amy土壤整理采样测定微生物解读.docx

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amy土壤整理采样测定微生物解读

目录

一、土壤样品采集方法3

二、土壤样品处理和保存4

三、土壤物理性质项目的测定6

1.土壤水分的测定：

铝盒烘干法6

2.土壤温度的测定：

热敏电阻法、地温计法6

3.土壤容重的测定：

环刀法6

4.土壤田间持水量的测定：

环刀法7

5.水稳定团粒的测定：

湿筛法7

四、土壤化学性质项目的测定8

1.土壤pH值的测定：

电位计法8

2.土壤有机质含量的测定：

马弗炉灼烧法8

3．土壤氮含量的测定（硝态氮、氨态氮、全氮）8

3.1硝态氮的测定8

3.2氨态氮的测定9

3.3全氮测定（采用凯氏定氮法）10

4、土壤磷的测定（全磷、有效磷）11

4.1全磷：

HClO4—H2SO4法11

2.2土壤速效磷含量的测定：

0.5mol·L-1NaHCO3浸提—钼锑抗比色法14

5．土壤钾的测定（速效钾、全钾）15

5.1.土壤速效钾含量的测定：

醋酸铵浸提—火焰光度计法15

5.2．全钾：

NaOH熔融，火焰光度法（FP640型火焰光度计）16

6、土壤酶活性的测定18

1．蔗糖酶活性的测定18

2．蛋白酶活性的测定19

3．碱性磷酸酶活性的测定20

4．脱氢酶活性的测定21

5．FDA水解酶活性的测定22

四、土壤微生物23

1．分离与纯化23

2．菌株的鉴定的生理生化实验25

2.1糖类发酵与氧化实验25

2.2过氧化酶测定26

2.3细胞色素氧化酶测定26

3．微生物鉴定27

4.土壤微生物生物量的测定29

一、土壤样品采集方法

土壤样品的采集方法对分析结果和评价至关重要。

因此，采集的样品必须具有代表性。

由于土壤自然条件、类型和污染状况不同，采样的方法也不同，常用的方法有：

1、对角线采样法。

这种方法适宜于受到废水污染或污水灌溉的田块。

由田块进水口向对角引一条斜线，将此线分成三等份或五等份，在每等份的中央点取样。

2、蛇形采样法。

这种方法适宜于面积较大，地形不平坦，土壤不均匀的田块。

采样品按蛇形多布置一些。

3、棋盘形采样法。

对于面积适中、地势平坦，地形完整的田块，适合用这种采样法。

如土壤不均匀，布置10个以上的采样点．土壤均匀，采样点可少些。

4、梅花形采样法。

对于面积不大，地势平坦，土壤较均匀的田块，适合用这种方法。

梅花形采样的布点以5—10个为宜。

方法名称

适用田块

采样点数

梅花形采样法

适宜面积较小、土势平坦、土壤较均匀的田块

5～10个

棋盘式采样法

中等面积、地势平坦、地形完整、但土壤较不均匀的田块

10个以上

蛇形采样法

面积较大、地势不太平坦，土壤肥力不够均匀

20个以上

注意事项：

1、采样深度，对一般土地采样深度15—30cm即可。

对根深的作物可取至50cm的深度。

2、采样时间，可在作物的收获季节采集土壤样品．随时采样分析。

3、采样量，1—2kg土量。

4、每个采样点的取土深度及重量应均匀一致，土样上层和下层的比例也要相同。

采样铲或筒形取样器应垂直于地面，入土至规定的深度；斜插或入土角度不同，有可能使各样点的取土深度不够一致。

二、土壤样品处理和保存

1、样品登记编号：

根据试验情况标记土样。

2、鲜样保存：

