浙江专版版高考生物一轮复习第十单元生物技术实践第33讲基因工程教案.docx

浙江专版版高考生物一轮复习第十单元生物技术实践第33讲基因工程教案.docx

《浙江专版版高考生物一轮复习第十单元生物技术实践第33讲基因工程教案.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《浙江专版版高考生物一轮复习第十单元生物技术实践第33讲基因工程教案.docx（28页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

浙江专版版高考生物一轮复习第十单元生物技术实践第33讲基因工程教案

第33讲　基因工程

考试标准

加试

考试标准

加试

1.工具酶的发现和基因工程的诞生

a

3.基因工程的应用

a

2.基因工程的原理和技术

b

4.活动：

提出生活中的疑难问题，设计用基因工程技术解决的方案

c

考点一　基因工程的含义及操作工具

1．基因工程的含义

（1）概念：

把一种生物的遗传物质（细胞核、染色体脱氧核糖核酸等）移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。

（2）核心：

构建重组DNA分子。

（3）理论基础：

DNA是生物遗传物质的发现，DNA双螺旋结构的确立以及遗传信息传递方式的认定。

2．基因工程的基本工具

思考讨论

1．已知限制性核酸内切酶EcoRⅠ和SmaⅠ识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓AATTC和CCC↓GGG，两种限制性核酸内切酶切割DNA后产生的末端如下：

EcoRⅠ限制性核酸内切酶和SmaⅠ限制性核酸内切酶识别的碱基序列不同，切割位点不同（填“相同”或“不同”），说明限制性核酸内切酶具有专一性。

2．观察下图所示过程，回答需要的工具酶及相关问题：

（1）①是限制性核酸内切酶；②是DNA连接酶；二者的作用部位都是磷酸二酯键。

（2）限制性核酸内切酶不切割自身DNA的原因：

原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

3．载体须具备的条件及其作用（连线）

4．限制性核酸内切酶MunⅠ和限制性核酸内切酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。

如图表示四种质粒和目的基因，其中，箭头所指部位为限制性核酸内切酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。

适于作为图示目的基因载体的质粒是下列①～④中的哪一个？

提示　由图可知，质粒②上无标记基因，不适合作为载体；质粒③和④的标记基因上都有限制性核酸内切酶的识别位点。

只有质粒①上有标记基因，且MunⅠ的切割位点不在标记基因上。

题型　基因工程的操作工具

1．如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，下面选项中能依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用顺序的是（　　）

A．①②③④B．①②④③

C．①④②③D．①④③②

答案　C

解析　限制性核酸内切酶可在特定位点对DNA分子进行切割；DNA聚合酶在DNA分子复制时将脱氧核苷酸连接成脱氧核苷酸链；DNA连接酶可将限制性核酸内切酶切开的磷酸二酯键连接在一起；解旋酶的作用是将DNA双链解开，为复制或转录提供模板。

2．（2017·常州模拟）若要利用某目的基因（见图甲）和P1噬菌体载体（见图乙）构建重组DNA（见图丙），限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ（A↓GATCT）、EcoRⅠ（G↓AATTC）和Sau3AⅠ（↓GATC）。

下列分析合理的是（　　）

A．用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体

B．用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体

C．用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体

D．用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体

答案　D

解析　解答本题的关键是要看清切割后目的基因插入的方向，只有用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体，构建的重组DNA中RNA聚合酶在插入的目的基因上的移动方向才一定与图丙相同。

