完整word版紫外分光光度法测注射用奥美拉唑钠残留验证方案.docx
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完整word版紫外分光光度法测注射用奥美拉唑钠残留验证方案
紫外分光光度法测定注射用奥美拉唑钠清洁残留物方法学验证方案
方案起草人：
起草日期：
年月日
方案会签会签人日期
生产车间
生产技术处
质量管理处
方案批准批准人日期
质量管理负责人
1.概述
药品生产的清洁验证是证实在药品生产过程中清洁手段的有效性与实用性。
生产过程中，由于不同产品共用一条生产线，因此在更换产品时极易造成微量污染，主要污染来自设备清洗不彻底。
因此制订切实可行的清洁操作规程，并对之进行验证是保证产品质量，防止污染的有效措施。
本方案建立了紫外分光光度法检测注射用奥美拉唑钠残留的方法，为残留物的测定提供了快速可靠的分析手段。
2.验证目的
为验证紫外分光光度法运用于注射用奥美拉唑钠生产的设备清洁残留检测，考核的参数包括专属性、线性、检测限、定量限、准确度、精密度以及擦拭法回收率，特制订本方法学验证方案进行验证。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行。
3.验证小组成员与职责
姓名
职责
验证小组组长，负责批准验证方案
组员，参与验证方案的制订，对验证操作过程进行监督检查，参与验证异常情况的调查工作
组员，验证方案的起草，负责样品的检验，收集数据并报告结果
组员，负责配制溶液，进行棉签擦拭以及回收率的测定
4.验证依据
《药品生产质量管理规范》（2010），国家食品药品监督管理局
《药品验证实施指南》（2003），国家食品药品监督管理局药品安全监管司，药品认证管理中心编写，化学工业出版社
5.培训计划
本方案在批准执行后、验证实施前应进行培训，培训计划如下：
培训主要内容
培训人
培训对象
培训课时
紫外分光光度法测定注射用奥美拉唑钠清洁残留物方法学验证方案
验证小组成员
2
6.内容
6.1.验证用品准备
6.1.1.验证用仪器
电子天平、紫外分光光度计、容量瓶、移液管、刻度吸管、316L不锈钢板，药用棉签，微量喷雾器、漏斗。
所有仪器均为校验期内合格品
6.1.2.验证用试剂及溶液
奥美拉唑钠标准品0.1mol/LNaOH溶液
6.2.方法学验证内容
6.2.1.专属性
取奥美拉唑钠标准品约20mg（按纯品计），精密称定，加入0.1mol/LNaOH溶液适量，溶解后全部转入100ml棕色容量瓶中加0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置100ml棕色容量瓶中，加0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，制成10μg/ml的溶液。
取此溶液在200nm~400nm波长范围内扫描，记录紫外吸收图谱，确定最大吸收波长。
6.2.2.线性
测定化合物浓度是否与检测物品检测数据之间存在一种线性关系，以奥美拉唑钠标准曲线的确定为例。
6.2.2.1.注射用奥美拉唑钠标准溶液的制备
标准曲线溶液的制备：
取奥美拉唑钠标准品约20mg（按纯品计），精密称定，加0.1mol/LNaOH溶液适量，溶解后全部转入100ml棕色容量瓶中加0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，摇匀，即成每1ml约含奥美拉唑钠0.2mg的溶液；分别精密量取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、8ml分别置100ml棕色容量瓶中，分别加0.1mol/LNaOH溶液稀释至100ml，摇匀，即得每1ml分别含奥美拉唑钠2μg、4μg、6μg、8μg、10μg、12μg、16μg的溶液。