测定土壤水分、亚铁、铵态氮、硝态氮等项目时，需用新鲜土样。

为了能真实地反映土壤在田间自然状态下的某些理化性状，新鲜样品要及时送到化验室处理，先用粗玻璃棒或塑料棒将样品弄碎混匀，然后迅速称样进行分析测定。

新鲜样品一般不宜贮存，如需暂时贮存时，可将新鲜样品装入塑料袋，扎紧袋口，放在冰箱冷藏室或进行速冻处理。

3、湿样晾干：

在晾干室将湿样放置晾样盘（白瓷盘）中，摊成2厘米厚的薄层自然阴干，并间断地用木棰敲碎、翻拌、拣出碎石，砂砾及植物残体等杂质。

4、一个样品准备四个装样瓶（或样品袋），把装样瓶洗净晾干，填好样品标签并贴好。

5、样品缩分：

将晾干敲碎的样品反复混合均匀，然后铺成一圆形，过圆心画十字线将圆分为四等分，取对角线二份（另二份弃去），照此方法继续缩分，最终留500克左右制样。

6、样品粗磨：

将风干样于白色搪瓷盘中用木棰、木棒再次压碎样品，全部过20目尼龙筛。

过筛后的样品全部置于有机玻璃板上混匀。

7、样品细磨：

取粗磨样品100克，用磨样机或研钵磨至全部过60目尼龙筛；再取粗磨样品100克，用磨样机或研钵磨至全部过100目尼龙筛。

8、样品分装：

将过20目、60目和100目样品分别装入相应的样品瓶中（各100克），作为检测样品，剩余的约200克过20目筛样品装入另一个样品瓶中，作为自备库存样备用。

过20目筛（孔径0.9毫米）粗磨样可直接用于土壤pH、土壤代换量、土壤速测养分含量、元素有效性含量分析；过60目筛（孔径0.25毫米）样品用于农药或土壤有机质、土壤全氮等分析；过100目（孔径0.149毫米）土样，用于土壤重金属和元素全量分析。

制样注意事项：

1、晾样时不得将样品铺放在报纸等不洁净的纸张上；样品不得在阳光下直接暴晒；因时间关系需烘干样品时，需在45℃以下温度烘烤；不得在晾样前缩分样品；制样中，采样时的土壤样品标签与土壤样品始终放在一起，严禁混错；每个样品经风干、磨碎、分装后送到实验室的整个过程中，使用的工具与盛样容器的编号必须始终一致，以免搞错；制样所用工具每制备一份样品后擦洗一次，严防交叉污染。

2、在一个采样单元中，如果用多个样点的样品分别进行分析，其平均值或其他统计值（如标准差或置信区间等）的可靠性，无疑要比单独取一个样品的分析结果更大，但这样做的工作量比较大。

如果把多个样点的土样等量地混合均匀，组成一个“混合样品”进行测定，工作量就可大为减少，而其测定值也可得到相近的代表性，因为混合样品的测定值，实际上相当于各个样品分别测定的平均值。

如果采样点较多而使混合土样太多时，可以把全部土样放在盘子或塑料布上，用手捏碎混匀，用四分法淘汰。

四分法的方法是：

将采集的土壤样品弄碎，混合均匀，铺成四方形，划分成如“田“字形的四份（见下图），保留对角的两份（1，4）土样，混合后留作样品，而把另外两份（2，3）弃去。

如果一次分取后仍嫌土样太多，可再次四分，直到样重1kg左右为止。

采集水稻土或湖沼等烂泥土样时，四分法往往难以应用，可改为在塑料盆（或桶）中用塑料棒将各样点烂泥搅匀后，再取出所需数量的土样。

注明采样地点、日期、采样深度、土壤名称、编号等。

同时做好采样记录。

三、土壤物理性质项目的测定

1.土壤水分的测定：

铝盒烘干法

取编有号码的小铝盒，烘干后，冷却，在分析天平上称其恒重（W1），取风干土样5g左右，放入已知重量的铝盒（W1）中，在分析天平上准确称重（W2），去盖放在烘箱中（105℃～110℃）烘8h。

