血清清蛋白γ球蛋白的分离提纯与鉴定医学第六实验室.docx

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血清清蛋白γ球蛋白的分离提纯与鉴定医学第六实验室

生物化学实验报告

姓名：

学号：

专业年级：

组别：

第六实验室

生物化学与分子生物学实验教学中心

一、实验室规则

1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。

2．进入实验室必须穿白大衣。

严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。

不得高声说话。

严禁拿实验器具开玩笑。

实验室内禁止吸烟、用餐。

3．严格按操作规程进行实验。

实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。

4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。

5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。

6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。

7．注意水、电、试剂的使用安全。

使用易燃易爆物品时应远离火源。

用试管加热时，管口不准对人。

严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。

任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。

8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。

废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。

9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。

实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。

实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。

10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。

值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。

离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。

二、实验报告的基本要求

实验报告通过分析总结实验的结果和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。

1．实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。

2．实验报告的前三部分

实验原理、

实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、

实验步骤（包括实验流程与操作步骤）要求在实验课前预习后撰写，作为实验预习报告的内容。

预习时也要考虑并设计好相应实验记录的表格。

3．每项内容的基本要求

（1）实验原理：

简明扼要地写出实验的原理，涉及化学反应时用化学反应方程式表示。

（2）实验材料：

应包括各种来源的生物样品及试剂和主要仪器。

说明化学试剂时要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。

试剂要标清所用的浓度。

（3）实验步骤：

描述要简洁，不能照抄实验讲义，可以采用工艺流程图的方式或自行设计的表格来表示，但对实验条件和操作的关键环节应写清楚，以便他人重复。

（4）实验记录：

包括主要实验条件、实验中观察到的现象及实验中的原始数据。

（5）结果（定量实验包括计算）：

应把所得的实验结果（如观察现象）和数据进行整理、归纳、分析、对比，尽量用图表的形式概括实验的结果，如实验组与对照组实验结果的比较表等（有时对实验结果还可附以必要的说明）。

（6）讨论：

不应是实验结果的重述，而是以结果为基础的逻辑推论。

如对定性实验，在分析实验结果的基础上应有中肯的结论。

还可以包括关于实验方法、操作技术和有关实验的一些问题，对实验异常结果的分析和评论，对于实验设计的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等。

（7）结论：

一般实验要有结论，结论要简单扼要，说明本次实验所获得的结果。

三、实验报告的评分标准（百分制）

1．实验预习报告内容（30分）

学生进入实验室前应预习实验，并书写预习报告。

实验预习报告应包括以下三部分：

实验原理（10分）：

要求以自己的语言归纳要点；

实验材料（5分）：

包括样品、试剂及仪器。

只列出主要仪器、试剂（常规材料不列）；

实验方法（15分）：

包括流程或路线、操作步骤，要以流程图、表格式给出要点，简明扼要。

依据各部分内容是否完整、清楚、简明等，分以下三个等级给分。

优秀

合格

不合格

30~25

24~18分

17~0分

优秀：

项目完整，能反映实验者的加工、整理、提炼。

合格：

较完整，有一定整理，但不够精炼。

不合格：

不完整、缺项，大段文字，完全照抄教材，记流水账。

实验预习报告不合格者，不允许进行实验。

该实验应重新预约，待实验室安排时间后方可进行实验。

2．实验记录内容（20分）

实验记录是实验教学、科学研究的重要环节之一，必须培养严谨的科学作风。

实验记录的主要内容包括以下三方面：

主要实验条件（如材料的来源、质量；试剂的规格、用量、浓度；实验时间、操作要点中的技巧、失误等，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据）；

