病原学基本实验技术.ppt

病原学基本实验技术.ppt

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病原学基本实验技术-1,细菌常见接种技术与无菌操作杀菌与抑菌技术直接镜检与染色镜检技术-1,Lesson4,sosoyjw,课程内容,医学免疫学基本实验技术病原学基本实验技术细菌常见接种技术与无菌操作杀菌与抑菌技术直接镜检与染色镜检技术直接涂片法与饱和盐水浮聚法镜检虫卵革兰染色法镜检细菌抗酸染色法镜检细菌刚果红负染色法镜检细菌细菌的常规鉴定技术实验动物的接种技术,sosoyjw,本次课程进度安排,时间：

180min主控室统一教学（20min）教学录像：

病原学基本实验技术-1（20min）各实验室教学（160min）,sosoyjw,教学录像：

病原学基本实验技术-1,各实验室教学,sosoyjw,实验室教学,时间：

160min讲解示教（50min）：

细菌常见接种技术与无菌操作（25min）杀菌与抑菌技术（10min）革兰染色法镜检细菌（10min）直接涂片法镜检虫卵（5min）操作（110min）：

练习细菌接种与无菌操作（15min）（4平板+3试管）杀菌与抑菌技术3个试验（5min）（4平板）革兰染色法镜检细菌（50min）直接涂片法镜检虫卵（40min）,sosoyjw,细菌常见接种技术与无菌操作,平板（固体）培养基接种法操作示教划线接种法（重点）涂抹接种法空气沉降法与倾注法（了解）试管培养基接种法操作示教固体斜面接种法半固体接种法高层斜面接种法液体接种法,sosoyjw,划线接种法,划线接种器具：

接种环方法：

分离划线法分区划线法扇形划线法与曲线划线法密集划线法,sosoyjw,分区划线法,分区划线方法,培养结果,sosoyjw,扇形划线法与曲线划线法,扇形划线法,曲线划线法,sosoyjw,密集划线法,密集划线方法,培养结果,sosoyjw,涂抹接种法,涂抹接种器具：

L棒、棉拭子、手指等方法：

L棒涂抹法、棉拭子涂抹法、手指涂抹法,L棒（玻棒）,棉拭子（棉签）,sosoyjw,固体斜面接种法,接种器具：

接种环方法：

接种环取菌后，在斜面先由底部向上划一直线，再由底部向上蛇形划线。

或直接由底部向上蛇形划线。

sosoyjw,半固体接种法,接种器具：

接种针方法：

接种针取菌后，直接延中轴线刺入半固体培养基，距离试管底部约0.5cm处停止，延原穿刺路径抽出。

sosoyjw,高层斜面接种法,接种器具：

接种针方法：

接种针取菌后，先延中轴线作穿刺接种（如半固体接种法），抽出后在斜面作蛇形划线接种（如固体斜面接种法）。

sosoyjw,液体接种法,接种器具：

接种环方法：

接种环取菌后，倾斜试管，在接近液面的管壁上涂抹接种。

竖直试管后，接种点应没入液体培养基中。

sosoyjw,平板接种操作方法（示教）,sosoyjw,试管接种操作方法（示教）,单管操作：

双管操作：

sosoyjw,（使用1个普通琼脂平板培养基）,（使用2个普通琼脂平板培养基）,（使用1个普通琼脂平板培养基）,杀菌与抑菌技术,sosoyjw,紫外线杀菌试验,菌种：