6.2.2.2.标准曲线的绘制
分别吸取上述7个浓度的标准稀释液，按照紫外分光光度计操作规程，用1cm吸收池，在最大吸收波长处测定各吸收度（A），以吸收度为横坐标，对照品溶液的浓度（μg/ml）为纵坐标，进行线性回归，并得线性回归方程和线性相关系数R，R2应该大于0.99。
检测数据见附录Ⅰ。
6.2.3.准确度和精密度
6.2.3.1.供试品溶液的制备
取6.2.2.1.奥美拉唑钠浓度为0.2mg/ml的标准溶液，分别精密量取5ml于6个100ml棕色容量瓶中，加0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，摇匀，制成6个10μg/ml的奥美拉唑钠溶液。
6.2.3.2.进行吸收度测定
按照紫外分光光度计操作规程，用1cm吸收池，在最大吸收波长处测定这6个溶液的吸收度，根据标准曲线上查得相应的奥美拉唑钠含量，即为实测值。
检测数据见附录Ⅱ。
6.2.3.3.可接受标准
精密度限度要求：
RSD≤5%
准确度限度要求：
相对误差≤10%
6.2.4.检测限和定量限的确定
根据线性回归方程得到的线性回归数据，计算方法的检测限，定量限。
检测限为：
LOD=3.3×SD/B
定量限为：
LOQ=10×SD/B
检测数据见附录Ⅲ。
6.3.棉签擦拭法取样过程的回收率
6.3.1.奥美拉唑钠溶液的制备
取6.2.2.1.奥美拉唑钠浓度0.2mg/ml的标准溶液，精密量取10ml置50ml棕色容量瓶中，加0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，制成40μg/ml的溶液。
定量装入喷雾器内，备用。
6.3.2.擦拭法回收率测定
用棉签模拟擦拭不锈钢，步骤如下：
（1）准备一块平整光滑的316L型不锈钢钢板，在钢板上用钢锥划出100㎜×100㎜的方块，共6个块。
（2）将约6ml该溶液均匀的全部喷洒在6块100㎜×100㎜的区域内。
（3）根据实际喷出的溶液量计算单位面积上的奥美拉唑钠，约0.4μg/cm2。
（4）自然干燥，或用电吹风温和地吹干不锈钢板。
（5）用0.1mol/LNaOH润湿棉签，擦拭上述钢板的100㎜×100㎜方块区域，每擦一个方块（100cm2）换一根擦拭棉签，共擦6个方块取样。
擦拭示意图如下：
（6）供试品溶液制备：
将擦拭完棉签分别放入25ml的带塞试管中，定量加入0.1mol/LNaOH溶液10ml，加塞轻摇试管并放置10min，使物质溶出，过滤即得供试品溶液。
6块面积同法操作。
则此样品浓度的理论值为：
10μg/ml×6ml/6（块）/10ml=4μg/ml
（7）棉签空白样的配制：
取一根药用棉签放入带塞试管中加入10ml0.1mol/LNaOH溶液中，加塞轻摇试管，并放置10min，取出棉签并过滤，即得棉签空白样。
（8）以棉签空白样为空白，取1cm吸收池，在最大吸收波长处用紫外分光光度计测定供试品溶液的吸收度（回收率测定）。
在标准曲线上查得相应的奥美拉唑钠浓度值。
（9）同时考虑甲乙两人的擦拭回收率。
擦拭回收率计算公式：
擦拭回收率（%）=实测值/理论值×100%
检测数据见附表Ⅳ。
擦拭回收率可接受标准：
回收率≥50%RSD≤20%
6.4.漏项与偏差及采取的纠偏措施
在验证过程中，如出现漏项及偏差，应及时向确认小组汇报，征得同意后，将漏项或偏差部分采取的处理措施详细阐述说明。
附录Ⅰ：
吸收度测定值与奥美拉唑钠含量之间的线性关系检测记录
标准曲线溶液的制备：