直至恒重。

烘干后打开烘箱，取出，加盖后放在干燥器内冷却至室温后，称重（W3），再放入烘箱中烘3-5h，冷却后称重，以验证是否恒重。

土壤吸湿水%=

2.土壤温度的测定：

热敏电阻法、地温计法

3.土壤容重的测定：

环刀法

选具有代表性的地段，先在采土处用铁铲铲平。

将环刀托放在已知质量的环刀（精确至0.01g）上，环刀内壁稍擦上凡士林，将环刀刃口向下垂直压入土中，直至环刀筒中充满土样为止。

通常表层土壤需采5个重复样品，下层土壤需按层次每层采3个重复样品。

用削土刀切开环周围的土样，取出已充满土的环刀，用削土刀细心削平环刀两端多余的土，并擦净环刀外面的土，立即加盖以免水分蒸发。

将盛有土样的环刀除去顶盖，然后放入烘箱中，在105℃±2℃下烘干4h，再在干燥器中冷却后称至恒量（精确至0.01g）。

式中：

ρB——土壤容量，g/cm3；

m1——环刀的质量，g；

m2——环刀+烘干土质量，g；

V——环刀容积，cm3。

4.土壤田间持水量的测定：

环刀法

在田间选择挖掘的土壤位置，用土刀修正土壤表面，按要求深度将环刀向下垂直压入土中，直至环刀筒中充满土样为止，然后用土刀切开环刀周围的土样，取出已充满土的环刀，细心削平环刀两端多余的土，并擦净环刀外围的土，将环刀及筒内的土壤无损地带回实验室内。

在环刀底端放大小合适的滤纸2张，用纱布将环刀和土样包好，用橡皮筋扎好。

放在玻璃皿中，玻璃皿中事先放2～3层滤纸，将装土环刀放在滤纸上，用胶头滴管不断地滴水于滤纸上，使滤纸经常保持湿润状态，至水分沿毛管上升而环刀内土柱全部充满水，达到恒重为止。

取出装土环刀，去掉纱布和滤纸，取出一部分土壤放入已知重量的铝盒内称重，并放入105℃～110℃烘箱中，烘至恒重，再取出称重。

5.水稳定团粒的测定：

湿筛法

取滤纸一张，用铅笔划上适度大小的方格50格，放在用铁纱网上，然后放于培养皿中，另划同样方格纸一张作记录用。

取直径2～3mm的团粒50粒两份依次放在已装置好的滤纸上的每一方格中。

用滴管加水，将滤纸边缘浸湿，使滤纸和铁纱网紧贴在一起。

然后用滴管沿皿壁慢慢加水使团粒在3min内为水所饱和，直到水将团粒浸没。

团粒一经浸没就开始记下时间，以后每隔1min记录一次被破坏的团粒数目，一直进行到第11min才停止观察。

计算经过一定时间（11min）以后，仍未散开的团粒数目，即为团粒的水稳度。

同样的测定重复一次。

团粒结构水稳度（％）＝

×100

四、土壤化学性质项目的测定

1.土壤pH值的测定：

电位计法

称取10克风干土样，各放在50ml的烧杯中，加入25ml水，间歇摇动，放置30分钟后用酸度计测定。

2.土壤有机质含量的测定：

马弗炉灼烧法

采用马弗炉（九楼公共实验室）灼烧法，在300℃温度下，用沉积物样品的重量损失来估算有机物含量。

计算公式为：

有机质%＝（样品中的减少量/样品重）×100

3．土壤氮含量的测定（硝态氮、氨态氮、全氮）

3.1硝态氮的测定

试剂：

（1）硫酸钙（CaSO4·2H2O）、碳酸钙（CaCO3）、氢氧化钙（Ca（OH）2）、碳酸镁（MgCO3）、硫酸银（Ag2SO4）、1:

1NH4OH、活性碳。

（2）酚二磺酸试剂：

称取白色苯酚（C6H5OH）25.0g置于500ml三角瓶中，加浓H2SO4225ml，沸水加热6h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。

（3）10µg/mlNO3-—N标准溶液：

准确称取KNO30.7221g溶于水，定容1L，此为100µg/mlNO3-—N溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg/mlNO3-—N标准溶液。

实验方法

（1）浸提：

称取土样25g放在250ml三角瓶中，加入CaSO4·2H2O0.25g和125ml水，盖塞后，用摇床震荡10min。

然后在三角瓶中加入适量活性炭，放置5min后，将悬液的上部清液用干滤纸过滤，澄清的滤液收集到干燥洁净的三角瓶中。

（2）测定：

吸取清液50ml于100ml小烧杯中，加CaCO30.05g，在水浴上蒸干。

到达干燥时迅速冷却，冷却后加入酚二磺酸试剂2ml，并旋转烧杯使试剂接触到所有的蒸干物。

静置10min使其充分作用后，加水20ml，用玻璃棒搅拌直到蒸干物完全溶解。

冷却后缓缓加入1:

