免疫检测系统的分析性能验证评估报告.docx
《免疫检测系统的分析性能验证评估报告.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫检测系统的分析性能验证评估报告.docx（47页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
免疫检测系统的分析性能验证评估报告
免疫检测系统/方法的分析性能验证评估报告
检验中心依据CNAS-CL02：
《医学实验室质量和能力认可准则》（ISO15189：
2007）对医学实验室检测系统性能评价的相关要求，对定性检测项目的灵敏度、特异性、符合率、检出限、CUTOFF值进行评价；雅培ARCHITECTi2000SR全自动化学发光分析检测系统性能主要从以下几个方面进行评价：
精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围、功能灵敏度等。
具体实施方案如下。
1目的：
对雅培ARCHITECTi2000SR全自动化学发光分析检测系统定量检测的肿瘤8项（AFP、CEA、Ferritin、TotalPSA、FreePSA、CA125、CA19-9、CA15-3）和感染免疫项目（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、抗HCV、抗HIV、抗TP、TRUST）定性检测方法的分析性能进行评价，结果与生产厂家给出的性能指标进行比较，来验证生产厂家给出的性能指标是否能满足临床要求。
若无厂家性能指标则与CLIA’88规定的标准或卫生部室间质评计划表提供的标准比较，判断仪器的性能是否符合要求。
2原理
2.1感染免疫定性检测项目
2.1.1检测系统灵敏度、特异性和符合率
评价仪器测量结果与真值的一致程度。
采用参加卫生部临检中心的室间质评样品，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准。
检测系统灵敏度为真阳性/（真阳性+假阴性）的百分率。
诊断特异性为真阴性/（真阴性+假阳性）的百分率。
符合率指所有检验结果中正确结果百分率。
2.1.2检出限
检出某种分析物的最低浓度。
选择定值阳性质控品，按比例作系列稀释并检测，以确定其最低检出限。
以S／CO大于1且接近于1,比值稳定的最低浓度作为其检测限。
2.1.3CUTOFF值
判定某种分析物有或无的判断值。
收集1500例健康人群需验证项目的OD值，求其平均值和标准差（SD），以平均值+3SD作为本实验室的Cutoff值。
2.2肿瘤8项定量检测项目
2.2.1精密度评价
采用EP15-A《用户对精密度和准确性能的核实实验-批准指南》的性能要求，通过检测每个项目质控物值，计算项目的批内精密度和日间精密度。
并与厂家声明的批内、日间精密度进行比较，核实是否与厂家声明的一致。
2.2.2正确度验证
评价仪器测量结果与真值的一致程度。
2.2.2.1：
采用EP15-A《用户对精密度和准确性能的核实实验-批准指南》的性能要求，通过检测定值的参考物质来计算偏倚，判断是否与厂家声明或与其他规定的性能要求一致。
2.2.2.2：
采用卫生部临检中心室间质评回报结果作为评价指标，分析最近一次室间质评回报成绩。
2.2.3线性范围评价
采用EP6-A《定量检测系统线性评价》方案，采用未经过任何处理的病人检验标本，确定某项目检测上限的同时验证其检测上下限范围是否呈线性关系。
2.2.4临床可报告范围评价
临床可报告范围上限为分析测量范围上限乘以最大稀释度。
结合最大稀释度以及分析测量范围确定临床可报告范围。
3检测方法：
感染免疫项目（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、抗HCV、抗HIV、抗TP）的检测方法是ELISA法，其中梅毒螺旋体非特异性抗体（TRUST）的检测方法是粒子凝集法；肿瘤8项（AFP、CEA、Ferritin、TotalPSA、FreePSA、CA125、CA19-9、CA15-3）的检测方法为化学发光免疫分析法（双抗夹心法）。
4方案：
4.1感染免疫定性检测项目评价方案
采用2011年卫生部临检中心室间质评（EQA）结果作为评价标准。
4.1.1特异性（%）=EQA被测试剂盒测定真阴性数/EQA阴性数*100%
4.1.2灵敏度（%）=EQA被测试剂盒测定真阳性数/EQA阳性数*100%
4.1.3符合率（%）=EQA被测试剂盒测定的正确数/EQA总数*100%
4.1.4最低检出限：
用每一需验证项目的定值阳性质控品，按比例做合适的浓度稀释系列稀释并检测，每个浓度重复3孔，根据试剂盒要求仪器自动计算S／CO值，记录每一孔的S/CO值。
以S／CO大于1且接近于1所对应的浓度作为其最低检出限。
4.1.5收集1500例健康人群需验证项目的OD值，求其平均值和标准差（SD），以平均值+3SD作为本实验室的Cutoff值。
4.2肿瘤8项定量检测项目性能评价方案
4.2.1精密度评价方案
根据NCCLSEP15-A文件，对稳定的样品作多次测定，求重复测定值的均值、标准差及变异系数。