几种易混淆酶的比较

名称

功能

应用

限制性核

酸内切酶

特异性地切断DNA链中的磷酸二酯键

重组DNA技术和基因诊断

DNA

连接酶

连接DNA片段之间的磷酸二酯键

基因工程

DNA

聚合酶

连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键

DNA复制

RNA

聚合酶

连接RNA片段与单个核糖核苷酸之间的磷酸二酯键

RNA复制和转录

逆转录酶

作用于磷酸二酯键

以RNA为模板获得DNA

解旋酶

使碱基对之间的氢键断裂

DNA复制

DNA

水解酶

使DNA分子所有磷酸二酯键断裂

水解DNA

考点二　基因工程的基本操作步骤、应用及相关的设计方案

1．基因工程的基本操作步骤

（1）获得目的基因

目的基因序列已知：

化学合成或PCR扩增；目的基因序列未知：

从基因文库中获取。

（2）形成重组DNA分子（基因工程的核心）：

通常用相同的限制性核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA，然后用DNA连接酶将目的基因和载体DNA连接在一起，形成重组DNA分子。

（3）将重组DNA分子导入受体细胞

①常用的受体细胞：

大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。

②导入方法：

用氯化钙处理大肠杆菌，可以增加大肠杆菌细胞壁的通透性，使重组质粒容易进入。

（4）筛选含有目的基因的受体细胞

①筛选原因：

并不是所有的细胞都接纳了重组DNA分子，因此，需筛选含目的基因的受体细胞。

②筛选方法：

用含抗生素的培养基培养受体细胞，选择含重组质粒的受体细胞。

（5）目的基因的表达

目的基因在宿主细胞中表达，产生人们需要的功能物质。

2．基因工程的应用

应用领域

优点

基因工程与遗传育种

转基因植物

所需时间短，克服了远缘亲本难以亲合的缺陷

转基因动物

指转入了外源基因的动物。

优点是省时、省力，并能取得一定的经济效益

基因工程与疾病治疗

基因工程药物

主要有胰岛素、干扰素和乙型肝炎疫苗等

基因治疗

向目标细胞中引入正常功能的基因，以纠正或补偿基因的缺陷，达到治疗的目的

基因工程与生态环境保护

开发可降解的新型塑料；改造分解石油的细菌，提高其分解石油的能力等

思考讨论

1．重组DNA分子的组成及各部分的作用（连线）

2．据图选择相关的限制性核酸内切酶

基因工程中，需使用特定的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。

已知限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切割位点是－G↓GATCC－；限制性核酸内切酶Ⅱ的识别序列和切割位点是－↓GATC－。

请据图分析：

切割目的基因应选择限制性核酸内切酶Ⅱ，切割质粒应选择限制性核酸内切酶Ⅰ。

3．完成下列填充

（1）原核生物作为受体细胞的优点：

繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。

（2）转化的实质是把目的基因整合到受体细胞基因组中。

4．补充目的基因检测与鉴定的方法示意图

5．如图为抗虫棉的培育过程，请据图回答下列问题：

（1）该基因工程中的目的基因和载体分别是什么？

一般情况下，为什么要用同一种限制性核酸内切酶处理目的基因和载体？

提示　目的基因是Bt毒蛋白基因，载体是Ti质粒。

用同一种限制性核酸内切酶处理目的基因和载体，可以获得相同的粘性末端，便于形成重组DNA分子。

（2）该实例中，检测目的基因是否表达的常见方法是什么？

提示　用棉叶饲喂棉铃虫。

题型一　基因工程的操作程序

1．（2017·北京，5）为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。

下列操作与实验目的不符的是（　　）

A．用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和连接酶构建重组质粒

B．用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞

C．在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞

D．用分子杂交技术检测C基因是否整合到菊花染色体上

答案　C

解析　在构建基因表达载体时，为保证目的基因与载体的连接，需要用同种限制性核酸内切酶进行切割产生相同的粘性末端，才能通过DNA连接酶连接，图中目的基因的两端和启动子与终止子之间都有限制性核酸内切酶EcoRⅠ的切割位点，选用限制性核酸内切酶EcoRⅠ切割目的基因和载体，A项正确；菊花为双子叶植物，将目的基因导入双子叶植物细胞的常用方法是农杆菌转化法，B项正确；图2中重组质粒中的抗性基因为潮霉素抗性基因，应该在培养基中添加潮霉素，筛选被转化的菊花细胞，C项错误；要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，常用DNA分子杂交技术，D项正确。