实验中观察到的现象（如加入试剂后溶液颜色的变化）；

原始实验数据：

设计实验数据表格（注意三线表格式），准确记录实验中测得的原始数据。

记录测量值时，要根据仪器的精确度准确记录有效数字（如吸光值为0.050，不应写成0.05），注意有效数字的位数。

实验记录应在实验过程中书写；应该用钢笔或者圆珠笔记录，不能用铅笔。

记录不可擦抹和涂改，写错时可以准确划去重记。

记录数据时请教师审核并签名。

实验记录分以下三个等级给分。

优秀

合格

不合格

20~17

16~13分

12~0分

优秀：

如实详细地记录了实验条件、实验中观察到的现象、结果及实验中的原始数据（如三次测定的吸光度值）等；实验记录用钢笔或者圆珠笔记录，没有抹擦和涂改迹象。

书写准确，表格规范（三线表）。

有教师的签字审核。

合格：

记录了主要实验条件，但不详细、凌乱；实验中观察到的现象不细致；原始数据无涂改迹象，但不规范。

有教师的签字审核。

不合格：

记录不完整，有遗漏；原始数据有抹擦和涂改迹象、捏造数据（以0分计）；图、表格形式错误；用铅笔记录原始数据；无教师的签字审核。

若记录的结果有怀疑、遗漏、丢失，必须重做实验，培养严谨的科学作风。

3．结果与讨论（45分）

（1）数据处理（5分）

对实验中所测得的一系列数值，要选择合适的处理方法进行整理和分析。

数据处理时，要根据计算公式正确书写中间计算过程或推导过程及结果，得出最终实验结果。

要注意有效数字的位数、单位（国际单位制）。

经过统计处理的数据要以X±SD表示。

可分成以下三个等级给分。

优秀

合格

不合格

5分

4分

3~0分

优秀：

处理方法合理，中间过程清楚，数据格式单位规范。

合格：

处理方法较合理，有中间计算过程；数据格式单位较规范。

不合格：

处理方法不当；无中间过程；有效数字的位数、单位不规范。

（2）结果（20分）

实验结果部分应把所观察到的现象和处理的最终数据进行归纳、分析、比对，以列表法或作图法来表示。

同时对结果还可附以必要的说明。

要注意图表的规范：

表格要有编号、标题；表格中数据要有单位（通常列在每一列顶端的第一行或每一行左端的第一列）。

图也要有编号、标题，标注在图的下方；直角坐标图的纵轴和横轴要标出方向、名称、单位和长度单位；电泳图谱和层析图谱等要标明正、负极方向及分离出的区带、色带或色斑的组分或成分。

电泳结果还要标记泳道，并在图题下给出泳道的注释；要标出分子量标准的各条带的大小。

并且注意需要结合图表对结果进行较详细的解释说明。

可分成以下三个等级给分。

优秀

合格

不合格

20~17

16~13分

12~0分

优秀：

实验结果有归纳、解释说明，结果准确，格式规范。

合格：

堆砌实验现象、数据，解释说明少。

不合格：

最终实验结果错误且无解释说明，图表、数字不规范。

（3）讨论（20分）

讨论应围绕实验结果进行，不是实验结果的重述，而是以实验结果为基础的逻辑推论，基本内容包括：

①用已有的专业知识理论对实验结果进行讨论，从理论上对实验结果的各种资料、数据、现象等进行综合分析、解释，说明实验结果，重点阐述实验中出现的一般规律与特殊性规律之间的关系；

实验结果提示了哪些新问题，指出结果与结论的理论意义及其大小；

对实践的指导与应用价值；④实验中遇到的问题、差错和教训，与预想不一致的原因，有何待解决的方法，提出在今后的实验中需要注意和改进的地方；⑤实验目的是否达到。

同时能结合查阅的其他文献等资料进行讨论，有独到的见解。

在实验结果和理论分析的基础上，经过推理，归纳规律得出结论。

结论要严谨、精炼，表达要准确，与实验目的呼应。

也分三个等级给分。

优秀

合格

不合格

20~17

16~13分

12~0分

优秀：

分析实验结果的问题与经验；分析实验设计的优劣；能提出实验技术、方法的改进意见；能结合自己查阅的其他资料来讨论，有自己独到的见解；有结论。

合格：

仅针对实验结果进行讨论，有一定自己的见解。

不合格：

将讨论写成注意事项分析或回答思考题等，与实验结果无关。

4．格式与版面（5分）

按照实验报告的书写格式、版面是否整洁、工整，分三个等级给分。

优秀

合格

不合格

5分

4分

3~0分

优秀：

实验报告字体工整，版面整洁。

合格：

实验报告字体较工整，版面较整洁。

不合格：

实验报告字体潦草，版面凌乱。

5.加分（5~10分）：

以全英文书写实验报告视情况加5~10分。

IntroductiontoBiochemistryExperiment

Biochemistryexperimentisapreclinicalcurriculumofomni-specialtiesinbiomedicineandanexperimentalcurriculumforgoingwithbiochemistryteaching.Itstaskistohelpstudentstounderstandandmasterthebasictechnicalprinciplesandmethodsinbiochemistry,topossesstheabilitiesofanalyzingproblemsandworkingoutsolutionsindependently.Bylearningthiscurriculum,thestudentsshouldunderstandthebasicexperimentalprinciplesofspectrophotometry，chromatography,electrophoresisandcentrifuge,etal.，masterthebasictechnicalskillscommonlyusedwiththeseprinciplesandpossesstheabilitiestoapplytheskillssystematicallyandtooptimizetheexperimentconditions.Thegoalofbiochemistryexperimentistomakethestudentsstrengthentheirgraspofthebiochemistrytheoriesandtointegratewhattheyhavelearnedwithscientificresearchandclinicalapplication.

Thereare9experimentsthatrepresentmostimportantareasofbiochemistryincludingcharacterizationofproteinsandnucleicacidbyelectrophoresisandspectroscopicorchromatographicanalysis.Theseexperimentsareessentialforatypicalone-semestercourseandaretoberevisedandupdatedwhennecessary.Newexperimentswillbeaddedtothislistinthefuturetocovermoretopicsofbiochemistryandtoreflectthemanyadvancesinbiochemistry.

BiochemistryLaboratoryRules

1．Pre-LaboratoryPreparation

AllstudentsmustprepareBEFOREARRIVINGINTHELABORATORY.Theexperimentsaredesignedsothattheycanbecarriedout–withproperadvanceplanning–withinthefour-hourlaboratoryperiods.Itisexpectedthatstudentsshouldhaveafundamentalunderstandingofthetheoryandpracticespertainingtotheexperimentbeforeenteringthelaboratorytoconducttheseexperiments.

