革兰氏染色.pptx

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,2,1.1细菌染色法,单染色法：

只用一种染料染色，能清楚观察菌体大小、形态与排列，不能鉴别细菌。

复染色法（鉴别染色）：

采用两种以上的不同染料进行先后染色，可将细菌染成不同的颜色，以便鉴别细菌。

抗酸染色:

用于检查结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等抗酸性细菌（一些一旦用某些方法染色后，能够抵抗酸性酒精脱色的细菌），阳性者为红色。

特殊染色：

荚膜染色，芽胞染色，鞭毛染色，极体染色（用于白喉杆菌异染颗粒染色）。

1.2革兰氏染色法,革兰染色法是丹麦内科医生ChristainGram于1884年创立的一种细菌复染色方法，已有130多年的历史，仍在广泛使用。

1.3革兰氏染色法的原理,通透性学说、等电学说、化学学说,1.3革兰氏染色的意义,鉴别细菌：

把细菌分成G+和G-两大类。

选择抗菌药物：

例如G+球菌对青霉素敏感,G-杆菌耐药。

了解细菌的致病机理：

G+菌大多产生外毒素,G-菌产生内毒素。

革兰染色的步骤涂片干燥固定染色,实验器材与材料,接种环、细菌分离培养物（上次实验平板）,接种环接种针，酒精灯，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，细菌分离培养物（上次实验平板），革兰氏染色液,2涂片的制备,灭菌接种环,2涂片的制备,细菌合适,细菌较多,接种环取盐水3ul2滴,水滴间距小于2cm。

取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混匀，涂成大于1cm2均匀涂膜。

涂毕环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。

2涂片的制备,固定Fixation,涂片smear,干燥dry,手持载玻片一端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间23秒钟。

促使菌体蛋白质凝固，固定在载玻片上，以免染色水洗的时候，细菌被水洗掉。

初染：

结晶紫染液染1min水洗，甩干媒染：

卢戈氏碘液染1min水洗，甩干脱色：

95%乙醇脱色约30s水洗，甩干复染：

复红染液染30s水洗，甩干印干油镜观检,染色,关键步骤！

3革兰氏染色的方法和步骤,生物安全警告BIOHAZARD,本次实验操作，可产生几十至几百个微生物气溶胶颗粒。

气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。

实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。

实验时应坐稳，很专注，不分心，在火焰周围1020厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话，以免感染病原菌。

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