细胞培养基本方法.docx

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细胞培养基本方法

细胞培养基本方法

1.操作台基本要求：

2.随着传代次数的增加，连续培养细胞系遗传物质不稳定，不得将细胞存放于-20℃或-80℃冰柜中，因为细胞存在次低温条件下活力迅速降低。

3.细胞污染：

（1）细菌污染

（2）酵母污染

（3）霉菌污染

初期PH值维持稳定，污染严重后PH值迅速升高，导致培养基浑浊。

（4）病毒污染

一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响，通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色，ELISA实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出细胞为病毒污染。

（5）支原体污染

唯一检测支原体污染的方法是采用荧光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自显影

4.抗生素只能作为对付污染的最后手段而且只能短期使用，并应尽快撤出

5．适合贴壁的细胞和悬浮的细胞

13.贴壁细胞的传代

14.贴壁昆虫细胞传代：

15.悬浮细胞传代流程

16.细胞冻存：

17.冷冻细胞解冻方案：

18.利用血球计数器进行细胞计数：

19.台盼蓝拒染法：