1NH4OH并不断搅混匀，至溶液呈微碱性（溶液显黄色）再多加2ml，以保证NH4OH试剂过量。

然后将溶液全部转入100ml容量瓶中，加水定容。

用分光光度计在420nm波长处比色，以空白溶液作参比，调节仪器零点。

（3）标准曲线的绘制：

分别取10µg/mlNO3-—N标准液0、1、2、5、10、15、20ml于小烧杯中，在水浴上蒸干，与待测液相同操作，进行显色和比色，绘制成标准曲线。

硝态氮含量的计算采用下列公式：

土壤中NO3-—N含量（mg/kg）=ρ（NO3-—N）×V×ts/m

式中：

ρ（NO3-—N）—从标准曲线上查得的显色液NO3-—N质量浓度（µg/ml）；

V—显色液的体积（ml）；

ts—分取倍数；

m—烘干样品质量（g）。

3.2氨态氮的测定

试剂：

（1）2mol/LKCl溶液：

称取149.1g氯化钾（KCl）溶于水中，稀释至1L。

（2）苯酚溶液：

称取苯酚（C6H5OH）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe（CN）5NO2H2O]100mg稀释至1L。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（3）次氯酸钠碱性溶液：

称取氢氧化钠（NaOH）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）7.06g、磷酸钠（Na3PO4·12H2O）31.8g和52.5g/L次氯酸钠（NaOCl，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10ml溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（4）掩蔽剂：

将400g·L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）与100g/L的EDTA二钠盐溶液等体积混合。

每100ml混合液中加入10mol/L氢氧化钠0.5ml。

（5）2.5µg/ml铵态氮（NH4+—N）标准溶液：

称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4，分析纯]0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µg/ml的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg/ml的标准溶液。

