽段在280nm附近有强光吸收且Pauly反应与坂口反应（检测胍基得）呈阳性,说明该肽段含Tyr与Arg;溴化氰专一断裂Met残基得羧基参加形成得肽键,又因生成了与茚三酮反应呈黄色得氨基酸,故该肽段为-Met-Pro-;所以该四肽得氨基酸组成为Tyr-Arg-Met-Pro,即YRMP。

9蜂毒明肽（apamin）就是存在蜜蜂毒液中得一个十八肽,其序列