重复次数一般要求20次。
批内精密度分析：
对验证材料（两个浓度）在一个批次内连续进行20次检测。
日间精密度分析：
对验证材料（两个浓度）每天检测2个浓度（正常、异常值），每个浓度重复测定4次，连续检测5天。
每天应进行正常的室内质量控制，在控后方可进行检测。
所检所有数据超出3SD的数据不能超过2个，否则应分析失控原因纠正后重新进行试验，计算批内及日间不精密度，并将批内不精密度CV（%）和日间精密度CV（%）与厂家声明进行比较，核实是否一致或批内精密度≤1/4CLIA’88，日间精密度≤1/3CLIA’88。
判定标准：
批内性精密度CV%应≤1/4最大允许误差（TEa）（TEa参考卫生部临检中心室间质量评价计划书中的允许总误差）。
日间精密度CV%≤1/3最大允许误差（TEa）（TEa参考卫生部临检中心室间质量评价计划书中的允许总误差）。
4.2.2正确度验证（定值参考物质检测）
方案一：
根据NCLLSEP5-A文件，采用定值校准品进行正确度验证。
首先使用校准品1进行检测系统的校准，之后用不同批号的校准品2进行检测，每个项目重复测定5次，取平均值与校准品2的定值进行比较，计算绝对偏倚与相对偏倚，要求相对偏倚小于1/2CLIA’88或小于1/2最大允许误差（TEa）（TEa参考卫生部临检中心室间质量评价计划书中的允许总误差）。
方案二：
根据历年的EQA上报数据（至少连续2次的）进行统计，计算偏倚。
4.2.3临床可报告范围评价方案
依照CLSI的EP6一A[s]文件的要求，收集评价项目的患者高值与低值标本（高值标本为接近线性范围上限或高于线性上限10%~15%的标本，低值标本为接近线性范围下限的标本），要求有足够的样本量能满足所需样本稀释和测量，将高浓度混合样品与低浓度混合样品按5H、4H+L,3H+2L、2H+3L、H+4L、5L的比例精确配制，重复测定2次。
所有样品应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定，最好在一天之内完成。
统计数据，剔除离群值，单个离群值可直接由数据组中剔除并进行重测，全部样本无需重新测定。
如发现多个离群值或数据点过于分散，需检查造成此误差的可能原因，对可能原因进行纠正后，对全部样本进行重新测定。
求出2次测定结果的平均值和每一稀释度的预期值，进行相关回归分析，判断其是否线性。
采用线性回归分析，以预期值为X，以按比例稀释的实测均值为Y，得线性方程Y=bX+a，得到a、b及R2值。
X和Y分别为自变量和应变量，b为斜率，a为Y轴截距，R2为相关系数的平方，判断其是否线性。
制作线性差异图：
计算出每一稀释度测定均值和预期值的差值。
以预期值为横轴，差值为纵轴，做图。
判断标准：
●若b在0.97-1.03范围内，R2>0.95，作a与0有无显著性差异的t检验，若P值>0.05，直线回归方程可接受，可直接判断线性范围在实验已涉及浓度；
●若b不在0.97-1.03范围内，a较大，舍去高值或低值组数据，另作回归统计。
直至缩小的分析范围其回归方程中a和b的判断符合要求，该范围为线性范围。
●线性差异图：
如果在每一浓度处的实测均值与预期值的差异值都在厂家声明的允许差异限之内，可进一步确认厂家声称可测量范围是可接受的。
4.2.4临床可报告范围评价方案
对于临床可报告范围（CRR）大于分析测量范围的检测项目,需进行最大稀释度验证实验。
取一份高浓度的病人样本（接近线性范围上限的样品），用空白液或厂商推荐的稀释液进行系列稀释，稀释倍数包含厂家推荐最大稀释倍数，每个浓度重复测定2次，取2次结果的平均值为各个稀释度样品的检测值。
依据系列稀释浓度计算各系列样品的分析物浓度的预期值。
比较各个稀释度样品的检测值和预期值,分别计算比值R（R=检测值/预期值）。
判断标准：
●80%≤R≤120％定为可接受限，R<80%和R>120%时的相应稀释度为不可接受稀释度，其上一级别的稀释度即为该测试的最大稀释度。
●或者以1/2CLIA’88总允许误差范围为判断限。
符合条件的最大稀释度确定为该项目的最大稀释倍数。
4.2.5FreePSA和TotalPSA的功能灵敏度评价方案
功能灵敏度定义为：
以天间重复CV为20%时对应检测限样品具有的平均浓度，确定为检测系统或方法可定量报告分析物的最低浓度或其他量值的限值。
为了估计功能灵敏度，须用多个检测限浓度来确定在低浓度处的精密度表现，从中选择具有或接近于20%CV的对应浓度，为可定量报告的最低浓度或其它量值的限值。
分别收集FreePSA和TotalPSA正常值标本的混合血清，作系列稀释（稀释的最低预期值最好低于检测范围的下限），记录每天的检测结果，连续检测不少于10天，计算每个稀释度的天间CV，以天间CV最接近于20%时所对应的平均浓度确定为该项目的功能灵敏度。
（备注：
只做FreePSA、TotalPSA的功能灵敏度，其他项目最低检出限根据厂家声明的检出限乘以6-10倍，不进行验证）
5器材
雅培ARCHITECTi2000SR全自动化学发光分析仪，伯乐Model680全自动酶标仪
6结果
验证结果均符合相关规定，详见附表一、二。
7结论：