实验方法：

（1）浸提：

称取20g土样，置于250ml三角瓶中，加入氯化钾溶液100ml，塞紧塞子，在摇床上震荡1h。

取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。

（2）比色：

吸取土壤浸出液5ml放入50ml容量瓶中，加入5ml氯化钾溶液，然后加入苯酚溶液5ml和次氯酸钠碱性溶液5ml，摇匀。

在20℃左右的室温下放置1h后，加掩蔽剂1ml以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。

用分光光度计，在625nm波长处进行比色，读取吸光度。

（3）标准曲线的绘制：

分别吸取0、2、4、6、8、10mlNH4+—N标准液于50ml容量瓶中，各加10ml氯化钠溶液，同

（2）步骤进行比色测定。

铵态氮含量的计算采用下列公式：

土壤中NH4+—（N）含量（mg/kg）=ρ×V×ts/m

式中：

ρ—显色液铵态氮的质量浓度（µg/ml）；

V—显色液的体积（ml）；

ts—分取倍数；

m—样品质量（g）。

3.3全氮测定（采用凯氏定氮法）

试剂：

（1）盐酸（HCl）：

0.05mol/L标准液，用碳酸氢钠法标定盐酸。

（2）氢氧化钠（NaOH）：

40%的水溶液（m/v）。

（3）硼酸（H3BO3）：

2%的水溶液（m/v）。

（4）混合指示剂：

甲基红（G5Hl5N3O2）溶于乙醇配成0.1%乙醇溶液；溴甲酚绿溶于乙醇配成0.5%乙醇溶液。

两种溶液等体积混合，即为混合指示剂。

（5）加速剂：

硫酸铜（CuSO4·5H2O）和硫酸钾（K2SO4）按1：

15比例在研钵中研磨，仔细混匀过40目筛。

（6）98%浓硫酸（H2SO4）

实验方法：

（1）消化操作：

准确称取1g土样放入消化管中，然后加入5g加速剂，10ml浓硫酸。

将其放到电热炉上消化40min，其间温度为420℃，保持消化管内液体连续沸腾，沸酸在瓶颈部冷却回流。

消化结束后，冷却至室温。

（2）蒸馏：

冷却后，直接将消煮管放入KDN型定氮仪中蒸馏，在冷凝管末端放上已经加入15ml接收液（硼酸和混合指示剂）的250ml锥形瓶，使蒸馏导出管的末端浸入接收液内。

直至氨气全部蒸出后，即接收液体积为150ml时停止蒸馏。

（3）滴定：

吸收氨后的接收液，用标定后的盐酸溶液进行滴定，溶液由蓝绿色变为灰紫色为终点。

（4）空白测定：

不加样品，按上述步骤做同样的操作。

全氮含量的计算采用下列公式：

土壤全氮（N）量（mg·kg-1）=（V2-V1）×C×0.0140/m×106

式中：

V2—滴定式样时消耗酸标准溶液的体积（ml）；

V1—滴定空白时消耗酸标准溶液的体积（ml）；

C—酸标准溶液的mol/L浓度；

m—试样重量（g）；

0.0140—氮的毫克当量数。

4、土壤磷的测定（全磷、有效磷）

4.1全磷：

HClO4—H2SO4法

主要仪器

721型分光光度计；LNK-872型红外消化炉。

试剂

（1）浓硫酸（H2SO4，ρ≈1.84g·cm-3，分析纯）。

（2）高氯酸[CO（HClO4）≈70%～72%，分析纯]。

（3）2，6-二硝基酚或2，4-二硝基酚指示剂溶液。

溶解二硝基酚0.25g于100mL水中。

此指示剂的变色点约为pH3，酸性时无色，碱性时呈黄色。

（4）4mol·L-1氢氧化钠溶液，。

溶解NaOH16g于100mL水中。

（5）2mol·L-1（1/2H2SO4）溶液，吸取浓硫酸6mL，缓缓加入80mL水中，边加边搅动，冷却后加水至100mL。

（6）钼锑抗试剂。

A.5g·L-1酒石酸氧锑钾溶液：

取酒石酸氧锑钾[K（SbO）C4H4O6]0.5g，溶解于100mL水中。

B.钼酸铵—硫酸溶液：

称取钼酸铵[（NH4）6Mo7O24·4H2O]10g，溶于450mL水中，缓慢地加入153mL浓H2SO4，边加边搅。

再将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。

充分摇匀，贮于棕色瓶中，此为钼锑混合液。

临用前（当天），称取左旋抗坏血酸（C6H8O5，化学纯）1.5g，溶于100mL钼锑混合液中，混匀，此即钼锑抗试剂。

有效期24小时，如藏冰箱中则有效期较长。

此试剂中H2SO4为5.5mol·L-1（H+），钼酸铵为10g·L-1，酒石酸氧锑钾为0.5g·L-1，抗坏血酸为1.5g·L-1。

（7）磷标准溶液。

准确称取在105℃烘箱中烘干的KH2PO4（分析纯）0.2195g，溶解在400mL水中，加浓H2SO45mL（加H2SO4防长霉菌，可使溶液长期保存），转入1L容量瓶中，加水至刻度。

此溶液为50μg·mL-1P标准溶液。

吸取上述磷标准溶液25mL，即为5ug·mL-1P标准溶液（此溶液不宜久存）。

实验方法：

（1）待测液的制备：

准确称取通过100目筛子的风干土样0.5000～1.0000g（土壤1g），置于50mL开氏瓶（或100mL消化管）中，以少量水湿润后，加浓H2SO48mL，摇匀后，再加70%～72%HClO410滴，摇匀，瓶口上加一个小漏斗，置于电沪上加热消煮（至溶液开始转白后继续消煮）20min。

全部消煮时间为40～60min。

在样品分解的同时做一个空白试验，即所用试剂同上，但不加土样，同样消煮得空白消煮液。

将冷却后的消煮液倒入100mL容量瓶中（容量瓶中事先盛水30～40mL），用水冲洗开氏瓶（用水应根据少量多次的原则），轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，加水定容。

静置过夜，次日小心地吸取上层澄清液进行磷的测定；或者用干的定量滤纸过滤，将滤液接收在100mL干燥的三角瓶中待测定。

（2）测定：

吸取澄清液或滤液5mL[（对含P，0.56g·kg-1以下的样品可吸取10mL），以含磷（P）在20～30μg为最好]注入50mL容量瓶中，用水冲稀至30mL，加二硝基酚指示剂2滴，滴加4mol·L-1NaOH溶液直至溶液变为黄色，再加2mol·L-1（1/2H2SO4）溶液1滴，使溶液的黄色刚刚褪去（这里不用NH4OH调节酸度，因消煮液酸浓度赠大，需要较多碱去中和，而NH4OH浓度如超过10g·L-1就会使钼蓝色迅速消退）。