Biochemicalexperimentsoftenemploytoxicchemicals.Forthehealthandsafetyofallstudents,theexperimentalprotocolsmustbestudiedandtheday’sactivitiesshouldbeplannedinadvance.Ifitbecomesobviousthatastudentisill-prepared,heorshewillnotbepermittedtocontinuetheexperiment.

2．SafetyPrecautionsintheBiochemistryLaboratory

AllINJURIES,nomatterhowminor,shouldbereportedtotheinstructorIMMEDIATELY.Ifyouhaveanyquestionsregardingthesafehandlingofanybiochemical,consultyourinstructor.

3．Strictlyfollowtheexperimentalprocedures.

Turntoinstructorsimmediatelyforhelponcethelaboratoryinstrumentsdon’twork.DON’Ttrytofixthebreakdownbyyourself.Propercompensationforlossbecauseofyourownfaultwillbedemanded.

4．DisposalofSolutions

Inmostcasesthesolutionsusedduringthelaboratorycanbedisposedofasdirectedbylaboratorypersonnelattheendoftheperiod.Anyvolatileorganicsolventsshouldbeplacedinthehoodasdirected.Laboratorypersonnelwillthendisposeofthesesolvents.

5．Solidtrashesincludingwastepapersareprohibitedtodiscardintothesink.

6．Alltheglasswareshouldbecleanedimmediatelyafteruse.Andallthereagentbottlesandinstrumentsshouldbeplacedneatlyafteruse.

7．AnexperimentreportshouldbesubmittedtotheProfessorand/orTAsintime.

LaboratoryReport

1．Althoughstudentswillworkinpairsforallexperiments,eachstudentmustturninanindividuallaboratoryreport,writtenbyhimselforherself.Thesereportsshouldbeclearlywritteninink,typed,orprintedandbeclearandlegible.Ifmistakesaremade,neatlycrossthemoutandenterthecorrectionsnearby.Reportsshouldbewritteninthethirdperson（e.g.,donotuse“I”or“we”）.STAPLEaTitlePagetothetopofthereportandSTAPLEtheaccompanyinggraphs,tables,andlaboratorynotebooksheetstotheback.Ifthereportisnotclearlypresented,theinstructormayreturnthereportwithoutgradingit.

2．Eachlaboratoryreportshouldconsistof:

a.TitlePage

Atitlepageforeachexperimentisrequiredandshouldstatethetitleoftheexperiment,thenameofthestudent,thedatesofthelaboratoryperiodscovered,thenamesofthelaboratorypartners,andthedatethatthelaboratoryreportisdue.

b.Objectives

Statementofthepointoftheexperiment-innomorethantwosentences.

c.Procedures

DONOTrecapitulatethelaboratoryprotocol.WriteinyouOWNwords.Aclearflowchartoftheproceduresisrecommended.

d.Results

Thissectionshouldsummarizeyourobservationspresentedintheformofgraphs,calculations,tables,etc.

e.Discussion

Evaluateyourdata.Explainwhatyouobservedandalsowhyyouthinkthedatawereasobserved.Donotrestateprocedures!

Listpossiblesitesoferror.Wheneverpossibledemonstrateyourunderstandingofthetheorybehindtheexperiment.Supportyourresults（e.g.:

“UsingthelinearportionoftheAbsorbancevs.Concentrationgraphtocalculatetheslope,itwasdeterminedthat...”）（Limitedtoonlyonepageperexperimentforexperiments1-6andfourpagesforexperiment7-9）.

3．Ifanylaboratoryreportisnotcompletedandturnedinbytheendofthequarter,thestudentmaybereceiveanIncompleteforthecourseatthediscretionoftheinstructors;alternativelya“zero”forthemissinglaboratoryreportwillberecordedandthefinalgradedeterminedaccordingly.

实验名称

（TitleofExperimetn）

血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定

实验日期

（DateofExperiment）

2013-12-13

实验地点（LabNo.）

第六实验室

合作者（Partner）

指导老师（Instructor）

总分

（TotalScore）

教师签名（Signature）

批改日期

（Date）

【实验报告第一部分（预习报告内容）：

实验原理、

实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、

实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：

XX】

1、实验原理：

蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。

不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。

利用这些性质的差别，可分离纯化各种蛋白质。

2、实验材料：

药品：

人血清、葡聚糖凝胶G-25（SephadexG-25）层析柱、二乙基氨基乙基（DEAE）纤维素离子交换层析柱、饱和硫酸铵溶液、各不同浓度的醋酸铵溶液、20%磺基水杨酸、1%BaCl2溶液。

仪器：

电泳仪、电泳槽

实验步骤：

实验流程：

粗提→脱盐→纯化→鉴定

操作步骤：

步骤

操作

盐析粗提

取血清0.8ml，边摇边缓慢滴加饱和硫酸铵溶液0.8ml，混匀室温放置10min，4000r/min离心10min。

凝胶柱层析除盐

1、沉淀（含球蛋白）加水0.6ml溶解。

2、过葡聚糖凝胶G-25层析柱（1.0×7