2．（2017·诸暨中学统考）科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。

下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。

请据图回答下列问题：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是________________和________________。

（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的__________基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。

（3）步骤③是________________的过程。

为了促进该过程，应该用________处理大肠杆菌。

（4）步骤④是将三角瓶内的大肠杆菌接种到含有四环素的培养基A上培养，目的是筛选____________________。

能在A中生长的大肠杆菌有________种。

（5）步骤⑤是用无菌牙签挑取A上的单个菌落，分别接种到B（含氨苄青霉素和四环素）和C（含四环素）两个培养基的相同位置上。

一段时间后，菌落的生长状况如上图所示。

含有目的基因的菌落位于（填“B”或“C”）________上，请在图中相应位置上圈出来。

答案　

（1）限制性核酸内切酶　DNA连接酶　

（2）氨苄青霉素抗性　（3）将重组质粒导入大肠杆菌　氯化钙　（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌　2　（5）C　如下图所示

解析　

（1）步骤①和②是将目的基因和质粒用同种限制性核酸内切酶进行切割，得到相同的粘性末端，然后用DNA连接酶将二者连接起来，形成重组质粒。

（2）质粒上有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，根据步骤①和②构建的重组质粒的图像可知，部分质粒的氨苄青霉素抗性基因中插入了目的基因。

（3）据题图可知，步骤③是将重组质粒导入受体细胞大肠杆菌中；氯化钙处理可增加大肠杆菌细胞壁的通透性，增强其对重组质粒的吸收能力。

（4）由于质粒上具有四环素抗性基因，且未被目的基因插入，因此，凡是导入质粒的大肠杆菌均对四环素具有抗性，可以存活，没有导入质粒的不能存活，于是可以筛选出含四环素抗性基因的大肠杆菌；能够在A上生长的大肠杆菌有2种，分别是导入空白质粒的大肠杆菌和导入重组质粒的大肠杆菌。

（5）目的基因的插入破坏了氨苄青霉素抗性基因，因此含有目的基因的大肠杆菌无法在含氨苄青霉素的培养基B上存活，但能在C上存活，其所在位置即为B中未长出而C中长出菌落的位置。

基因工程操作中的6个易错点

（1）目的基因的插入位点不是随意的。

基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。

（2）基因工程操作过程中只有第三步（将重组DNA分子导入受体细胞）没有碱基互补配对现象。

第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在粘性末端连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。

（3）原核生物作为受体细胞的优点：

繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。

（4）一般情况下，用同一种限制性核酸内切酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制性核酸内切酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。

（5）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。

转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。

（6）不熟悉标记基因的种类和作用：

标记基因的作用——筛选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因（表达产物为带颜色的物质）等。

题型二　基因工程的原理和应用

3．（2017·河西区一模）如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。

以下相关叙述，正确的是（　　）

A．①、②的操作中使用了限制性核酸内切酶和DNA聚合酶

B．③→④过程利用了膜的结构特性，显微镜下观察③细胞的Ti质粒是筛选标志之一

C．应用DNA探针技术，可检测④细胞中目的基因是否表达

D．一般情况下⑤只要表现出抗虫性状，就表明植株发生了可遗传变异

答案　D

解析　①、②的操作表示形成重组DNA分子，该过程中使用了限制性核酸内切酶和DNA连接酶，A项错误；光学显微镜下无法观察到质粒，该基因工程可以利用个体水平进行鉴定，即植株的叶片是否具有抗虫效果，B项错误；检测④细胞中目的基因是否表达需要利用抗原－抗体杂交技术或个体水平的检测，C项错误；一般情况下⑤只要表现出抗虫性状，就表明植株发生了可遗传变异，D项正确。