然后加钼锑抗试剂5mL，再加水定容50mL，摇匀。

30min后，用880nm或700nm波长进行比色（注2），以空白液的透光率为100（或吸光度为0），读出测定液的透光度或吸收值。

（3）标准曲线：

准确吸取5μg·mL-1，P标准溶液0、1、2、4、6、8、10mL。

分别放入50mL容量瓶中，加水至约30mL，再加空白试验定容后的消煮液5mL，调节溶液pH为3，然后加钼锑抗试剂5mL，最后用水定容至50mL。

30min后开始进行比色。

各瓶比色液磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg·mL-1P。

从标准曲线上查得待测液的磷含量后，可按下式进行计算：

土壤全磷（P）量（g·kg-1）=

式中：

ρ——待测液中磷的质量浓度（g·kg-1）；

V——样品制备溶液的mL数；

m——烘干土质量（g）；

V1——吸取滤液mL数；

V2——显色的溶液体积（mL）；

10-3——将μg数换算成的g·kg-1乘数。

注：

（1）最后显色溶液中含磷量在20～30μg为最好。

控制磷的浓度主要通过称取量或最后显色时吸取待测液的毫升数。

（2）本法钼蓝显色液比色时用880nm波长比700nm更灵敏，一般分光光度计为721型，只能选700nm波长。

2.2土壤速效磷含量的测定：

0.5mol·L-1NaHCO3浸提—钼锑抗比色法

试剂

（1）碳酸氢钠浸提剂：

0.5mol/L，称取42.0g碳酸氢钠，加水溶解并稀释至近1000mL，如溶液pH不在8.5，则用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5，再加水稀释至1000mL。

（2）硫酸溶液：

1mol/L，量取56.0mL硫酸（ρ1.84g/mL），缓慢加入水中，再加水稀释至1000mL。

（3）氢氧化钠溶液：

2mol/L，称取80.0g氢氧化钠溶于水，再加水稀释至1000mL。

（4）对硝基酚指示剂：

称取0.20g对硝基酚，溶于100mL水中。

（5）无磷活性炭。

（6）钼锑贮存液：

量取153mL硫酸（ρ1.84g/mL），缓慢地加入400mL水中，搅拌，冷却。

另取10g钼酸铵[（NH4）6Mo7O24·4H2O]溶解于约60℃的300mL水中，冷却。

然后将硫酸溶液缓慢倒入钼酸铵溶液中，再加入100mL5g/L酒石酸锑钾（KSbOC4H4O6·21H2O）溶液，最后用水稀释至1000mL，避光贮存。

（7）钼锑抗显色剂：

称取1.50g抗坏血酸（C6H8O6），溶于100mL钼锑贮存液中，随用随配。

（8）磷标准溶液：

称取在105℃烘2h的磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4394g（精确至0.0001g）溶于水中，加5mL硫酸（ρ1.84g/mL），再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100μg磷。

吸取10.00mL上述标准溶液置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，此溶液1mL含5μg磷，不宜久存。

仪器

分光光度计。

振荡机

实验方法

（1）待测液的制备：

称取通过2mm筛孔的风干土样5.0000g（精确至0.0001g）置于200mL锥形瓶中，加入100mL碳酸氢钠浸提剂，加塞，放在振荡机上振荡30min（室温25℃±1℃）。

用慢速滤纸过滤于200mL容量瓶中，用水洗涤，再加水稀释至刻度，摇匀。

如滤液有颜色，可加少量无磷活性炭作脱色处理。

同时做空白试验。

（2）测量吸光度：

吸取5.00mL~20.00mL溶液置于50mL容量瓶中，加水至20mL，加1滴对硝基酚指示剂，用1mol/L硫酸溶液调节溶液至微黄色（中和有强烈气泡发生，要一滴一滴边加边摇，勿使气泡逸出瓶口），待气泡不再发生后，加入5mL钼锑抗显色剂，加水稀释至刻度，摇匀。

放置30min后，在分光光度计上，于700nm波长处，用1cm~2cm吸收皿测定吸光度，从工作曲线上查得相应的磷量。

（3）工作曲线：

分别取0、5、10、15、20、25、30μg磷标准溶液置于50mL容量瓶中，按5.2操作步骤操作，绘制工作曲线。

结果计算

WP——有效磷量，g/kg；

C——从工作曲线上查得有效磷量，μg；

t——分取倍数（溶液总体积50mL/吸取溶液体积）；

m——风干土样质量，g；

K——风干土样换算成烘干土样的水分换算系数。

5．土壤钾的测定（速效钾、全钾）

5.1.土壤速效钾含量的测定：

醋酸铵浸提—火焰光度计法