大肠杆菌（无芽胞）、枯草杆菌（有芽胞）方法：

1、平板底面分2区并标记，密集划线接种2种细菌各占1区。

2、2种细菌各一半区域经紫外线50cm照射30min。

3、37培养18-24h，观察分析生长现象。

大肠杆菌,枯草杆菌,2种细菌各有一半被遮盖,sosoyjw,手指皮肤消毒试验,菌种：

手指皮肤表面细菌消毒试剂：

2%碘酒、75%酒精消毒：

碘酒擦拭消毒后酒精脱碘方法：

1、平板底面分4区，标记。

2、同学A用右手食指涂抹接种A1区。

3、消毒该手指后涂抹接种A2区。

4、同学B同法涂抹接种B1（消毒前）、B2（消毒后）区。

3、37培养18-24h，观察分析生长现象。

sosoyjw,纸片法药物敏感试验,菌种：

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌方法：

1、平板底面分4区并标记，密集划线接种两种细菌各占2区。

2、如图放置抗生素滤纸片于各区中心，轻压固定。

3、37培养18-24h，观察测量抑菌圈直径，分析试验结果。

金葡,大肠,金葡,大肠,青霉素,链霉素,sosoyjw,纸片法药物敏感试验,菌种：

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌方法：

1、平板底面分4区并标记，棉签涂抹接种两种细菌各占2区。

2、如图放置抗生素滤纸片于各区中心，轻压固定。

3、37培养18-24h，观察测量抑菌圈直径，分析试验结果。

sosoyjw,纸片法药物敏感试验,菌种：

金黄色葡萄球菌方法：

1、密集划线接种，使细菌均匀分布于整个平板。

2、平板分3区，放置抗生素滤纸片于各区中心，轻压固定。

3、37培养18-24h，观察测量抑菌圈直径，分析试验结果。

抑菌圈,抗生素滤纸片,sosoyjw,革兰染色法镜检细菌,原理：

目前主要倾向于细胞壁学说方法：

制片染色镜检制片：

涂片、干燥、固定染色：

1、革兰紫液初染1min，水洗2、革兰碘液媒染1min，水洗3、95%酒精反复脱色30秒，水洗4、稀释复红复染1min，水洗镜检：

吸水纸吸干、油镜镜检,sosoyjw,革兰染色法细胞壁学说,1、初染革兰紫液,2、媒染革兰碘液,3、脱色95%酒精,4、复染稀释复红,有的细菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，易被乙醇脱水，形成一道屏障，初染的染料不能渗出细胞，复染的染料不能进入细胞。

菌体保持初染的颜色（紫色），称为革兰阳性菌（G）。

有的细菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，脂质含量多，易被乙醇溶解，初染的染料易于渗出细胞，复染的染料能进入细胞。

菌体被染成复染的颜色（红色），称为革兰阴性菌（G）。

sosoyjw,革兰染色法制片,1、涂片,2、干燥,3、固定,sosoyjw,金葡球菌,大肠杆菌,革兰染色法油镜镜检结果,sosoyjw,直接涂片法镜检虫卵,标本：

混合虫卵标本液方法：

制片镜检制片：

1、取标本液1滴，滴于洁净载玻片。

2、用滴管推擀成薄膜（或盖上盖玻片）。

镜检：

1、低倍镜下查找可疑虫卵。

2、高倍镜下鉴定虫卵。

sosoyjw,主要蠕虫虫卵比较图（点击放大）,3143m3143m,未受精蛔虫卵,受精蛔虫卵,猪带绦虫卵,鞭虫卵,蛲虫卵,肝吸虫卵,钩虫卵,肺吸虫卵,姜片虫卵,日本血吸虫卵,4575m3550m,8894m3944m,5054m2223m,5676m3640m,5060m2030m,2735m1220m,80118m4860m,180185m130140m,约89m67m,曼氏迭宫绦虫卵,5276m3144m,sosoyjw,蛔虫未受精卵,长椭圆形，外覆较薄的蛋白质膜，卵内含许多大小不等的折光性颗粒。

8894m3944m,sosoyjw,蛔虫受精卵,宽椭圆形，外覆蛋白质膜，卵内含一个大而圆的卵细胞，与卵壳之间有新月形间隙。

4575m3550m,sosoyjw,鞭虫卵,5054m2223m,纺锤形或腰鼓形，卵壳较厚两端各有一透明塞状突起，内含未分裂卵细胞。

sosoyjw,钩虫卵,5676m3640m,椭圆形，卵壳薄而透明，内含24个卵细胞。

陈旧粪便中的虫卵可内含多个卵细胞（桑葚期）。

sosoyjw,蛲虫卵,5060m2030m,不对称长椭球形，一侧较平，一侧稍凸，无色透明。

卵内含多细胞期胚胎。

sosoyjw,肝吸虫卵,小疣,2735m1220m,卵盖,肩峰,毛蚴,形似芝麻，甚小。

一端较窄且有盖，盖周围卵壳增厚形成肩峰，另一端有小疣（亦称小瘤）。

卵内含有毛蚴。

sosoyjw,卫氏并殖吸虫卵,80118m4860m,卵盖,椭圆形，卵盖大且常略倾斜。

内含一个卵细胞和若干卵黄细胞。

sosoyjw,姜片虫卵,长椭圆形，淡黄色，卵壳薄，卵盖常位于较窄的一端，卵内含一个卵细胞和数十个卵黄细胞。

180185m130140m,sosoyjw,日本血吸虫卵,约67m89m,椭圆形，卵壳一侧有一小棘，卵内含有成熟的毛蚴。

sosoyjw,猪带绦虫卵,3143m3143m,六钩蚴,卵壳,胚膜,卵壳完整的虫卵,卵壳不完整的虫卵,球形或近似球形，卵壳很薄且易脱落。

内有较厚胚膜，棕黄色，光镜下呈放射状条纹。

胚膜内含球形六钩蚴。

sosoyjw,曼氏迭宫绦虫卵,5276m3144m,卵盖,椭圆形，两端稍尖，卵壳较薄，一端有盖。

卵内含有一个卵细胞和若干卵黄细胞。

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主要参考文献：

病原生物与免疫实验学第2版，科学出版社人体寄生虫学第7版，人民卫生出版社医学微生物学第7版，人民卫生出版社医学免疫学第5版，人民卫生出版社,教学录像,