4．下列关于基因工程应用的叙述，正确的是（　　）

A．基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因

B．基因诊断的基本原理是DNA分子杂交

C．一种基因探针能检测水体中的各种病毒

D．利用基因工程生产乙肝疫苗时，目的基因存在于人体B淋巴细胞的DNA中

答案　B

解析　基因治疗就是向目标细胞中引入正常功能的基因，达到治疗疾病的目的，A项错误；基因诊断又称DNA诊断或分子诊断，通过分子生物学和分子遗传学的技术，直接检测出分子结构水平和表达水平是否异常，从而对疾病做出判断，利用的原理就是DNA分子杂交，B项正确；基因探针是用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因的DNA片段，一种基因探针只能检测水体中的一种或一类病毒，C项错误；基因工程生产乙肝疫苗是通过构建含有乙肝病毒表面抗原基因的重组质粒，然后转染（就是让质粒进入宿主细胞）相应的宿主细胞，如酵母菌、CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞，一种可以无限繁殖的细胞），生产乙肝表面抗原蛋白，D项错误。

基因诊断与基因治疗

（1）基因诊断

①方法：

DNA分子杂交法（即DNA探针法），该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单链的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。

②步骤：

抽取病人的组织或体液作为化验样品；将样品中的DNA分离出来；用化学法或热处理法使样品DNA解旋；将事先制作好的DNA探针引入化验样品中，这些已知的经过标记的探针能够在化验样品中找到互补链，并与之结合（杂交）在一起，找不到互补链的DNA探针，则可以被洗脱。

这样通过对遗留在样品中的标记过的DNA探针进行基因分析，就能检出病人所得的病。

（2）基因治疗

①原理：

利用正常基因纠正或补偿基因的缺陷，即把正常基因导入患者体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，而原有缺陷基因一般不作处理。

②方法：

有体外基因治疗和体内基因治疗，体外基因治疗方法疗效好。

如重度免疫缺陷症的体外基因治疗方法：

体内基因治疗：

用基因工程的方法，直接向人体组织细胞中转移基因。

题型三　设计用基因工程技术解决的方案

5．（2017·舟山中学高三期中）人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。

流程如下：

（1）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射____________，使其超数排卵。

采集的精子需要经过________，才具备受精能力。

（2）在htPA基因与质粒构建重组DNA分子的过程中，下列哪项是必需的（　　）

A．限制性核酸内切酶和DNA连接酶

B．DNA连接酶和DNA聚合酶

C．DNA聚合酶和逆转录酶

D．限制性核酸内切酶和DNA聚合酶

（3）转基因羊的培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是________________________________________________________。

为了获得母羊，胚胎移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行______________________。

利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这些个体的基因型________。

（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到_____________________，说明目的基因成功表达。

答案　

（1）促性腺激素　获能处理　

（2）A　（3）受精卵的全能性易于表达　性别鉴定　相同　（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

解析　

（1）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵。

采集的精子需要经过获能处理，才具备受精能力。

（2）在htPA基因与质粒构建重组DNA分子的过程中，需要用到的工具酶为限制性核酸内切酶和DNA连接酶。

（3）转基因羊的培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是受精卵的全能性易于表达。

为了获得母羊，胚胎移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定。

利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这些个体的基因型相同。

（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达。

模拟演练

1．（2017·台州模拟）下列关于基因工程的叙述，错误的是（　　）

A．目的基因和受体细胞均可来自动物、植物或微生物

B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶

C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素无生物活性

D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达

答案　D

解析　目的基因来源于含有人们所需要性状的一切生物，可以是动物、植物，也可以是真菌、细菌等；基因工程中一般要使用同种限制性核酸内切酶进行切割，以获得具有相同粘性末端的目的基因和载体，在DNA连接酶的作用下，将目的基因和载体连接起来，形成重组DNA分子；人的胰岛素原基因可以在大肠杆菌内表达，但是由于大肠杆菌是原核生物，没有内质网、高尔基体等细胞器，合成的胰岛素不具有胰岛素的功能，即没有生物活性；标记基因是为了检测并筛选含重组DNA的细胞，但对于目的基因的表达没有影响。

2．（2017·浙江模拟）科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，在医学研究及相关疾病治疗方面都具有重要意义。