本实验的感染免疫项目（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、抗HCV、抗HIV、抗TP、TRUST）等定性检测系统的灵敏度、特异性、符合率、检出限、CUTOFF值等指标均符合要求，可以满足临床需求。
本实验雅培ARCHITECTi2000SR全自动化学发光分析检测系统定量检测的肿瘤8项（AFP、CEA、Ferritin、TotalPSA、FreePSA、CA125、CA19-9、CA15-3）的精密度、正确度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间及FreePSA与TotalPSA的功能灵敏度等指标均符合要求，可以满足临床需求。
附表一定性检测系统/方法的分析性能验证评估表
序号
项目参数
检测系统/方法
生产厂给出技术指标
特异性验证结果
灵敏度验证结果
检出限
符合率验证结果
CUTOFF验证值
评估结论
1
乙型肝炎病毒表面抗原
（HBsAg）
1.检测设备:
Ａ．伯乐Model680全自动酶标仪，注册号：
国食药监械（进）字2011第2400149号，设备编号：
LAB-YQ/MY004；B．伯乐1575洗板机，注册号：
国食药监械（进）字2010第2403456号，设备编号：
LAB-YQ/MY007
2.检测试剂：
北京万泰乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法），国药准字S1*******；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦HBsAg标准物质（1IU/ml），GBW（E）090069
5.检测方法：
ELISA法。
阳性参考品（P1~P3）符合率为3/3，阴性参考品（N1~N20）符合率为20/20，灵敏度参考品HBsAgadr、adw及ay亚型，系列1的最低检出量不高于0.1IU/ml，系列2及系列3的最低检出量不高于0.2IU/ml。
精密度CV（%）≤15%
100%
100%
0.5IU/ml
100%
0.067
符合要求
2
乙型肝炎病毒表面抗体
（HBsAb）
1.检测设备:
Ａ．伯乐Model680全自动酶标仪，注册号：
国食药监械（进）字2011第2400149号，设备编号：
LAB-YQ/MY004；B．伯乐1575洗板机，注册号：
国食药监械（进）字2010第2403456号，设备编号：
LAB-YQ/MY007
2.检测试剂：
北京万泰乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），国食药监械（准）字2008第3401056号；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦抗HBs标准物质（30mIU/ml），GBW（E）090125
5.检测方法：
ELISA法。
最低检出量参考品P1（10mIu），P2（5mIu），P3（2mIu）最低检出量不高于10mIu；阴性参考品（N1~N）20符合率为20/20,精密度CV（%）≤15%。
100%
100%
5mIU/ml
100%
0.089
符合要求
3
乙型肝炎病毒e抗原
（HBeAg）
1.检测设备:
Ａ．伯乐Model680全自动酶标仪，注册号：
国食药监械（进）字2011第2400149号，设备编号：
LAB-YQ/MY004；B．伯乐1575洗板机，注册号：
国食药监械（进）字2010第2403456号，设备编号：
LAB-YQ/MY007
2.检测试剂：
北京万泰乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒（酶联免疫法），国食药监械（准）字2008第3401283号；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦HBeAg标准物质（2NCU/ml），GBW（E）090149
5.检测方法：
ELISA法。
阳性参考品（P1~P10）符合率为10/10，阴性参考品（N1~N15）符合率为15/15，,系列1~系列3每系列检出率不低于2/3。
精密度CV（%）≤15%。
100%
100%
0.67NCU/ml
100%
0.049
符合要求
4
乙型肝炎病毒e抗体
（HBeAb）
1.检测设备:
Ａ．伯乐Model680全自动酶标仪，注册号：
国食药监械（进）字2011第2400149号，设备编号：
LAB-YQ/MY004；B．伯乐1575洗板机，注册号：
国食药监械（进）字2010第2403456号，设备编号：
LAB-YQ/MY007
2.检测试剂：
北京万泰乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），国食药监械（准）字2008第3401284号；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦抗HBe标准物质（8NCU/ml），GBW（E）090147
5.检测方法：
ELISA法。
