各种培养基的制作方法.doc

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配方一萨氏（Sabouraud's）培养基

蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升

先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。

　1.营养肉汤培养基

　　牛肉膏0.3克

　　蛋白胨1.0克

　　NaCl0.5克

　　水100毫升

　　pH7.0～7.2

　　在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。

分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。

常用于培养细菌。

　　2.营养琼脂培养基

　　在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。

常用于培养细菌。

　　3.肉汁蛋白胨液体培养基

　　牛肉500克

　　蛋白胨10克

　　NaCl5克

　　pH7.1～7.2

　　取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。

用纱布将肉汁过滤，补足失水。

向肉汁中加入蛋白胨和食盐。

将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。

分装，高压蒸汽灭菌。

　　将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。

常用于培养细菌。

　　4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基）

　　可溶性淀粉2克

　　K2HPO40.05克

　　MgSO4·7H2O0.05克

　　KNO30.1克

　　NaCl0.05克

　　FeSO40.001克

　　琼脂2克

　　水100毫升

　　pH7.2～7.4

　　在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。

再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。

待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。

分装后，高压蒸汽灭菌。

本培养基常用于培养放线菌。

　　5.马铃薯蔗糖培养基

　　马铃薯200克

　　蔗糖10克

　　琼脂20克

　　水1000毫升

　　自然pH

　　称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。

在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。

分装后，高压蒸汽灭菌。

常用于培养酵母菌。

　　6.麦芽汁培养基

　　将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。

常用于培养酵母菌。

　　7.察氏培养基

　　NaNO32克

　　K2HPO41克

　　KCl0.5克

　　MgSO40.5克

　　FeSO40.01克

　　蔗糖30克

　　琼脂15～20克

　　水1000毫升

　　自然pH

　　分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌。

常用于培养霉菌。

　　8.豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）培养基

　　黄豆芽100克

　　葡萄糖50克

　　琼脂15克

　　水1000毫升

　　称取新鲜黄豆芽100克，放入烧杯中，加1000毫升水，煮沸30分钟，用纱布过滤，补足失水。

再加葡萄糖（或蔗糖）50克，琼脂15克，加热至融化，补足失水。

分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌。

常用于培养霉菌。

　　9.伊红美蓝培养基（E、M、B培养基）

　　乳糖10克

　　蛋白胨5克

　　NaCl5克

　　K2HPO42克

　　2%伊红水溶液20毫升

　　0.35%美蓝水溶液20毫升

　　琼脂20克

　　水1000毫升

pH7.2

　1.配制溶液

　　向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。

对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。

　　配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。

并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。

　　2.调节pH值

　　用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。

　　3.过滤

　　用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。

用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。

　　4.分装

　　已过滤的培养基应进行分装。

如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。

如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。

　　分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。

分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。

　　装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。

一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。

每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。

　　5.加棉塞

　　分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。

堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。

棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。

制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。

棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。

棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。

棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。

塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。

　　6.制作斜面培养基和平板培养基

　　培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。

（1）制作斜面培养基。

在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。

将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。

（2）制作平板培养基。

将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。

铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。

改良的Fries氏液体培养液：

蔗糖30g、酒石酸铵5g、NH4NO30.5g、KH2PO41g、

MgSO4·7H2O0.5g、CaCl20.1g、酵母浸汁0.5g、蒸馏水1000mL