下列有关叙述错误的是（　　）

A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞具有全能性

B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达

C．人的生长激素基因能在小鼠细胞内表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用

D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代

答案　B

解析　选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞具有全能性，而且全能性最高，A项正确；采用DNA分子杂交技术可检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，但不能检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达，B项错误；人的生长激素基因能在小鼠细胞内表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用，C项正确；将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代，D项正确。

3．苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。

图1是转Bt毒素蛋白基因植物的重组DNA形成过程示意图；图2是毒素蛋白基因进入植物细胞后发生的两种生物大分子合成的过程，据图回答下列问题：

（1）将图1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有________种DNA片段。

过程②需要用到________________酶。

（2）假设图1中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ识别位点的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图1中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？

并请说明理由_________________________。

（3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒（　　）

A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开

B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开

C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开

D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开

（4）图2中α链是________。

不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点____________（填“都相同”、“都不同”或“不完全相同”），其原因是____________

________________________________________________________________________。

（5）要想检测导入的Bt毒素蛋白基因是否表达，在分子水平上可用__________________法进行检测，如果出现杂交带，说明目的基因已经表达蛋白质产品，转基因植物培育成功。

答案　

（1）4　DNA连接　

（2）能，切割后露出的粘性末端相同　（3）D　（4）mRNA　不完全相同　不同组织细胞中基因会进行选择性表达　（5）抗原－抗体杂交

解析　

（1）由于图1中①的DNA上有HindⅢ和BamHⅠ的3个识别位点，所以用这两种酶完全酶切后，形成4种DNA片段。

（2）BclⅠ与BamHⅠ酶切割目的基因后形成的粘性末端一样，故该图①中的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒。

（3）根据酶切位点和识别的碱基序列可知，重组质粒只能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开。

（4）从图乙可知，α链是以DNA的一条链作为模板进行转录形成的信使RNA分子，不同组织细胞的相同DNA在转录时，如果是相同基因一般转录起点相同，不同的基因转录起点不同。

（5）检测目的基因是否在受体细胞内表达，分子水平上的检测是向分泌物中加入抗体，通过抗原—抗体特异性结合形成杂交带加以检测，如果能形成，说明表达了，如果不能形成，说明没有表达。

4．（2017·浙大附中全真模拟）我国科学家张道远先生通过从耐旱灌木白花柽柳中克隆得到TSOD基因，利用转基因技术转化到棉花中，获得了具备更强抗旱性的T4代转基因棉花株系。

下图为转基因抗旱棉花的培育过程示意图，请据图回答：

（1）①过程表示用________扩增目的基因的方法。

②过程用到的工具酶有________________。

步骤③一般用__________处理农杆菌，使其易吸收周围环境中的DNA分子。

（2）将重组质粒导入棉花细胞除步骤④所示的方法外，还可采用____________________。

如果受体细胞是动物的受精卵，则一般采用的方法是______________________。

（3）外植体培养成为试管苗的过程采用了____________技术，利用了__________________的原理，步骤⑤⑥表示____________________________________。

（4）为了确定抗旱转基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素标记的______________作探针进行分子水平鉴定，再________________________进行个体水平鉴定棉花植株的抗旱性。

答案　

（1）PCR技术　限制性核酸内切酶、DNA连接酶　Ca2＋（或CaCl2）

（2）花粉管通道法（基因枪法）　显微注射法

（3）植物组织培养　植物细胞的全能性　脱分化、再分化

（4）抗旱基因（TSOD基因、目的基因）　移栽到干旱土地中

5．（2016·浙江4月选考）兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力。

请回答下列问题：

（1）从兔肝细胞中提取mRNA，在____________酶的作用下形成互补的DNA，然后以此DNA为模板扩增得到基因E。

在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成_________________，再导入用氯化钙处理的________________中，侵染矮牵牛叶片。

将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。

其中培养过程正确的是____________。

A．叶片在含适宜浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织

B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽

C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根

D．愈伤组织在含适宜浓度植物生长调