阳性参考品（P1~P10）符合率为10/10，阴性参考品（N1~N15）符合率为15/15，,最低检出量参考品（3份系列）各系列检出率不低于2/3。
精密度CV（%）≤20%
100%
85.7%
4NCU/ml
96.7%
1.763
符合要求
5
乙型肝炎病毒核心抗体
（HBcAb）
1.检测设备:
Ａ．伯乐Model680全自动酶标仪，注册号：
国食药监械（进）字2011第2400149号，设备编号：
LAB-YQ/MY004；B．伯乐1575洗板机，注册号：
国食药监械（进）字2010第2403456号，设备编号：
LAB-YQ/MY007
2.检测试剂：
北京万泰乙型肝炎病毒核心抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），国食药监械（准）字2008第3401057号；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦抗HBc标准物质（2IU/ml），GBW（E）090129
5.检测方法：
ELISA法。
阳性参考品（P1~P15）符合率为14/15，阴性参考品（N1~N15）符合率为15/15，3份系列稀释参考品检出率不低于2/3。
精密度CV（%）≤15%。
100%
100%
1.33IU/ml（2.67NCU/ml）
100%
4.085
符合要求
6
丙肝抗体
（Anti-HCV）
1.检测设备:
Ａ．伯乐Model680全自动酶标仪，注册号：
国食药监械（进）字2011第2400149号，设备编号：
LAB-YQ/MY004；B．伯乐1575洗板机，注册号：
国食药监械（进）字2010第2403456号，设备编号：
LAB-YQ/MY007
2.检测试剂：
上海荣盛丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），国药准字S1*******；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦抗HCV标准物质（1NCU/ml），GBW（E）090073
5.检测方法：
ELISA法。
阳性参考品（P1~P30）符合率≥29/30，阴性参考品（N1~N30）符合率≥29/30，4份HCV抗体国家最低检出限参考品，阳性反应不得少于2份，精密度CV（%）≤15%。
100%
100%
0.25NCU/m
100%
0.062
符合要求
7
HIV抗体
（Anti-HIV-1/2）
1.检测设备:
Ａ．伯乐Model680全自动酶标仪，注册号：
国食药监械（进）字2011第2400149号，设备编号：
LAB-YQ/MY004；B．伯乐1575洗板机，注册号：
国食药监械（进）字2010第2403456号，设备编号：
LAB-YQ/MY007
2.检测试剂：
人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），国药准字S2*******；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦抗HIV-Ⅰ标准物质（1NCU/ml），GBW（E）090156
5.检测方法：
ELISA法。
阳性参考品（P1~P10）符合率为10/10，阴性参考品（N1~N15）符合率为15/15，5份系列稀释参考品检出率不低于3/5，其中基质液阴性反应。
精密度CV（%）≤15%。
95.0%
100%
0.14NCU/ml
96.7%
0.074
符合要求
8
梅毒螺旋体特异性抗体
（Anti-TP）
1.检测设备:
Ａ．伯乐Model680全自动酶标仪，注册号：
国食药监械（进）字2011第2400149号，设备编号：
LAB-YQ/MY004；B．伯乐1575洗板机，注册号：
国食药监械（进）字2010第2403456号，设备编号：
LAB-YQ/MY007
2.检测试剂：
北京万泰梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），国药准字S2*******；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦抗TP标准物质（6mIU/ml），GBW（E）090081
5.检测方法：
ELISA法。
阳性参考品（P1~P10）符合率为10/10，阴性参考品（N1~N15）符合率为15/15，5份系列稀释参考品检出率不低于3/5，其中基质液阴性反应。
精密度CV（%）≤15%。
92.3%
94.1%
0.75mIU/ml（0.125NCU/ml）
93.3%
0.074
符合要求
9
梅毒甲苯胺红不加热血清试验
（TRUST）
1.检测设备:
手工法
2.检测试剂：
上海荣盛梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂，国药准字S1*******；
3.校准品：
（不适用）；
4.质控品：
北京康彻思坦抗TP（非特异性）标准物质（400mIU（TP非2NCU）/ml），GBW（E）090085；
5.检测方法：
凝集法
特异性：
阳性效价相对于标准值在±1以内.