取奥美拉唑钠标准品约20mg（按纯品计），精密称定，加0.1mol/LNaOH溶液适量，溶解后全部转入100ml棕色容量瓶中加0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，摇匀，即成每1ml约含奥美拉唑钠0.2mg的溶液；分别精密量取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、8ml分别置100ml棕色容量瓶中，分别加0.1mol/LNaOH溶液稀释至100ml，摇匀，即得每1ml分别含奥美拉唑钠2μg、4μg、6μg、8μg、10μg、12μg、16μg的溶液。
测定上述标准溶液的吸收度，记录数据如下
奥美拉唑钠标准品批号：
含量：
序号
奥美拉唑钠标准溶液的浓度（μg/ml）
吸收度
（A）
1
2
2
4
3
6
4
8
5
10
6
12
7
16
标准曲线方程：
验证人
验证日期
年月日
复核人
复核日期
年月日
附录Ⅱ：
准确度和精密度检测记录
供试品溶液的制备取6.2.2.1.奥美拉唑钠浓度为0.2mg/ml的标准溶液，分别精密量取5ml于6个100ml棕色容量瓶中，加0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，摇匀，制成6个10μg/ml的奥美拉唑钠溶液。
吸收度测定按照紫外分光光度计操作规程，用1cm吸收池，在最大吸收波长处测定这6个溶液的吸收度，根据标准曲线上查得相应的奥美拉唑钠含量，即为实测值。
可接受标准精密度限度要求：
RSD≤5%
准确度限度要求：
相对误差≤10%
奥美拉唑钠标准品批号：
含量：
检测次数
1
2
3
4
5
6
平均值
供试溶液的吸收度
实测值（μg/ml）
准确度（相对误差）
精密度（RSD）
验证人
验证日期
年月日
复核人
复核日期
年月日
附录Ⅲ：
检测限和定量限检测记录
根据线性回归方程得到的线性回归数据，计算方法的检测限，定量限。
检测限为：
LOD=3.3×SD/B
定量限为：
LOQ=10×SD/B
回归方程
SD值
B值
检测限
定量限
验证人
验证日期
年月日
复核人
复核日期
年月日
附录Ⅳ：
棉签擦拭法取样过程回收率检测记录
奥美拉唑钠溶液的制备取6.2.2.1.奥美拉唑钠浓度0.2mg/ml的标准溶液，精密量取10ml置50ml棕色容量瓶中，加0.1mol/LNaOH稀释至刻度，制成40μg/ml的溶液。
定量装入喷雾器内，备用。
模拟擦拭法回收率测定准备一块平整光滑的316L型不锈钢钢板，在钢板上用钢锥划出100㎜×100㎜的方块，共6个方块。
将约6ml该溶液均匀的全部喷洒在6块100㎜×100㎜的区域内。
用电吹风温和地吹干不锈钢板。
用0.1mol/LNaOH润湿棉签，模拟棉签擦拭法取样过程擦拭钢板，每擦一个方块（100cm2）换一根擦拭棉签。
擦拭完毕后将棉签分别放入装有10ml0.1mol/LNaOH溶液的试管中，加塞轻摇试管并放置10min，使物质溶出，过滤即得供试品溶液。
6块面积同法操作。
此清洁模拟验证样品奥美拉唑钠理论值为：
40μg/ml×6ml/6（块）/10ml=4μg/ml
同时取一根药用棉签放入带塞试管中加入10ml0.1mol/LNaOH溶液，加塞轻摇试管，并放置10min，取出棉签并过滤，即得棉签空白样。
以棉签空白样为空白，取1cm吸收池，在最大吸收波长处用紫外分光光度计测定供试品溶液的吸收度（回收率测定）。
在标准曲线上查得相应的奥美拉唑钠浓度值。
擦拭回收率计算公式：
擦拭回收率（%）=实测值/理论值×100%
擦拭回收率可接受标准：
回收率≥50%RSD≤20%
奥美拉唑钠溶液的浓度：
检测次数
1
2
3
4
5
6
平均值
供试品溶液吸光度
（A）
甲
乙
实测值（μg/ml）
甲
乙
理论值（μg/ml）
回收率（%）
甲
乙
RSD（%）
甲
乙
验证人
验证日期
年月日
复核人
复核日期
年月日
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