灵敏度:
阳性对照1:
320稀释相对于标准值在±1以内。
95.8%
100%
200mIU/ml（1NCU/ml）
96.7%
不适用
符合要求
评估人（技术主管）及评估日期
批准人（检验中心主任）及批准日期
附表二定量检测系统/方法的分析性能验证评估表
序号
项目/参数
检测系统
生产厂给出技术指标
正确度验证结果
精密度验证结果
可报告范围/线性范围验证结果
携带污染率
允许总误差
评估结论
1
甲胎蛋白
（AFP）
1.检测设备：
ARCHITECTi2000全自动化学发光分析仪（雅培），中华人民共和国医疗器械注册证：
国药管械（进）字2011第3401807号，设备编号：
LAB-YQ/MY003；
2.检测试剂：
雅培甲胎蛋白试剂盒，SFDA（I）20093402354；
3.校准品：
雅培甲胎蛋白校准品，国食药监械（进）字2010第3403122号；
4.控制品：
伯乐液体肿瘤标志物（Plus）控制品（水平1、水平3），SFDA（I）20103401017；
5.检测方法：
化学发光免疫分析法。
1.精密度：
批内CV≤10.6%
总CV≤10.9%；
2.线性范围：
0.40-1000.00ng/mL
3.携带污染率：
对AFP浓度为95191ng/mL的样本进行检测后，没有发现携带污染情况（小于5PPM）。
06225LF00（CALB）：
2.54%
批内试验：
低值：
CV=2.60%
高值：
CV=2.58%
天间试验：
低值：
CV=5.78%
高值：
CV=3.37%
可报告范围：
2.14-41214ng/mL
线性范围：
2.14-824.28ng/mL
不适用
1.正确度：
相对偏倚≤12.5％
2.精密度：
批内CV:
≤6.25％，天间CV:
≤8.33％
满足要求
2
癌胚抗原
（CEA）
1.检测设备：
ARCHITECTi2000全自动化学发光分析仪（雅培），中华人民共和国医疗器械注册证：
国药管械（进）字2011第3401807号，设备编号：
LAB-YQ/MY003；
2.检测试剂：
雅培癌胚抗原定量检测试剂盒（化学发光法），SFDA（I）20083402658；
3.校准品：
雅培癌胚抗原校准品，国食药监械（进）字2010第3401872号；
4.控制品：
伯乐液体肿瘤标志物（Plus）控制品（水平1、水平3），SFDA（I）20103401017；
5.检测方法：
化学发光免疫分析法。
1.精密度：
总CV≤8%；
2.线性范围：
0.50-1500.00ng/mL
3.携带污染率：
对CEA浓度为43630ng/mL的样本进行检测后，没有发现携带污染情况（小于12PPM）。
93006LF00（CALB）：
11.86%
批内试验：
低值：
CV=6.05%
高值：
CV=5.67%
天间试验：
低值：
CV=6.73%
高值：
CV=6.43%
可报告范围：
2.37-18828.8ng/mL
线性范围：
2.37-941.44ng/mL
不适用
1.正确度：
相对偏倚≤12.5％
2.精密度：
批内CV:
≤6.25％，天间CV:
≤8.33％
满足要求
3
铁蛋白（Ferritin）
1.检测设备：
ARCHITECTi2000全自动化学发光分析仪（雅培），中华人民共和国医疗器械注册证：
国药管械（进）字2011第3401807号，设备编号：
LAB-YQ/MY003；
2.检测试剂：
雅培铁蛋白测定试剂盒（化学发光微粒子免疫分析法），SFDA（I）20082401156；
3.校准品：
雅培铁蛋白校准品，国食药监械（进）字2008第2402418号；
4.控制品：
伯乐液体肿瘤标志物（Plus）控制品（水平1、水平3），SFDA（I）20103401017；
5.检测方法：
化学发光免疫分析法。
1.精密度：
总CV≤9%；
2.线性范围：
1.00-2000ng/mL
01227JN00（CALA）：
4.84%；01227JN00（CALB）：
4.95%
批内试验：
低值：
CV=3.30%
高值：
CV=3.81%
天间试验：
低值：
CV=3.74%
高值：
CV=4.42%
可报告范围：
3.01-305
升级会员 